p53在单纯肠化、不典型肠化与胃癌中的表达

　　作者：赵著梅,张建平,杨京彦,刘文君,王妍　　作者单位：山东大学齐鲁医院病理科， 济南 250012

　　【摘要】目的探讨p53在单纯肠化、不典型肠化与胃癌中的表达。方法 观察肠化的病理形态特点,将肠化分为单纯肠化和不典型肠化。应用免疫组织化学Envison法检测22例单纯肠化、30例不典型肠化和40例胃癌中p53的表达,分析其与单纯肠化、不典型肠化及胃癌的关系。结果 p53在单纯肠化、不典型肠化及胃癌中的阳性率分别为13.6%、40.0%、55.0%,其表达逐渐增多。其中单纯肠化与胃癌比较差异有统计学意义(P<0.05),不典型肠化与胃癌比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 p53蛋白异常表达参与了胃粘膜肠化及癌变的过程,提示不典型肠化与胃癌关系密切。

　　【关键词】 单纯肠化,不典型肠化,蛋白质p53

　　To study the expressions of p53 in simple intestinal metaplasia(SIM), atypical intestinal metaplasia(AIM)and gastric adenocarcinoma. Methods The immunohistochemical EnVision method was used to determine the expressions of p53 in simple intestinal metaplasia(SIM), atypical intestinal metaplasia(AIM)and gastric adenocarcinoma. Results The positive rates of p53 in SIM, AIM and gastric adenocarcinoma was 13.6%, 40.0% and 55.0%. The expression of p53 in AIM was significantly higher than that in SIM. There was no significant differences between AIM and gastric adenocarcinoma. Conclusion p53 may play an important role in intestinal meteplasia and gastric carcinoma.

　　Key words: Simple intestinal metaplasia; Atypical intestinal metaplasia; Protein p53

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料

　　收集山东大学齐鲁医院病理科2005年1月至2006年12月肠化病例226例,观察其组织形态特点(男151例,女75例,年龄31～78岁,单纯肠化148例,不典型肠化78例),选取其中蜡块保存较好的胃镜活检及胃癌手术切除标本行免疫组化检测,其中单纯肠化病例22例,男15例,女7例,年龄32～73岁,平均年龄49.4岁。不典型肠化30例,男21例,女9例,年龄34～70岁,平均年龄53.2岁。胃癌40例,男28例,女12例,年龄32～77岁,平均年龄55.5岁。所有标本4?μm连续切片,分别作HE和免疫组织化学染色。常规HE染色,观察胃粘膜肠上皮化生的病理形态。单克隆抗体p53(即用型)及PV9000检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

　　1.2 免疫组织化学染色EnVision法检测p53在单纯肠化、不典型肠化与胃癌中的表达

　　切片脱蜡至水, PBS(pH 7.2～7.4)冲洗3×3?min;枸橼酸中(pH6.0)微波修复组织抗原98?℃,15?min,PBS冲洗3×3?min;内源性过氧化物酶阻断剂(试剂A)室温10?min,以阻断内源性过氧化物酶,PBS冲洗3×3?min;一抗p53室温下孵育150?min,PBS冲洗3×3?min;聚合酶辅助剂(试剂B),室温下20?min,PBS冲洗3×3?min;滴辣根酶标记羊抗兔/小鼠IgG多聚合体(试剂C),室温30?min;新鲜配制的DAB显色5～15?min,在显微镜下观察终止显色;苏木素复染,中性树胶封片,光镜下观察。每批染色均设立阴性对照,以PBS代替一抗作为阴性对照。检测p53蛋白,细胞核出现清晰的棕黄色颗粒为阳性染色。

　　1.3 统计学处理

　　采用SPSS 12.0统计软件进行统计学处理。不同胃粘膜病变中p53阳性率的比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 胃粘膜肠上皮化生HE染色结果

　　单纯肠化由柱状细胞和杯状细胞组成,杯状细胞及腺体形态规则,上皮无假复层改变。不典型肠化杯状细胞常呈扁卵圆形,极性紊乱,核仁明显;上皮细胞拥挤可呈假复层,细胞核泡沫状呈腺瘤样竖起;胃小凹可呈锯齿状。

　　2.2 p53免疫组化染色结果

　　p53在胃癌中的表达显著高于单纯肠化(χ2=10.091?8,P=0.001?5,P<0.05),单纯肠化与不典型肠化差异有统计学意义(χ2=4.298?0,P=0.038?2,P<0.05),不典型肠化与胃癌之间差异无统计学意义(χ2=1.544?1,P=0.214?0,P>0.05)。

　　p53在单纯肠化呈弱阳性,在不典型肠化呈中等强度阳性,在胃癌中呈强阳性表达,其表达强度逐渐增强。

　　3 讨 论

　　p53基因是基因研究中最广泛深入的肿瘤基因,人类肿瘤约50%以上与p53基因变化有关[2]。p53基因定位于人类17P13.1染色体上, 基因全长约16～20?kb,由11个外显子和10个内含子组成。它含有三个结构区,包括一个酸性的氨基末端区(1～75个氨基酸),一个碱性多螺旋羧基末端区(276～390个氨基酸)和一个中部区。中部区能直接与DNA结合,绝大多数p53基因的突变发生在此区域内,且多数为错义突变[3]。p53基因有野生型(wtp53)和突变型(mtp53) 两种,wtp53与调控细胞生长周期、调节细胞转化、DNA复制、诱导细胞程序性死亡有密切关系,在维持细胞增长、抑制肿瘤增殖过程中起重要作用[4]。几乎所有体细胞中均可检测到其编码蛋白的存在,与人类消化道肿瘤的发生密切相关[5]。当其转变为mtp53时,则失去对细胞生长的抑制作用,促进细胞转化和过度增殖,导致肿瘤的发生。

　　在胃癌形成的早期,即有p53基因的突变和p53蛋白的表达, p53基因与胃黏膜癌变可能有关键作用[6]。本实验结果显示，p53蛋白在单纯肠化、不典型肠化和胃癌中的表达逐渐上升,在胃癌中的表达显著高于单纯肠化,而不典型肠化与胃癌之间差异无统计学意义。说明p53基因突变在胃粘膜癌变前已经发生,属于癌变的早期事件,其表达水平随着恶性程度的增加而上升。乌新林等[7]的实验结果显示，正常胃组织中p53不表达, 但胃癌组织中p53基因表达阳性率为55.1%,其表达水平也逐渐升高,与本研究结果有一致性。提示不典型肠化与胃癌的关系密切,属癌前病变范畴。揭示单纯肠化多为炎症等因素造成胃粘膜上皮损伤后增生修复的适应性改变,不典型肠化为上皮适应性改变的同时伴有基因改变如某些基因表达异常等,在此基础上进一步发生癌变。

　　本研究结果表明,p53蛋白异常表达参与了胃粘膜肠化及癌变的过程,且在单纯肠化与胃癌间有显著性差异,不典型肠化与胃癌间的表达无显著性差异,提示不典型肠化与胃癌的关系密切,有癌变的趋向,属癌前病变的范畴。将肠上皮化生分为单纯肠化与不典型肠化简单实用,对于临床病理诊断有实用价值,但其具体的机制尚有待于进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1]张建平,于佩良,杨庆媛,等.胃粘膜肠上皮化生与胃癌关系的病理研究[J].山东医科大学学报,1997,35(3):203205.

　　[2]郭小红,赵丽萍,张乃珍,等.慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生中P16及P53蛋白的表达与意义[J].中国药物与临床,2007,7(10):781782.

　　[3]Kato S, Han S Y, Liu W, et al. Understanding the function structure and function mutation relationships of p53 tumor suppressor protein by high resolution missense mutation analysis[J]. PNAS, 2003, 100:84248429.

　　[4]Maehara Y, Tomoda M, Hasuda S, et al. Prognostic value of P53 protein expression for patients with gastric cancer: a multivariate analysis[J]. Br J Cancer, 1999, 79:12551261.

　　[5]庞英杰,王传新,冯进波,等. 基因hMSH2、hMLH1与p53突变型在散发性大肠癌患者的表达[J].山东大学学报：医学版, 2005,45(1):8385.

　　[6]迟青,滕红,尹鲁皖,等.p73、p53蛋白在胃癌中的表达及相关性研究[J].实用全科医学,2007,5(4):317319.

　　[7]乌新林,冯立民,王占民,等. p53、bcl2、cerbB2在胃癌及癌前病变中表达的意义[J].中国现代普通外科进展,2005,8(1):3739.