血管内皮细胞生长因子D在食管鳞状细胞癌淋巴转移中的意义

　　作者：叶武，陈 洪 钱建忠，刘兵团 作者单位：东南大学附属江阴医院消化科，江阴 214400

　　【摘要】 目的：研究食管鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子D(VEGF-D)的表达及其与癌细胞淋巴转移的关系。方法：免疫组化法检测32例手术切除的食管鳞状细胞癌癌组织、癌旁组织、切缘正常组织中VEGF-D的表达水平。结果：食管癌组织中VEGF-D表达水平(43.8%)显著高于癌旁组织(15.6%)及正常组织(9.4%)(P<0.05);VEGF-D的表达与食管癌的淋巴转移、浸润深度、TNM分期有关(P<0.05)，而与食管癌的分化程度无关(P>0.05)。结论：VEGF-D在食管癌组织中表达增高，促进食管癌的淋巴转移。

　　【关键词】 食管鳞状细胞癌;血管内皮细胞生长因子D;淋巴转移

　　The significance of VEGF-D expression in lymphatic metastasis

　　of esophagus squamous cell carcinoma

　　YE Wu1, CHEN Hong2, QIAN Jianzhong3, et al (1Department of Gastroenterology, Affiliated Jiangyin Hospital of Southeast University, Jiangyin 214400; 2Department of Gastroenterology, Affiliated Zhongda Hospital of Southeast University; 3Department of Pathology, Affiliated Jiangyin Hospital of Southeast University)

　　[Abstract] Objective: To investigate the expression of vascular endothelial growth factor-D (VEGF-D) and the correlation with the lymphatic metastasis of esophagus squamous cell carcinoma. Methods: Immunohistochemical analysis was used to detect the expression of VEGF-D in carcinoma tissues, adjacent noncancerous tissues and corresponding normal tissues in 32 patients with esophagus squamous cell carcinoma. Results: VEGF-D was expressed 43.8% in carcinoma tissues, which was significantly higher than those in adjacent noncancerous tissues(15.6%) or corresponding normal tissues(9.4%)(P<0.05). The expression of VEGF-D was correlated with lymphatic metastasis, depth of invasion and TNM classification of esophagus squamous cell carcinoma (P<0.05). However, it was not related to the degree of cell differentiation of esophagus squamous cell carcinoma (P>0.05). Conclusion: High expression of VEGF-D in esophagus squamous cell carcinoma can promote lymphatic metastasis.

　　[Key words] Esophagus squamous cell carcinoma; Vascular endothelial growth fator-D; Lymphatic metastasis

　　食管癌为临床常见恶性肿瘤之一，由于食管无浆膜而淋巴引流丰富，使食管癌易在早期就发生淋巴结转移，而淋巴结转移与否是判断食管癌预后的一个主要因素。近年来国内外研究证明，血管内皮细胞生长因子D(vascular endothelial growth factor-D，VEGF-D)可介导肿瘤淋巴管生长，促进肿瘤细胞的淋巴转移。有关食管鳞癌组织中VEGF-D的表达情况的报道很少，本文就食管鳞状细胞癌组织中VEGF-D的表达及其意义进行研究。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 收集我院2007年1~7月有完整临床及病理资料的食管鳞状细胞癌根治术标本32例，其中男23例，女9例;年龄48~75岁，中位年龄59岁;浸润深度T19例，T28例，T314例，T41例;组织学分级：高分化10例，中分化18例，低分化4例;32例中有淋巴结转移13例，无淋巴结转移19例。所有病例术前均未行放、化疗。

　　1.2 方法 同一患者手术切除标本的食管癌组织、癌旁组织(距癌灶边缘2 cm)及切缘正常组织用10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，采用SABC免疫组织化学染色法检测VEGF-D表达。VEGF-D多克隆抗体及SABC试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司，抗原修复及染色程序按SABC试剂盒说明进行。以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

　　1.3 结果判定 光学显微镜下放大400倍观察VEGF-D的表达。以细胞浆呈现棕黄色颗粒为阳性细胞，每例切片选取阳性细胞较多的5个视野，计数阳性细胞占所有细胞的百分数，阳性细胞数>20%为阳性。

　　1.4 统计学方法 运用SPSS11.0统计软件进行?字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 VEGF-D的表达 正常食管组织及癌旁组织存在少量VEGF-D表达，主要位于上皮细胞胞浆，阳性率分别为9.4%(3/32)和15.6%(5/32);食管癌组织中VEGF-D表达主要位于肿瘤细胞的胞浆(图1)，阳性率为43.8%(14/32)，明显高于正常食管组织和癌旁组织(P<0.05)，正常食管组织与癌旁组织间VEGF-D的表达无统计学意义(P>0.05)。VEGF-D在食管癌组织中的表达与肿瘤分化程度无关，与肿瘤的浸润深度及TNM分期有关(表1)。

　　2.2 VEGF-D表达与淋巴结转移关系 VEGF-D(+)14例中，淋巴结转移阳性9例(64.3%)，VEGF-D(-)18例中，淋巴结转移阳性4例(22.2%)，两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。

　　3 讨 论

　　淋巴结转移是影响肿瘤患者预后的重要因素之一。肿瘤淋巴管生成及淋巴转移正成为肿瘤研究的新方向，而与淋巴管生成有关的调控因子，包括VEGF是近年来研究的热点。VEGF家族调控着血管生成、淋巴管生成、血管通透性及内皮细胞存活。VEGF-D为分泌型二聚体糖蛋白，可与血管内皮生长因子受体-3结合，促进淋巴管生成或扩张。一些研究已经表明，在人类许多恶性肿瘤中有淋巴管生长因子VEGF-D的表达，包括肺腺癌[1]、乳腺癌[2]、卵巢癌[3]、结肠癌[4]及胃癌等。Shida等[5]对50例胃癌手术标本的研究发现，VEGF-D与胃癌细胞的淋巴转移有关，对于评估胃癌患者的淋巴转移有临床意义。但食管癌中VEGF-D的表达情况报道较少。本组研究表明，在32例食管癌组织中VEGF-D阳性率为43.8%，明显高于正常组织(9.4%)和癌旁组织(15.6%);VEGF-D蛋白表达与肿瘤分化程度无关，与肿瘤的浸润深度及TNM分期有关，T3+T4显著高于T1+T2，Ⅲ+Ⅳ期显著高于Ⅰ+Ⅱ期;VEGF-D阳性组淋巴结转移发生率(64.3%)明显高于阴性组(22.2%)，二者差异有统计学意义，显示食管癌中VEGF-D表达与其淋巴结转移正相关。

　　VEGF-D促进肿瘤淋巴转移的机制尚未完全阐明。研究认为，VEGF-D与VEGFR-3结合后使VEGFR-3的酪氨酸激酶磷酸化，然后通过MEK/ERK和PI3/Akt途径引起发育中的淋巴管内皮细胞增生、分化和迁移，使淋巴管数目增多，增大肿瘤细胞与淋巴管内皮接触的表面积，增加淋巴管的通透性，改变淋巴管内皮黏附特性或表面趋化因子的表达等，从而促进肿瘤淋巴转移[6，7]。本组研究发现，VEGF-D蛋白表达阳性的食管癌淋巴结转移发生率高，说明VEGF-D参与淋巴管生成的调控，与食管癌淋巴管侵袭及转移有关。

　　【参考文献】

　　[1] Adachi Y, Nakamura H, Kitamura Y, et al. Lymphatic vessel density in pulmonary adenocarcinoma immunohistochemically evaluated with anti-podoplanin or anti-D2-40 antibody is correlated with lymphatic invasion or lymph node metastases[J]. Pathol Int, 2007,57(4):171-177.

　　[2] Nakamura Y, Yasuoka H, Tsujimoto M, et al. Prognostic significance of vascular endothelial growth factor D in breast carcinoma with long-term follow-up[J]. Clin Cancer Res, 2003,9(2):716-721.

　　[3] Yokoyama Y,Charnock-Jone DS,Licence D,et al.Vascular endothelial growth factor-D is an independent prognostic factor in epithelial ovarian carcinoma[J]. Br J Cancer,2003,88(2):237-244.

　　[4] Onoqawa S，Kitadai Y, Tanaka S, et al. Expression of VEGF-C and VEGF-D at the invasive edge correlates with lymph node metastasis and prognosis of patients with colorectal carcinoma[J]. Cancer Sci, 2004,95(1):32-39.

　　[5] Shida A, Fujioka S, Kobayashi K, et al. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF)-C and -D in gastric carcinoma[J]. Int J Clin Oncol, 2006,11(1):38-43.

　　[6] Saharinen P,TuomasT,MarikaJ,et al.Lymphatic vasculature:development, molecular regulation and role in tumor metastasis and inflammation[J]. Trends Immunol,2004,25(7):387-395.

　　[7] Nathanson SD.Insights into the mechanisms of lymph node metastasis[J]. Cancer,2003,98(2):413-423.