E2F3在大肠腺瘤、大肠癌组织中的表达及意义

　　作者：王树鸿，袁禧先，王凤荣，艾迎春 作者单位：1.佳木斯大学临床医学院，黑龙江 佳木斯 154007;2.佳木斯大学附属第一医院消化二科，黑龙江 佳木斯 154003

　　【摘要】 目的：本研究旨在探讨转录因子E2F3在大肠正常组织、大肠腺瘤组织及大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化方法检测E2F3在大肠正常黏膜、大肠腺瘤及大肠癌中的表达情况。结果：大肠癌组、大肠腺瘤组E2F3的表达率均明显高于正常组(57.5%，30% vs 0，P<0.01)，E2F3的表达率在肠癌组与腺瘤组间比较差别有显著性(P<0.05 )。E2F3表达水平同肿瘤的分化程度呈负相关，与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期呈正相关，与患者的年龄及性别均无相关性。结论：E2F3在大肠癌的发生发展中起促癌基因作用。E2F3的检测有助于大肠癌的早期诊断和分期，可为大肠癌的治疗提供基础理论资料及新的作用靶点。

　　【关键词】 E2F3;大肠腺瘤;大肠癌;免疫组化

　　E2F3 expression in human colorectal carcinoma and adenoma and its significance

　　WANG Shuhong1,YUAN Xixian2,WANG Fengrong1, AI Yingchun2

　　(1.Clinical Medical College of Jiamusi University, Jiamusi 154007, China; 2.The Second Department of Gastroenterology, the First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China)

　　Abstract：Objective： To study the expression and clinical significance of E2F3 in human colorectal carcinoma, colorectal adenoma and normal tissue. Methods：Immunohistochemistry was used to detect the E2F3 expression in 40 cases of human colorectal carcinoma tissue, 20 cases of colorectal adenoma tissue and 20 cases of normal colorectal tissue. Results： The positive expression rate of E2F3 in the colorectal carcinoma tissue was 57.5%. The positive expression rate of E2F3 in the colorectal adenoma tissue was 30%.The positive expression rate of E2F3 in the normal colorectal tissue was 0. There was a significant difference in the positive expression rate of E2F3 between the colorectal carcinoma tissue and colorectal adenoma tissue(P<0.05) and between the adenoma tissue and normal tissue (P<0.01).The E2F3 expression in the colorectal carcinoma tissue was negatively correlated with its differentiation grade, but the E2F3 expression in the colorectal carcinoma tissue was positively correlated with the lymph node metastasis, the depth of invasion and the Dukes stage.Conclusion：The E2F3 overexpression is correlated with the occurrence and development of colorectal carcinoma.

　　Key words: E2F3;colorectal adenoma ;colorectal carcinoma; immunohistochemistry

　　大肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤之一，其发病机制目前尚未完全明确。数据显示，大肠癌患者经过手术、化疗、放疗及其它综合治疗虽然能有一定疗效，但约有30%的患者在5年内死于复发和远处转移[1]。研究证明，转录因子E2F3在控制细胞周期的进展中起重要作用，但是对于E2F3在肿瘤形成中是促癌基因还是抑癌基因，目前还有争议。本试验应用SP免疫组化技术检测E2F3在大肠腺瘤及大肠癌组织中的表达并探讨其在大肠癌发生发展中的作用和临床意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　本研究收集了佳木斯大学附属第一医院自2007-01～2009-09间病理数据完整，均未经放疗、化疗而行手术切除并经病理证实的大肠癌40例。年龄36～87岁，平均(58±11)岁，其中男19例，女21例;高中分化癌16例，低分化癌24例;侵及浆膜层的24例，未侵及浆膜层的16例;淋巴结转移的17例，无淋巴结转移的23例。Dukes 分期：A期16例，B期7例，C期8例，D期9例。同时选择大肠腺瘤及正常大肠黏膜标本各20例。所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋处理。

　　1.2 方法

　　1.2.1 试剂

　　兔抗人E2F3多克隆抗体购自武汉博士德生物工程公司，广谱型S-P免疫组化试剂盒购自福建迈新生物技术开发公司。实验步骤：采用SP免疫组化法，严格按照试剂盒说明进行。微波枸橼酸盐抗体修复及DAB显色。

　　1.2.2 阳性结果判定标准

　　E2F3表达阳性结果为细胞浆及细胞核中有棕黄色颗粒或棕褐色颗粒，高倍镜下对每张切片随机选择5个视野，每个视野计数200个细胞。E2F3阳性细胞数<5%为阴性，≥5%为阳性，其中5%～25%为“+”，26%～50%为 “++”，>50%为“+++”。

　　1.3 统计学处理

　　应用SPSS16.0软件包进行数据分析，采用四格表χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 E2F3在大肠正常组织、大肠腺瘤组织、大肠癌组织中的表达

　　E2F3在大肠正常组织中为阴性表达，大肠腺瘤组阳性表达率为30%(6/20)，大肠癌组阳性表达率为57.5%(23/40)。E2F3在大肠腺瘤组织与大肠癌组织中的阳性表达率均显著高于正常组织(均P<0.01)，E2F3在大肠癌组织中的阳性表达率显著高于大肠腺瘤组织(P<0.05)。见表1。表1 E2F3在各组织中的表达(略)

　　2.2 E2F3与大肠癌临床病理因素的关系

　　E2F3的阳性表达率在侵及浆膜层组显著高于未侵及浆膜层组(P<0.01);淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组(P<0.01);E2F3的阳性表达率随Dukes分期增加而升高，各期间存在显著性差异(P<0.01);在组织学分级中，E2F3的阳性表达率在低分化组显著高于高中分化组(P<0.05);E2F3的表达与患者的年龄及性别均无相关性(P>0.05)。见表2。表2 E2F3表达与大肠癌临床病理因素关系(略)

　　3 讨论

　　E2F转录因子是细胞周期中G1期进入S期的重要调控因子。同时,E2F因子与肿瘤的发生和细胞凋亡有着紧密的关系。转录因子E2F最初是由于其对腺病毒E2启动子的转录活化作用而被发现的，目前已发现从E2F1到E2F8这8个不同的家族成员[2]，其中E2F1、E2F2及E2F3只能与pRB结合受其调控[3]。E2F家族的所有成员都有几个高度同源区，但是在与其所激活的蛋白结合时却又有高度的特异性，从而调控不同的靶基因[4]。E2F的靶基因包括细胞DNA合成及细胞周期进程的限速调解剂、原癌基因及肿瘤抑制基因等。研究证明,E2F在多数组织中发挥癌基因作用,如E2F过度表达可促使p53缺失小鼠皮肤肿瘤的形成[5],在前列腺癌、乳腺癌等组织也有E2F的异常表达。但是有的研究也表明E2F有抑制肿瘤的作用,如E2F功能缺失鼠易形成广泛肿瘤，如生殖道肉瘤，肺腺瘤和淋巴瘤[6]。E2F表现出的这两种不同作用可能与器官特异性及细胞所处的环境有关。研究表明,E2F3分别通过p16(Ink4a)-cycD/cdk4-Rb-E2F和Arf-mdm2-p53这两条重要的细胞增生调控和肿瘤监控途径,抑制pRb和p53,导致细胞周期调控的紊乱,从而促进肿瘤的发生发展[7]。pRb的去磷酸化(活化)形式通过结合并阻断某些转录因子的作用抑制细胞从G1期进入S期,阻止细胞转录,抑制DNA合成。E2F3可通过p1(Ink4a)-cycD/cdk4-Rb-E2F途径反馈抑制p21Cip1,使Rb蛋白发生磷酸化而失活。而在Arf-mdm2-p53途径,E2F3则是通过抑制Arf基因的表达从而对p53起抑制作用,可能导致p53抑癌途径功能失调,促进肿瘤发生发展[8]。

　　目前，关于E2F3在大肠腺瘤组织及大肠癌组织中的表达国内尚未见报道，本实验发现E2F3在大肠腺瘤组织和大肠癌组织中的表达均显著高于正常大肠黏膜组织，E2F3在大肠癌组织中的表达显著高于大肠腺瘤组织，表明E2F3在大肠癌中起促癌基因作用,其过度表达可能导致大肠癌的发生发展。E2F3的表达率在侵及浆膜层组显著高于未侵及浆膜层组,在淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组，低分化组显著高于高中分化组，并且随着临床分期的进展有增高趋势，提示E2F3可能与大肠癌的浸润程度、转移程度、恶性程度及发展程度相关，表明E2F3在促进大肠癌的演变过程中也发挥着重要的作用。本实验表明E2F3在大肠组织的发生发展及演变过程中发挥了重要作用。检测E2F3的表达能够为临床上较准确地区分正常组织、增生组织及癌组织的分化程度，有效评估大肠癌的恶性程度及预后提供科学依据，并为大肠癌的诊断和治疗提供新的思路和理论依据,在进一步探讨疾病的发生、发展过程、药物的作用机制、新药研发及临床治疗手段的选择方面有非常广阔的应用价值。

　　【参考文献】

　　[1]袁禧先,马晓颖,王凤荣,等.骨桥蛋白与缺氧诱导因子-1在大肠腺瘤及癌组织中的表达及意义[J].世界华人消化杂志，2009，17(30):31743179

　　[2]Parisi T,Yuan TL,Faust AM,et al.Selective requirements for E2f3 in the development and tumorigenicity of Rb-deficient chimeric tissues[J].Mol cell Biol,2007，27(6):22832293

　　[3]Muller H.The E2F transcription factors:key regulators of cell proliferation[J].Cell,1986，45:219228

　　[4]DeGregori J.The genetics of the E2F family of transcription factors:shared functions and unique roles[J].Bioch et Bioph Acts,2002，16(02):131150

　　[5]Pierce AM, Gimenez-Conti IB, Schneider-Broussard R, et al. Increased E2F1 activity induces skin tumors in mice heterozygous and nullizygous for p53[J]. Proc Nati Acad Sci USA,1998，95(15):88588863

　　[6]Yamasalo L,Jacks T,Bronson,et al.Tumor induction and tissue atrophy in mice lacking E2F-1[J].Cell,1996，85：537548

　　[7]Hurst CD, Tomlinson DC, WilliamsSV, et al. Inactivation of the Rb pathway and overexpression of both isoforms of E2F3 are obligate events in bladder tumours with 6p22 amplification[J].Oncogene,2008，27(19):27162727

　　[8]李家兵,李锦秀,姚惠,等.尿脱落细胞E2F3mRNA检测在膀胱癌诊断中的价值[J].川北医学院学报,2009，24(2):132134