慢性胃炎、异型增生和胃癌组织中bax、iNOS表达与幽门螺杆菌感染的关系

　　作者：于永强 沈金库 高会斌 孙剑经 齐维娟 薄爱华 作者单位：(1.河北北方学院附属第一医院消化内科， 河北 张家口 075000; 2.河北北方学院实验中心， 河北 张家口 075000)

　　【摘要】 目的：探讨不同胃粘膜病变组织中bax基因蛋白、诱导型NO合酶(iNOS)的表达及其与幽门螺杆菌(HP)感染相关性。方法：选取我院2002～2004年102例胃粘膜组织标本及患者血清。其中慢性胃炎15例，异型增生22例，胃癌65例。应用免疫组化检测上述组织的bax、iNOS表达，应用组织切片革兰染色和酶联免疫法分别检测组织中的HP及血清HP抗体。结果：在慢性胃炎、异型增生、胃癌组织中HP的检出率分别为：7/15(46.7%)、15/22(68.2%) 34/65(52.3%)。且上述各组中bax、 iNOS 的表达与HP感染存在正相关性。不同胃粘膜病变组织中，HP阳性组bax、 iNOS阳性表达率显著高于HP阴性组。结论：bax、 iNOS的表达与HP感染密切相关，HP可能通过NO的诱导及bax调控使细胞增值加速和凋亡异常而参与胃癌的发生、发展过程。

　　【关键词】 慢性胃炎; 异型增生; 胃癌 幽门螺杆菌; bax基因; iNOS

　　基金项目：张家口科学技术研究与发展指导计划项目(编号：040222)

　　The Relationship between Expression of Bax,iNOS and HP Infection in Gastric

　　Carcinoma,Gastric Epithelial Dysplasia and Inflammatory Gastric Musosa

　　YU Yongqiang,SHEN Jinku,GAO Huibin,et al

　　Department of Gastroenterology,The First Affiliated Hospital,

　　Hebei North University,Zhangjiakou,075000,Hebei,China

　　【ABSTRACT】 Objective: To investigate the expression of bax,iNos in different gastric mucosa lesion and their relationship with the infection of HP. Methods: The total gastric tissues and the corresponding blood serum had been collected from 102 cases, including 15 cases with inflammatory gastric mucosa,20 cases with gastric epithelial dysplasia and 65 cases with gastric carcinoma. In all cases,immunohistochemical streptavidin/peroxidase(SP)method was used to assess the expression of bax and iNos; HP was detected by Gram staining and ELISA in tissues and blood serum respectively. Results: The positive rate of HP was 7/15(46.7%)in inflammatory gastric mucosa, 15/22(68.2%)in gastric epithelial dysplasis and 34/65(52.3%)in gastric carcinoma.Expression of both bax and iNos had a positive relationship with HP infection; In HP positive group the expression of bax and iNos were higher than that in HP negative group. Conclusion: Expression of bax and iNos showed significance relationship with the infection of HP,it might induce proliferation and apoptosis of gastric epithelial cells,this might play an important role in the carcinogenesis of gastric carcinoma.

　　【KEY WORDS】 Inflammatory gastric mucosa; Gastric epithelial dysplasia; Gastric cancer; HP; bax; iNOS

　　胃癌的发生大部分由正常粘膜逐渐演变为癌前病变，并发展成癌[1] ,粘膜上皮异型增生已被公认为癌前病变。HP感染被证实是胃粘膜病变最重要的启动因素[2]， 一氧化氮(NO)作为一种自由基能直接损伤细胞DNA，诱导细胞凋亡[3]，bax 基因蛋白是bcl 2基因家族中促进细胞凋亡的基因，三者之间的关系尚无文献报导。为探讨HP感染与iNOS及bax基因蛋白在胃癌发生过程中的表达情况，我们采用SP免疫组化法及酶联免疫法检测102例胃组织标本，旨在探讨胃癌的发生、发展过程中的一些外界和内在因素作用的机制。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 我院2002～2004年102例胃组织标本，经内镜及组织病理诊断65例胃癌、22例异型增生和15例慢性胃炎;男性66例，女性36例;年龄28～72岁，中位年龄54.6岁。标本取材后经4%甲醛固定，常规石蜡包埋，厚5μm连续切片。普通光镜下进行确诊，同时采集102例标本血清，应用酶联免疫法进行血清HP抗体测定。

　　1.2 主要试剂 美国Santa.Cruz公司生产抗人bax单克隆抗体、iNos多抗。北京中山生物技术有限公司提供DAB试剂盒。美国美利泰格公司生产HP抗体检测试剂盒。

　　1.3 免疫组化法 所有组织切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，用pH6.0的枸橼酸盐缓冲液于微波炉内行抗原修复(95℃ 10min)，每张切片滴加I抗bax、 iNOS。每批试验用已知的待检抗体检测阳性的组织切片作阳性对照，用PBS取代作阴性对照。

　　1.4 判断标准 iNOS、 bax以细胞浆染成棕黄色颗粒为阳性。每张切片随机观察10个高倍视野，每视野阳性细胞数≥75%定为阳性病例。HP检测两种方法均阳性，定为阳性感染。

　　1.5 统计学方法 采用χ2 检验和精确概率法检验。

　　2 结果

　　2.1 不同疾病组织HP检出率 慢性胃炎、异型增生、胃癌组织 HP检出率分别为：46.7%、68.2%、52.3%。异型增生、胃癌组织 HP检出率高于慢性胃炎组织(见表1)。

　　2.2 bax和iNOS的表达从慢性胃炎、 异型增生到 胃癌组织逐渐增高。异型增生、 胃癌组织表达率与慢性胃炎相比有显著差异( P<0.05)，各组之间bax、iNOS表达率与各组的HP感染阳性率之间呈正相关。各组HP(+)的bax、iNOS 表达率显著高于HP(-)组，均有显著性差异(P<0.05)(见表1)。2007年10月于永强等：慢性胃炎、异型增生和胃癌组织中bax、iNos表达与幽门螺杆菌感染的关系

　　3 讨论

　　bcl2基因家族包括作用相反的两个亚类，促进细胞凋亡的 bax[4]等基因和抑制细胞亡的bcl2等基因，细胞内的bax/bcl2比例对细胞凋亡的发生具有重要调控意义[5]。NO是一种具有广泛生物效应的小分子化合物，对机体具有“双刃”作用，即是一种内源性活性物质有广泛生理功能，又是一种重要的炎性介质。NO不仅能介导 DNA损伤，且可直接损伤细胞DNA诱导细胞凋亡参与细胞的代谢、突变、死亡。HP与多种胃十二指肠疾病的生理有关，其除能产生各种毒素和有毒的酶直接破坏胃粘膜屏障外，还能诱发机体产生炎症和免疫反应，两者产生的细胞因子和炎性介质可能诱导iNOS的表达，增加NO 的释放。

　　一般认为胃癌的发生大部分由正常胃粘膜在多种诱因的刺激下，逐步经过癌前病变发展成癌，其中HP经多年研究证实为导致胃癌发生的重要因素，但其机制至今尚未完全明了。本试验表明，bax异型增生及癌组织中表达高于胃炎组织，iNOS的表达亦是如此，提示bax和iNOS在胃癌的发生发展中起协同作用。另外，试验结果还显示bax和iNOS的表达率与HP感染阳性率也协调同步增高呈正相关。

　　HP感染上调iNOS表达使NO增多可能是机体防御HP入侵的重要手段也可能是粘膜炎性反应乃至癌变的重要因素。bax和iNOS的表达率与HP感染阳性率协调同步增高，表明HP感染与iNOS、bax表达之间有某些内在关联。

　　通过本实验显示，胃癌的发生可能是一种多因素、多机制共同作用的结果，其中HP感染作为一种外源性启动因素，通过某种机制参与病变过程中iNOS及bax基因等异常表达，而对细胞增殖和凋亡进行调控，从而使突变细胞积累发展成癌。HP检测联合测定iNOS及bax的表达对临床胃癌早期诊断治疗有重要意义。

　　【参考文献】

　　1 Chan AO,Luk JM,Hui WM,et al.Molecular biology of gastric carcinoma: from laboratory to bedside[J].Gastroenterol Hepatol,1999,14:11501160

　　2 Weidner N.Tumoural vascularity as aprognostic factor in cancer patients:the evidence continues to growth[J].J Pathol,1998,184:119122

　　3 Moncada SR,Palmer MJ,Higgs D.Nitric oxide:physiology,pathophysiology and pharmacology[J].Pharmacol Rev,1991,43:109142

　　4 Oltari Z,Milliman C,Korsmeyerr SJ.Bcl2 heterodimerizes in vivo with a conserved homology,bax,that accelerates programmed cell death[J].cell,1993,74:609619

　　5 Wang H,Liu LN,Zhang S,et al.Bcl2 protein expressions and their association with helicobactor pylori infection[J].China J Mod Med,2005,15(23):35733575