奥沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎的疗效及对ICAM-1、CD44s表达的影响

      作者：张运贵 黄咏梅  薛强 刁恩军   作者单位：山东省济南市第四人民医院消化科（250031）；山东省章丘市中医院消化科（250200）

      摘要 目的:探讨奥沙拉嗪治疗轻中度溃疡性结肠炎（UC）的疗效及对结肠粘膜ICAM—l、CD44s表达情况的调节作用。方法：56例轻中度UC患者随机分为治疗组和对照组，治疗组口服奥沙拉嗪，对照组口服柳氮磺胺嘧啶(SASP)，比较两组临床疗效，用免疫组化法对治疗前后结肠粘膜中ICAM—l及CD44s表达情况进行研究。结果：治疗组总有效率与对照组比较差异无显著性（p>0.05）。ICAM—l及CD44s表达与结肠粘膜的病变程度呈正相关，奥沙拉嗪组治疗后表达强度明显下降(P<0.05），而SASP组无明显下降(P>0.05)。结论：奥沙拉嗪治疗轻中度UC的临床疗效与柳氮磺胺嘧啶无明显差异，但对粘附分子ICAM—l、CD44s表达强度有较好的下调作用，提示在改善溃疡性结肠炎的病理组织学特性方面优于柳氮磺胺嘧啶。

      关键词 溃疡性结肠炎；细胞间黏附分子；CD44s；免疫组化

      Clinical effects of olsalazine sodium on treatment of ulcerative colitis and regulating effect on  ICAM一1 and CD44s expression

      Zhang yungui, Xue qiang,et al. Department of Gastroenterology，The Fourth Hospital of Jinan，Shandong province，250031，China．

      Abstract  Objective：To explore the effects of olsalazine sodium on treatment of mild-moderate ulcerative colitis（UC） and regulating effect on  ICAM一1 and CD44s expression. Methods：56 mild-moderate UC patients were divided into 2 groups : treatment and control group. Patients of treatment group were treated with olsalazine sodium while those of control group were treated with salicylazosulfapyridine（SASP）．The colonic mucosa specimens were collected from 56 patients and the expression of ICAM一1 and CD44s were detected by immunohistochemistry before and after treatment. Results：There were marked correlation among pathological grading of UC and expressive intensity of ICAM一1 and CD44s（p<0.01).The total effective rate has no statistical significance（80% vs 73.08%,p>0.05） but the expressive intensity of ICAM一1 and CD44s were down-regulated after treatment in olsalazine group（p<0.05） while not in SASP group（p>0.05）.Conclusions:   Adhesions such as ICAM一1(CD54)and CD44s play an important role in the inflammation，which have important effects in development of UC．OIsalazine sodium can inhibit the expression of them， promote the healing of mucosal lesions and provide an effective therapeutic methods for UC．

      Key Words：Ulcerative colitis；Olsalazine sodium；Salicylazosulfapyridine；immunohistochemistry [1]

      溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种病因未明的慢性炎症性肠病,尽管其确切病因尚不十分明了，但有证据显示其发病与环境、遗传、感染及免疫因素有关，细胞因子网络及黏附分子在UC的发病中起到了重要作用[1－3]。奥沙拉秦钠是一种治疗UC的新药，对轻中度患者有较好的疗效，但对粘附分子表达的影响报道较少。本课题应用免疫组化方法研究奥沙拉秦钠治疗前后结肠黏膜中两种黏附分子ICAM—l（血管细胞间粘附分子－1，CD54）、CD44s（标准型吞噬细胞膜糖蛋白)表达的变化情况,进一步阐明其对UC的治疗价值。

      1 资料与方法

      1.1 一般资料 选择2005年4月至2006年10月收住院的轻中度UC患者56例作为研究对象，随机分为治疗组及对照组，治疗组30例，其中男21例，女9例，平均年龄46.84±11.23岁；对照组26例，其中男17例，女9例，平均年龄47.12±11.76岁，两组间性别、年龄、病情程度及病程等一般资料均具有可比性（p均>0.05）。

      1.2 治疗方法：（1）剂量与疗程：采用随机开放性试验。治疗组应用奥沙拉秦钠胶囊（商品名：畅美，天津力生制药股份有限公司生产，250 mg/粒，批准文号：国药准字X20000247）1g，po ,bid,疗程8周；对照组应用柳氮磺胺嘧啶（SASP片，规格为250mg/片，上海福达制药有限公司生产，批号：990301)1g,po,bid,疗程8周。（2）观察方法：治疗前详细询问病史、体检，每日记录患者腹痛、腹泻、里急后重、大便情况等临床表现及副反应情况，治疗前后行血、便常规、肝肾功能、电子肠镜检查及固定部位活检。

      1．3镜下分级及疗效判断  均按照中华医学会制定的对炎症性肠病诊断治疗规范的建议[4]，（1）内镜下炎症活动度分为三级 Ⅰ级：粘膜充血水肿，接触性出血；Ⅱ级：粘膜点状出血，可见表浅小溃疡，附有脓液；Ⅲ级：水肿明显，溃疡深大。（2）临床疗效判断 显效：临床症状消失，结肠镜复查粘膜正常，停药或仅用维持量药物，观察6 mo无复发； 有效：临床症状基本消失，结肠镜复查结肠粘膜轻度炎症反应及部分假息肉形成；无效：临床症状、内镜及病理无改善。

      1．4免疫组织化学染色  采用常规SP法，石蜡切片厚4μm，切片常规脱腊至水，3％过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，蒸馏水、PBS冲洗，微波热修复抗原，自然冷却后PBS冲洗，滴加l0％山羊血清37℃10～15min封闭非特异性抗原，加入相应的一抗（即鼠抗人单克隆抗体ICAM-1或CD44s，均购自北京中山公司），湿盒内4℃过夜。PBS冲洗，加入l：100生物素化二抗37℃孵育30min。PBS冲洗，l：l00辣根酶标记的链霉卵白素37℃孵育30min，PBS冲洗，显微镜下控制显色时间，苏木素复染，脱水封片。用已知阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。染色结果判定：lCAM一1蛋白阳性表达为细胞膜或细胞质呈棕黄色；CD44s蛋白阳性表达为细胞膜呈棕黄色。染色分级标准：观测10个高倍视野的阳性细胞表达情况，计算100个细胞中的阳性细胞数，根据阳性细胞所占比例分4个等级：“+++”为阳性细胞数≥75％，“++”为阳性细胞数50％ ～<75％，“ +”为阳性细胞数为25％ ～<50％，“—”为阳性细胞数<25％。

      1．5 统计学处理 采用SPSS 11.5软件进行统计，计数资料比较用卡方检验，表达强度的比较应用Wilcoxon秩和检验，等级相关性分析用Spearman秩相关，P<0.05为差异有显著性。

      2 结果

      2.1 临床疗效

      治疗组显效10例，有效14例，总有效率为80.00％；对照组显效7例，有效12例，总有效率为73.08％。两组总有效率比较差异无显著性（p>0.05），结果见表1。

      表1  治疗组与对照组临床疗效比较

      2.2  ICAM一1、CD44s蛋白表达

      2.2.1 ICAM一1表达：主要表达于淋巴细胞、腺上皮细胞、血管内皮细胞等，CD44s主要表达于淋巴细胞、巨噬细胞及成纤维细胞等。二者表达强度均与炎症活动度呈正相关（p<0.05或0.01），结果见表2。

      表2   ICAM-1、CD44s表达与炎症活动度的关系

      2.2.2  治疗前后ICAM-1、CD44s蛋白表达强度变化

      两组治疗后ICAM-1、CD44s蛋白表达强度均减弱，与治疗前比较，治疗组差异有显著性（p均<0.05），对照组差异无显著性（p均>0.05），结果见表3。

      表3  治疗前后ICAM-1、CD44s表达强度比较

      2.3 不良反应：治疗组轻度腹泻、恶心及散在皮疹各1例，不良反应发生率为10％；对照组出现纳差、中上腹不适、心悸、皮疹等反应共7例，发生率为26．92％。两药不良反应发生率无统计学意义，均未影响治疗，对症处理后消失。

      3 讨论

      UC是原因不明的大肠粘膜的慢性炎症和溃疡性病变，SASP及奥沙拉嗪钠均为治疗轻中度UC的有效药物，可控制UC活动和诱导缓解，研究表明，二者治疗UC疗效无明显差异，但由于SASP含磺胺吡啶，恶心、呕吐、食欲不振或头痛等副作用较多，大约30％病人不能耐受，奥沙拉嗪钠胶囊是由二分子5一氨基水杨酸(5-AsA)经偶氮键相连接而成，口服后极少被吸收入血，并且在到达结肠前不分解，在结肠部位被细菌裂解后成为二分子5一氨基水杨酸而发挥作用，因促进肠腔水分泌和促进食物在肠腔内运动,可能引起轻度腹泻，但由于不含磺胺嘧啶，其副作用较SASP明显减轻[5－6]。本课题研究表明，奥沙拉嗪钠胶囊与SASP治疗轻中度UC的总有效率差异无显著性，30例病人中有3例出现轻度腹泻、恶心及前臂皮疹，不良反应发生率为10％，SASP片治疗组有7例出现纳差、中上腹不适、心悸、皮疹等，不良反应发生率为26.92％,两组不良反应发生率无统计学意义,考虑与样本例数较少有关。

      UC的病因机制尚未完全明确，免疫因素被认为是其发病的主要因素之一，近年来，黏附分子在UC中的作用引起人们的重视，各种因素使体内免疫系统被激活，导致各种炎症细胞表达粘附分子，促进炎性细胞向炎症部位聚集，进而释放更多的炎症因子导致肠组织的慢性损伤[7]。1CAM一1、CD44s均为粘附分子超家族成员，参与血管内皮的黏附作用，促进炎细胞渗出到达炎症部位。研究表明[8-9]，1CAM一1、CD44s在活动期UC患者中表达和分布明显增加，且与组织的炎症程度正相关，随着溃疡与炎症的好转，二者表达均呈现递减趋势，但关于奥沙拉嗪治疗前后1CAM一1、CD44s表达的变化情况尚未见报道。本课题研究表明，ICAM—l及CD44s在轻中度UC患者中均有明显表达，二者表达与结肠粘膜的病变程度呈正相关，与文献报道一致，表明结肠粘膜中1CAM一1、CD44s的表达情况可以作为检测UC炎症程度的指标。奥沙拉嗪治疗后，1CAM一1、CD44s表达强度较治疗前均有明显下降，差异有显著性意义（(P<0.05），而SASP组则无明显下降。其机制考虑与奥沙拉嗪以下作用有关[10]：(1)通过抑制环氧化酶途径，阻断前列腺素的合成；(2)通过抑制脂氧化酶途径，干扰花生四烯酸代谢，抑制前列腺素E等致炎、致热物质的产生，使前列腺素E浓度下降并恢复正常，炎症好转或痊愈；(3)抑制巨噬细胞向发炎的黏膜移动，起到氧自由基清除作用，减少肠黏膜损伤；降低溃疡性结肠炎病人肠内白三烯LTB浓度和5-羟二十碳四烯酸(5一HETE)的生成量；(4)抑制血小板活化因子，抑制结肠脂肪酸氧化，通过和叶酸竞争抑制内皮细胞增生，增强机体免疫功能。

      综上所述，奥沙拉嗪与SASP均为治疗轻中度UC的有效药物，二者总有效率虽然无明显差异，但奥沙拉嗪治疗后能更好地改善UC患者结肠粘膜的病理组织学特性，降低ICAM—l及CD44s的表达，这一特性对能否降低UC的复发有待进一步研究。

4 参考文献

1.江学良,权启镇,孙白勤，等．溃疡性结肠炎患者黏附分子的变化意义．世界华人消化杂志，1998，6(1)：54

2.葛宇黎 ，霍丽娟 ，李亮成.粘附分子与疡性结肠炎.现代中西医结合杂志,2005，14(12)：1663

3.葛宇黎,李亮成,霍丽娟.溃疡性结肠炎患者结肠粘膜ICAM一1及CD44s的表达.江西江药,

2006，41（4）：203-205

4.中华医学会消化病学分会．对炎症性肠病诊断治疗规范的建议．中华消化杂志，2001，21(4)：236

5.钱立平，林庚金，徐三荣,等.奥沙拉嗪钠胶囊治疗溃疡性结肠炎的临床疗效.复旦学报（医学版），2004，31（4）：421－424

6.宋 瑛,吴开春,张 沥，等.奥沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎疗效观察. 胃肠病学和肝病学杂志,2004,l3(6):642-644

7.葛宇黎 ，霍丽娟 ，李亮成.粘附分子与溃疡性结肠炎. 现代中西医结合杂志，2005, 14(12): 1663-1665

8.江学良,权启镇，孙白勤，等．糖皮质激素对重度溃疡性结肠炎患者淋巴细胞黏附分子表达的影响．中国危重病急救医学,1998,10(6)：366

9.邹阳,王兴友,杨孝芳．溃疡性结肠炎大鼠IL一2、CD44、CD54的实验研究．江西医学检验，2002，20(5)：281

10.江学良，权启镇，孙自勤，等．奥沙拉秦钠治疗慢性反复发作型溃疡性结肠炎随机对照研究．世界华人消化杂志,2003，11(8)：1211—1213