大肠癌hTERT、cmyc的表达及相关性的研究

　　作者：刘剑仑　葛莲英　张贵年　　【关键词】大肠肿瘤?端粒酶催化亚基?基因，myc

　　端粒酶（telomerase）与细胞恶变、肿瘤的发生发展密切相关［1］。而端粒酶催化亚单位（hTERT）可能在端粒酶活性调节中起重要作用［2］。目前研究发现cmyc的过度表达对激活hTERT基因的表达可能起关键作用［3，4］。我们应用免疫组化法检测大肠癌、癌旁、腺瘤性息肉及正常大肠组织中hTERT和cmyc的表达，旨在探讨两者在大肠癌发生、发展中的表达以及相互关系。

　　1　材料与方法

　　1.1　一般资料                

　　30例大肠癌及相应的癌旁组织（距肿瘤2）、正常大肠粘膜（距肿瘤10以外）及20例大肠腺瘤性息肉（其中2例伴中~重度不典型增生）标本均取自外科手术及内窥镜活检。其中大肠癌Ducks，B期2例，C期24例，D期4例；高分化腺癌5例，中分化腺癌8例，低分化腺癌17例；有淋巴结转移10例，无淋巴结转移20例。所有病例均经病理诊断证实，术前未做放化治疗。

　　1.2　方法                

　　采用链菌素抗生物素过氧化物酶法（steptavidin peroxidase,SP）检测hTERT及cmyc的表达，试剂盒购自北京中山生物技术有限公司和福州迈新公司，操作程序按说明书进行。以PBS代替一抗作阴性对照，用已知的阳性切片作阳性对照。结果判断：细胞核和细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞。 　　1.3　统计学分析                

　　数据处理采用PEMS统计软件包行x2检验及 Fisher精确概率法检验，以P0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　hTERT与cmyc的表达                

　　hTERT和cmyc阳性表达率在大肠癌组织中分别为76.8%和80.0%，明显高于癌旁组织（16.7%,23.3%）、腺瘤性息肉（10.0%,45.0%）及大肠正常粘膜组织（3.3%,20.0%），差异有统计学意义（P0.05），见表1。表1 hTERT及cmyc在大肠癌、癌旁、息肉及正常组织中表达（略）

　　2.2　hTERT及cmyc表达与大肠癌淋巴结转移的关系。见表2。表2　hTERT及cmyc在伴淋巴结转移大肠癌组织中的表达（略）

　　2.3　hTERT与cmyc表达的关系               

　　23例hTERT阳性的大肠癌组织中有21例cmyc表达阳性，7例hTERT阴性组中3例无cmyc表达，二者表达一致率80.0%（24/30），且hTERT阳性组cmyc表达率（91.30%）与hTERT阴性组比较，有显著性差异（P0.05），见表3。表3　大肠癌组织中hTERT与cmyc表达的相关性（略）

　　3　讨论                                  　　端粒酶是一种参与染色体末端端粒合成的逆转录酶，其组成部分hTERT提供端粒酶的催化活性，是端粒酶活性的限制性因子。Nakamura等［5］发现hTERT是端粒酶活性的核心限制因素，并与端粒酶在恶性肿瘤中表现一致，但对恶性肿瘤的诊断较端粒酶更灵敏和特异。我们的研究亦证实，大肠癌hTERT的表达与端粒酶活性密切相关［6］。

　　cmyc为一管家基因，位于8号染色体长臂（8q24），属于正常细胞结构基因的一部分，与细胞生长分裂密切相关。在细胞分裂周期中，表达增加，调控细胞增殖或分化，促进G0期细胞向G1/S期转化，cmyc过度表达可诱导细胞转化与肿瘤形成。本研究表明，cmyc不仅在肿瘤组织中表达而且在息肉性增生中也有表达，说明cmyc过度表达是组织增生的一个标志。本组良恶性病变组织之间cmyc表达的差异，提示cmyc基因在不同组织细胞可能有不同的功能（如增生、细胞周期调节、凋亡、肿瘤发生等）。

　　研究证实，在hTERT核心启动子上存在着cmyc的结合位点，通过该位点cmyc能结合hTERT基因的DNA序列来有效调节hTERT的表达，激活端粒酶从而影响其稳定性，促使细胞永生化［7、8］。最近，发现cmyc可以直接激活hTERT，引起细胞增殖［9］。因此，cmyc和hTERT作为端粒酶活性的调控因子在肿瘤的发生中起重要作用。我们通过对30例大肠组织中cmyc与hTERT表达情况进行比较分析发现，cmyc与hTERT在正常大肠粘膜组织中均低表达，大肠癌组织中的表达较癌旁、息肉及正常大肠粘膜组织中的表达有明显差异，伴淋巴结转移的大肠癌组织cmyc与hTERT的表达明显高于无淋巴结转移者；且23例hTERT阳性的大肠癌组织中有21例cmyc表达阳性，阳性率为91.3%;而7例hTERT阴性组中3例无cmyc表达，二者表达一致率为80.0%（24/30）。

　　以上结果提示cmyc与hTERT的表达密切相关。我们设想，在大肠癌的发病机制中，cmyc的过度表达可能激活hTERT从而使端粒酶活性提高，由此可以认为大肠癌细胞内的hTERT表达增高常伴有cmyc增高，大肠癌细胞cmyc癌基因的表达受hTERT影响，二者共同参与调控肿瘤细胞的发生、发展、增殖与分化，因此研究它们与大肠癌的关系也就具有非常重要的意义。

　　参　考　文　献

　　［1］Hahn WC,Meyerson M.Telomerase activation,cellular immortalization and cancer［J］.Ann Med,2001,33(2):123129.

　　［2］Jong HS,Park YI,Kim S,et al.Up regulation of human telomerase catalytic subunit during gastric carcinogenesis ［J］.Cancer,1999,8(4):559565.

　　［3］Latil A,Vidau D,Valer A,et al.Htert expression correlates with MYC over expression in human prostate cancer［J］.Int Cancer,2000,89(2):172176.

　　［4］吴斌，王元正，魏仁志，等.结直肠癌组织中核因γkβ、Cmyc和ICAM1的表达及意义［J］.中国现代普通外科进展，2003,6(4):224.

　　［5］Nakamura TM,Morin GB,Chapman KB,et al.Telomerase catalytic subunit homologs from fission yeast and human［J］.Science,1997,277(5328):955959.

　　［6］刘剑仑，葛莲英，张贵年.大肠癌端粒酶活性的意义及其与人端粒酶催化亚基表达的相关性 ［J］.广西医科大学学报，2004,21（3）：328330.

　　［7］Wu KJ,Grandori C,Amacker M,et al.Direct activation of TERT transcription by cMYC［J］.Nat Genet,1999,21(2)220224.

　　［8］Kyo S,Takakura M,Inoue M,et al.Telomerase activity in cancer as a diagnostic and therapeutic target［J］.Histol Histopathol,2000,15(3):813817.

　　［9］Wang J,Hannon GJ,Beach DH.Risky immortalization by telomerase［J］.Nature,2000,405(6788):755756.

　　［基金项目］广西卫生厅科研基金资助项目（9954）

　　*现在广西壮族自治区人民医院工作                

　　刘剑仑，等.大肠癌hTERT、cmyc的表达及相关性的研究 

　　广西医科大学附属肿瘤医院普外科（广西南宁 530021）