胆胃宁对乙醇性胃黏膜损伤保护作用的实验研究

　　作者：刘永霞 顾庆华， 倪润洲， 肖明兵， 魏 群， 江 枫 作者单位：1南通大学附属医院消化内科， 南通 226001， 2南通市中医院消化内科

　　【摘要】 目的：研究中药胆胃宁对无水乙醇所致胃黏膜损伤的保护作用及作用机制。方法：40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和胆胃宁低、中、高剂量组共5组。正常对照组和模型组均以1 ml生理盐水灌胃，胆胃宁组分别予胆胃宁1 ml、2 ml、4 ml 灌胃，2 h后除正常对照组外均予无水乙醇灌胃。再过2 h后处死大鼠，观察胃黏膜改变并测定溃疡指数及溃疡抑制率以及胃黏膜病理组织学改变，检测胃黏膜丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、前列腺素E2(PGE2)等指标。结果：胆胃宁能减轻乙醇所致胃黏膜损伤，抑制溃疡形成，改善胃黏膜组织学损害。胆胃宁尚可有效抑制乙醇损伤胃黏膜所致的SOD和PGE2降低以及MDA升高，且具有剂量依赖性。结论：胆胃宁可有效预防乙醇所致胃黏膜损伤，其机制可能与减轻脂质过氧化，提高抗氧化活力和PGE2水平有关。

　　【关键词】 胃黏膜损伤;胆胃宁;无水乙醇;动物模型;大鼠

　　Laboratory study on the protective effect and the mechanism of DWN on gastric mucosal damage

　　1LIU Yongxia，2GU Qinghua，1NI Runzhou，et al (1Department of Gastroenterology，Affiliated Hospital of Nantong University，Nantong 226001)

　　[Abstract] Objective: To study the protective effect and the mechanism of Chinese herbal medicine Dan-Wei-Ning(DWN) on alcohol-induced gastric mucosal damage. Methods: Forty SD rats were randomly divided into five groups: control group， model group and three DWN-treated groups. The rats in three treated groups were given 1 ml， 2 ml and 4 ml of DWN respectively by intragastric administration， while the rats in control group and model group were given 1 ml of normal saline. Two hours later all rats except those in the control group were given 1 ml of absolute alcohol intragastrically. After another two hours， the rats were sacrificed and their stomachs were taken out to observe the mucous injury and determine the ulcer index and inhibition rate. Pathological changes were observed under microscope. Maleic dialdehyde (MDA)， superoxide dismutase (SOD)， and prostaglandin E2 (PGE2) were determined in the gastric homogenate. Results: DWN could lessen gastric mucous injury， inhibit ulcerous formation and improve pathological changes of damaged gastric mucosa induced by alcohol. DWN potently inhibited both decrease of SOD and PGE2 and increase of MDA in damaged gastric mucosa induced by ethanol in a dose-dependent manner. Conclusion: DWN has a potent protective effect on ethanol-induced gastric mucosal injury by the reduction in lipid peroxidation， augmentation in the antioxidant activity and increase in PGE2.

　　[Key words] Gastric mucosal damage;Dan-Wei-Ning;Absolute alcohol;Animal model;Rat

　　胆胃宁是在古方大柴胡汤基础上加减而成的经验方，具有活血化瘀、理气止痛、收敛制酸、健胃消食的作用。经临床观察发现，胆胃宁对胃炎、胃溃疡具有较好疗效[1]。为客观评价此作用，并为临床推广和应用胆胃宁提供科学依据，我们建立了胃黏膜损伤动物模型，研究胆胃宁对胃黏膜的保护作用及其机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物 健康近交系Sprague Dawley(SD)大鼠共40只，雌雄各半，体重180~200 g，由南通大学实验动物中心提供。

　　1.2 实验药品及试剂 胆胃宁：由炒柴胡、炒黄芩、炒枳壳、法半夏、制军、杭白芍、炒白术、广郁金、广木香、川厚朴、粉甘草等中药组成的中药方剂，南通市中医院制剂室提供，含生药1 g/ml，密封储存于4 ℃冰箱内备用;微量蛋白测定试剂盒、一氧化氮试剂盒、微量丙二醛(MDA)测定试剂盒、谷胱甘肽测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测试盒均购自南京建成生物工程研究所，前列腺素E2(PGE2)测定试剂盒购自泛邦化工技术开发有限公司，并按说明书操作。

　　1.3 主要仪器设备 JD801D图像分析系统、低温离心机、酶标仪、半自动生化分析仪、匀浆机等。

　　1.4 动物分组与给药及大鼠胃黏膜损伤模型的建立 SD大鼠40只随机分为正常对照组，模型组，胆胃宁低、中、高剂量组共五组，每组8只，雌雄各半。实验前所有大鼠均禁食24 h，禁水2 h，胆胃宁低、中、高剂量组分别予胆胃宁1 ml、2 ml、4 ml 灌胃，正常对照组和模型组均以1 ml生理盐水灌胃，2 h后除正常对照组以1 ml生理盐水灌胃外，其余各组均予1 ml无水乙醇灌胃，再过2 h，将所有大鼠轻度乙醚麻醉后剖腹取胃标本，肉眼观察胃黏膜改变并测定溃疡指数及溃疡抑制率。并在腺胃区的相同部位切取组织块0.5 cm×1.0 cm，10%甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋、4 μm厚度连续切片，HE染色，观察胃黏膜组织的病理变化。最后制备胃组织匀浆，检测MDA、SOD、一氧化氮(NO)、PGE2等指标。

　　1.5 溃疡指数和溃疡抑制率的计算 溃疡指数：使用捷达JD801D图像分析系统进行分析，分别勾画出全胃面积和溃疡面积，利用计算机进行处理计算出溃疡面积占全胃面积的百分比即溃疡指数。

　　溃疡抑制率(100%)=[(模型组溃疡指数-治疗组溃疡指数)/模型组溃疡指数]×100%

　　1.6 统计学方法 以Stata8.0统计软件进行统计分析，数据采用x±s表示，采用单因素方差分析，P<0.05示差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 大体观察 正常对照组大鼠胃黏膜光滑，无充血水肿及溃疡出血灶(图1A);模型组大鼠胃黏膜明显充血水肿，呈鲜红色点状、条索状或片状出血(图1B);胆胃宁低剂量组大鼠黏膜轻度充血水肿，伴有散在出血点或条索状出血(图1C);胆胃宁中剂量组损伤程度进一步改善，黏膜已少有出血坏死(图1D);胆胃宁高剂量组除个别样本可见黏膜轻度水肿外，其他情况与正常对照组无明显异常(图1E)。

　　2.2 胃黏膜组织学改变 正常对照组大鼠胃黏膜结构正常，层次清楚，黏膜层无炎性细胞浸润(图2A);模型组上皮局部腺体结构紊乱，浅层胃底腺破裂，黏膜表面及腺腔内较多脱落的上皮细胞碎片及少量炎性渗出物，固有层深部可见以淋巴细胞为主的炎细胞浸润。黏膜层、黏膜下层血管扩张充血，有大量红细胞聚集(图2B);胆胃宁低剂量组胃黏膜局部腺体排列不整齐，固有层深部伴少量炎性细胞浸润，可见黏膜及黏膜下血管充血(图2C);胆胃宁高剂量组上皮基本完整、连续，固有层深部可见少量淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，胃黏膜充血较轻微(图2D)。胆胃宁中剂量组胃黏膜组织学改变介于低、高剂量组之间(图2E)。

　　2.3 各组大鼠胃黏膜损伤指数及损伤抑制率 胆胃宁能明显减轻无水乙醇对胃黏膜的损伤程度，降低损伤指数，提高损伤抑制率。随着胆胃宁剂量的增加，溃疡面积进一步缩小，损伤抑制率进一步提高。显示胆胃宁对胃黏膜具有很好的保护作用并呈明显的剂量依赖性(见表1)。

　　2.4 胆胃宁对大鼠损伤胃组织SOD、MDA、PGE2的影响 见表2。由表2可见，模型组与正常对照组比较，SOD和PGE2显著降低，而MDA显著升高。胆胃宁可有效升高胃黏膜组织中SOD和PGE2含量，而降低MDA水平。随着胆胃宁剂量增加，SOD和PGE2水平进行性升高，MDA水平则进行性降低，且具有明显的量效关系。

　　3 讨 论

　　糜烂性胃炎、胃溃疡及急性胃黏膜病变是临床常见疾病，共同的病理改变是胃黏膜损伤。尽管其病因众多，但发生机理有许多共同之处。本研究采用无水乙醇灌胃建立大鼠急性胃损伤模型，方法简便且重复性好。造成大鼠胃黏膜损伤的发生率为100%，为理想的研究胃黏膜损伤的动物模型。

　　本研究结果显示，胆胃宁预防用药组乙醇性胃黏膜溃疡与出血均明显减轻，组织病理学腺体结构破坏和炎细胞浸润显著改善。在高剂量胆胃宁组中，胃黏膜大体形态和组织学表现已与正常相仿。表明胆胃宁能有效预防乙醇性胃黏膜损伤。

　　有研究表明，自由基在胃黏膜损伤的病理生理过程中起了重要作用[2-3]。由自由基引发的细胞膜脂质过氧化可导致胃黏膜上皮细胞变性，通透性增加，出现糜烂、溃疡。MDA是脂质过氧化反应的代谢产物，测试其含量可间接地反映出机体细胞受自由基攻击的严重程度。SOD则是清除氧自由基的主要酶，能抑制脂质过氧化物，促进损伤胃黏膜愈合。本研究结果显示，乙醇性急性胃黏膜的组织中MDA含量明显增高，SOD含量明显降低，验证了自由基在乙醇性胃黏膜损伤中的作用。胆胃宁可有效降低损伤胃黏膜组织中MDA水平，提高SOD水平，且具有明显的量效关系，提示胆胃宁抗自由基功效是其防止胃黏膜损伤的重要机理。

　　现代药理研究证实，柴胡所含成份多糖体及多酚物质、黄芩中有效成份黄酮类具有抗氧化、清除自由基、抗炎、阻止钙通道等多种作用[4]。枳壳、半夏、白术、甘草可明显降低应激后过高的儿茶酚胺含量，增加血浆SOD含量，明显降低应激性胃肠出血发生率[5]。推测其机理可能是通过减少应激后胃黏膜血流灌注，以改善胃黏膜缺血，通过清除自由基以减轻应激后的过氧化损伤而有效防治应激性溃疡发生。

　　本研究证实，乙醇导致胃黏膜损伤与其抑制PGE2的合成有关。预防性给予胆胃宁能减轻乙醇对大鼠胃黏膜PGE2合成的抑制作用，且此作用具有剂量依赖性。现代药理学研究表明，白术、白芍可诱导内源性保护因子PGE2的产生和释放，可有效防止有害物质对黏膜上皮细胞的损伤和致坏死作用。促进胃上皮细胞更新，增强防御功能，发挥细胞保护作用，并有良好的局部止血作用[6]。厚朴为辛、苦、温之品，可不同程度抑制胃肠收缩功能，降低胃肠肌兴奋性，此作用可促进敛疮、生肌、止血[7]。其所含厚朴酚能明显提高正常大鼠胃组织内PGE2含量，可通过抑制乙醇诱导的大鼠胃黏膜PGE2的下降来发挥胃黏膜保护作用，对实验性胃溃疡有防治作用[8]。

　　【参考文献】

　　[1] 顾庆华，邵荣世，罗佩英，等.胆胃宁颗粒剂治疗胆汁反流性胃炎的临床研究[J].中医药学刊，2004，22(11):2040-2042.

　　[2] Birdane FM， Cemek M， Birdane YO， et al. Beneficial effects of Foeniculum Vulgare on ethanol-induced acute gastric mucosal injury in rats[J]. World J Gastroenterol， 2007， 13(4):607-611.

　　[3] Kirkova M， Kesiova M， Konstantinova S， et al. In vivo effects of amtolmetin guacyl on lipid peroxidation and antioxidant defence systems in different models of gastrointestinal injury[J]. Auton Autacoid Pharmacol，2007， 27(1):63-70.

　　[4] 刘 雄， 高建德. 黄芩研究进展[J]. 甘肃中医学院学报， 2007， 24(2):46-51.

　　[5] 张 丹，胡质毅，周海平.和胃降逆汤防治中风病应激性胃肠出血及对儿茶酚胺、SOD、GSH-PX、LPO含量的影响[J]. 中国中医急症，2003，12(3):202-203.

　　[6] 贾 波，李晓红，梁 煜，等. 白术茯苓汤对脾虚大鼠胃肠激素的影响[J]. 成都中医药大学学报，2001，24(4):47-48.

　　[7] 黄泰康. 厚朴的药理作用. 常用中药成份与药理手册[M]. 北京:中国医药科技出版社，1994：1139-1141.

　　[8] 潘怀耿，李茹柳，李卫民，等.黄连厚朴丸对实验性胃黏膜损伤、腹泻和呕吐的影响[J]. 中国新药杂志，2004，13(2):126-128.