CD44v6mRNA和HSP70mRNA在胃癌中的表达及研究

　　作者：陈秀玲 杨燕君 张江兰 苏华 郜攀峰 作者单位：河北北方学院大学生科协 075000

　　【摘要】 目的：检测CD44v6mRNA和HSP70mRNA在胃癌组织中的表达，探讨CD44v6mRNA和HSP70mRNA在胃癌发生发展中的作用。方法：利用核酸原位杂交技术对39例胃癌组织进行检测。结果： CD44v6mRNA和HSP70mRNA在胃癌组织表达的阳性率都为61.54%(24/39)，CD44v6mRNA和 HSP70mRNA在高分化管状腺癌与低分化管状腺癌中的表达都有显著性差异(P<0.05)，但HSP70mRNA在胃癌组织的表达与性别、年龄、浸润深度及淋巴结有无转移都无关(P>0.05)，而CD44v6mRNA与淋巴结有无转移有关(P<0.05)。结论：CD44v6mRNA和HSP70mRNA在胃癌组织都有较高的表达，两者均可作为评估胃癌预后的指标。

　　【关键词】 胃癌;CD44v6基因;热休克蛋白70基因;原位核酸分子杂交

　　Study of Expression of CD44v6mRNA and HSP70mRNA in Gastric Carcinoma

　　CHEN Xiu-ling，YANG Yan-jun，ZHANG Jiang-lan, et al

　　Hebei North University，Zhangjiakou, 075000，China

　　【ABSTRACT】 Objective: To study the expression of CD44v6mRNA and HSP70mRNA and explore its effect on the nephrogenesis and development of humangastric carcinoma. Methods: The expression of CD44v6mRNA and HSP70mRNA in 39 cases of gastric carcinoma were detected by in situhybridization method. Results: The positive expression rates of CD44v6mRNA and HSP70mRNA in gastric carcinoma were 52.78%(19/36). There was a significant statistic difference between the expression of HSP70mRNA in well-differentiated adenocarinoma and moderately and poorly-differentiated adenocarinoma(P<0.05). But the positive rate of CD44v6mRNA and HSP70mRNA were not related to age, sex, invasive depth and lymphnode metastases(P>0.05), the positive rate of CD44v6mRNA wasrelated to the lymphnode metastases(P<0.05). Conclusion: CD44v6mRNA and HSP70mRNA had high expression rates in the tissue of gastric carcinoma. Combining the detection of the expression of these two mRNA might serve as an important index to evaluate prognosis of gastric carcinoma.

　　【KEY WORDS】 gastric cancer; CD44v6mRNA; heat shock protein 70mRNA; in situhybridization

　　胃癌是严重威胁着人类健康最常见的恶性肿瘤之一，全国年平均死亡率为25.16/10万人口[1]。为阐明CD44v6和HSP70与胃癌的发生发展、侵袭转移及预后关系。我们采用高度敏感的催化信号放大(catalyzed sigmal amplification,CSA)原位杂交技术对39例胃癌组织中CD44v6mRNA和HSP70mRNA的表达进行检测，旨在分子水平探讨两者的表达与胃癌临床病理资料的相关性。

　　1 临床资料

　　1.1 一般资料 收集河北北方学院附属第一医院肿瘤外科2002～2004年间切除的39例胃癌标本。其中男27例，女12例，年龄分布在37～79岁，平均年龄57.91岁，中位年龄59岁。所有病例均无同时患有其他恶性肿瘤，患者手术前均未经放疗或化疗。术后立即取材，以4%多聚甲醛/0.1MPBS(pH=7.2)(内含0.1%DEPC)固定约3h，常规脱水、浸蜡、包埋。

　　1.2 病理学诊断标准 胃癌病变标本经常规脱水、浸蜡、包埋、切片、HE染色，由两名有经验的病理学教授诊断，并按WHO分类中的TNM分期进行组织学病理学分型分级，观察有无淋巴结转移。管状腺癌30例(高、中、低分化管状腺癌分别为12例、6例、12例)，粘液腺癌9例。有淋巴结转移27例，无淋巴结转移12例。

　　1.3 试剂 ⑴CD44v6mRNA和HSP70mRNA原位杂交试剂盒均购自博士德生物工程有限公司。⑵CD44v6mRNA探针序列为：①5’—GCAAT TCGAT TTGAA TATAA CCTGC CGCTA—3’; ②5’—TGAGC AGCGG CTCCT CCAGT GAGAA GAGCA—3’; ③5’—ACTCC AGACC AGTTT ATGAC AGCTG ATGAG—3’。⑶HSP70mRNA的探针序列为：①5’—GCCGC AAGTT CGGCG ACCCG GTGGT GCAGT CGGAC—3’; ②5’—ACAGG CTGGT GAACC ACTTC GTGGA GGAGT TCAAG—3’。

　　1.4 CD44v6mRNA和HSP70mRNA原位杂交 石蜡连续切片，厚度7μm,将切片贴于涂有多聚赖氨酸的载玻片上。常规脱蜡、水化，继之以原位杂交试剂盒说明书进行操作。其中个别步骤反应时间加以调整(胃蛋白酶消化时间为5min)。用已知胃癌CD44v6mRNA和HSP70mRNA阳性片分别作阳性对照，以反应中不加杂交液作为阴性对照。

　　1.5 结果判定 光镜下观察，CD44v6mRNA和HSP70mRNA表达阳性的细胞胞浆呈棕黄色。阳性细胞数>10%者为阳性,阳性细胞数<10%者为阴性。

　　1.6 统计学处理 所有数据均采用Access建立数据库，并使用SPSS10.0进行统计学处理。

　　2 结果

　　39例胃癌中，CD44v6mRNA和HSP70mRNA阳性表达都为24例阳性率为61.54%，CD44v6mRNA和HSP70mRNA阳性表达与性别、年龄、浸润深度无关，都与胃癌的分化程度有关(P<0.05)，且CD44v6mRNA与淋巴结的转移有关(P<0.05 )(见表1) 表1 CD44v6mRNA和HSP70mRNA的表达与临床病理特征的关系注：CD44v6mRNA在高分化管状腺癌和低分化管状腺癌中表达比较△P<0.05;HSP70mRNA在高分化管状腺癌和低分化管状腺癌中表达比较▲P<0.05;CD44v6mRNA在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中表达比较*P<0.05

　　胃癌中CD44v6mRNA的表达和HSP70mRNA的表达无明显相关性(r=0.242,P=0.130)(见表2)表2 CD44v6mRNA和HSP70mRNA表达的相关性

　　3 讨论

　　细胞粘附分子(CAMs)及其配基间的结合是介导细胞与细胞或细胞与基质的相互识别和作用的分子基础，从而在调节细胞增殖、分化、迁移等方面起着重要作用。同样，肿瘤细胞的发生、发展、侵袭转移与CAMs密切相关[2]。粘附分子表达的异常增高导致肿瘤细胞具有了从原发部位脱落向周围正常组织侵袭的能力，而正是这种侵袭能力的大小决定了肿瘤恶性程度的高低。CD44是一个近几年来倍受关注的粘附分子，在细胞恶变转化过程中其结构和功能均发生显著变化，从而影响转化后肿瘤细胞侵袭转移行为。CD44根据基因外显子表达方式的不同编码两种不同的蛋白即标准型CD44s和变异型CD44v，在不同的细胞上由于CD44结构不同而介导不同的功能，CD44s在生理状态下主要参与细胞与细胞、细胞与基质之间的黏连，介导淋巴细胞的归巢及细胞的迁移。而CD44v主要出现在机体的病理过程，特别是肿瘤的发生发展过程中[3]。CD44v6是CD44的一种拼接变异体，CD44v6基因位于人类第11号染色体短臂上，主要参与细胞-细胞或细胞-基质间的特异性粘连过程。CD44v6 完整基因组在染色体DNA上大约跨越50Kb,有20个高度保守的外显子[4]。本研究结果显示：CD44v6在胃癌组织中随着分化程度的降低，表达阳性率增高，在低分化腺癌中的表达显著高于高分化腺癌中的表达(P<0.05)，且结果还显示：有淋巴结转移组阳性率显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结果表明：CD44v6可能通过促使肿瘤细胞与血管内皮细胞和细胞外基质的粘附，促使肿瘤细胞向基质浸润，影响瘤细胞骨架蛋白的聚集和分布，从而影响瘤细胞的迁移和运动能力。

　　热休克蛋白(Heat Shock Protein HSP)是机体在应激状态下合成的一种特殊蛋白质，生理状态下其主要的功能是促进与维持细胞内多肽的转运、装运和降解，调节正常细胞的生长、发育、分化及死亡。非生理状态下HSP的合成提高了细胞的生存能力[5]。近年来的研究侧重于HSP70蛋白与肿瘤的关系，但从分子水平探讨HSP70mRNA与肿瘤关系的报道少见。因此，我们应用高灵敏度的核酸原位杂交的方法对39例胃癌中HSP70mRNA的表达进行了检测，结果发现：HSP70mRNA在低分化腺癌中的表达显著高于高分化腺癌中的表达(P<0.05)，且随着分化程度的降低，表达阳性率增高。因此，我们可以认为HSP70与胃癌关系密切，其高表达可作为判断胃癌预后的指标。对此可能的解释是：HSP70的高表达一方面介导癌基因及抑癌基因产物的构像成熟、跨膜转运，另一方面介导错配蛋白的降解，协调肿瘤细胞的蛋白质代谢平衡，使肿瘤细胞无限增殖。

　　本研究还对胃癌组织中CD44mRNA的表达进行相关性分析，结果显示二者无明显相关性，但本研究结果显示;分化差的胃癌组织较分化好的二者表达的阳性率高，表明分化越差基因转录越高，即基因表达与肿瘤的恶性程度呈正相关，提示CD44mRNA和HSP70mRNA能够作为胃癌恶性程度分化程度一个重要参数。因此，联合检测CD44mRNA和HSP70mRNA的表达对判断胃癌的恶性程度、预测淋巴结转移及预后有重要意义。

　　【参考文献】

　　1 祁晓莉，戴杰，薄爱华，等.细胞凋亡基因bcl-2和bax在胃癌和癌旁粘膜组织中表达的研究[J].河北北方学院学报，2004，21(5):41-44

　　2 谷化平，尚培中，纪小龙，等.结直肠癌细胞黏附分子CD15表达的预后意义[J].世界华人消化杂志，1999，7(6)：542-543

　　3 陈冰，黄文斌.CD44v6在结直肠癌中表达及其临床意义[J]. 世界华人消化杂志，2002，10(4):471-472

　　4 Screaton GR,Bell MV,Jackson DG, et al.Genomic structure of DNA encoding the lymphocyte homing receptor CD44 reveals at least 12 alternatively spliced exons[J].Proc Natl Acad Sci USA,1992，89:12160-12164

　　5 邢艳，唐中，廖英，等.热休克蛋白70在卵巢癌组织中的表达及其与雌、孕激素受体的相关性[J].四川大学学报(医学版)，2004，35(4):468-488