结直肠癌组织不同部位微血管密度的测定及临床意义

结直肠癌组织不同部位微血管密度的测定及临床意义 作者：靳明林 石彦 曾冬竹 雷晓 余佩武 蔡志民　    作者单位：400038 重庆，第三军医大学西南医院普通外科    【摘要】  目的 研究结直肠癌组织微血管密度，探讨微血管密度与结直肠癌的关系，为开展抗结直肠癌血管形成治疗提供理论基础。方法 62例结直肠癌标本造影后，用立体显微镜对结直肠癌中心组织，远、近端癌组织内，癌组织远、近端肠黏膜进行微血管密度计数，观测血管密度变化。结果 结直肠癌远、近端癌组织内微血管密度与癌中心和癌远、近端正常肠黏膜相比差异有统计学意义。不同分化程度的结直肠癌比较差异无统计学意义。结论 结直肠癌的发生、发展依赖于血管形成；微血管密度检测可用于指导临床治疗，提高治疗效果和患者的生存率；微血管密度与结直肠癌的恶性程度有待探讨。     【关键词】  微血管密度； 结肠癌； 直肠癌     Measurement of microvessel density of colorectal carcinoma and its clinical significance  JIN Minglin, SHI Yan, ZENG Dongzhu, LEI Xiao, YU Peiwu, CAI Zhimin. Department of General Surgery, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China    Corresponding author: YU Peiwu, Email: yupeiwu01@sina.com    【Abstract】  Objective  To measure microvessel density of colorectal carcinoma and investigate relationship between microvessel density and colorectal carcinoma so as to provide theoretical basis for antiangiogenesis therapy. Methods  The specimens surgically removed from 62 cases with colorectal carcinoma were perfused with radiography mixture. Then, the stereo microscopy was used to observe changes of microvessel density by measuring microvessel density at proximal, distal and central parts of the carcinoma as well as at the proximal and distal paratumor mucosa. Results  There was significant statistical difference upon microvessel density at proximal and distal parts of the carcinoma, compared with that at central part of carcinoma and that at proximal and distal paratumor mucosa. Colorectal carcinoma with various differentiation showed no statistical difference. Conclusions  Development of colorectal carcinoma is dependent on angiogenesis. The detection of microvessel density is helpful for guiding clinical therapy against colorectal carcinoma and can improve curative effect and survival rate of cases with colorectal carcinoma. Further study is needed to ascertain the relationship of microvessel density with malignancy degree of colorectal carcinoma.    【Key words】  Microvessel density;  Colon carcinoma;  Rectal carcinoma    手术是治疗结直肠癌最有效的手段，但对阻止结直肠癌的复发和转移，目前仍无一种确切有效的方法。结直肠癌的复发和转移有一个临床过程。这为术后进行综合治疗提供了可利用的时机。笔者对结直肠癌微血管密度的研究，旨在为开展抗结直肠癌血管形成，配合其他综合疗法以减少结直肠癌复发和延缓转移而提高临床治疗效果。1  材料与方法    1.1  一般资料    我院普通外科手术切除的完整结直肠癌标本62例，其中男35例，女27例；中位年龄52岁(25～86岁)。    1.2  试剂与仪器    6%右旋糖酐注射液、 上海产214型碳素墨水和10%甲醛溶液配成混合液；QD3X线双重造影硫酸钡，颗粒大小为20 μm，加入混合液内配成50%硫酸钡混合液。立体显微镜计每平方毫米微血管密度。    1.3  方法    新鲜标本于动脉端以混合液灌注，由静脉排尽残余血液出现灌注液时结扎静脉断端，继续加压灌注50%硫酸钡混合液至全标本墨染(压力在13～15 kPa)，去除灌注导管并结扎动脉。置已灌注标本于10%甲醛中固定48 h。从肿瘤对侧剖开， 测量肿瘤大小， 观察肿瘤大体类型。标本制成石蜡切片， 常规HE染色， 显微镜下观察细胞分化程度及组织学类型。    流水冲洗标本24 h以上，从75%乙醇开始梯度脱水，每次增加5%，至100%时重复100%浓度。冬青油透明标本48 h。切取厚1～2 mm制成透明大切片。每例标本取肿瘤远、近端及中心部位3处瘤组织，取肿瘤远、近端2 cm及肿瘤近端4 cm 3处肠黏膜组织。在10×25倍立体显微镜下计每平方毫米微血管密度，取3个观察值的均值。    1.4  统计学分析    对所测血管参数的均值、标准差、标准误、变异系数进行方差分析。2  结果    2.1  Dukes分期    62例结直肠癌中，直肠癌39例，结肠癌23例。溃疡型42例，肿块型16例，浸润型4例。高分化腺癌23例，中分化腺癌28例，黏液腺癌11例。肿瘤平均直径为5.65 cm(高分化腺癌6.15 cm，中分化腺癌4.41 cm，黏液腺癌6.80 cm)。根据1978年杭州会议提出的中国改良Dukes分期法［1］，Ⅲ、Ⅳ期病例占83.4%。    2.2  透明大切片立体显微镜观察结果    对62例结直肠癌总体和对高分化、中分化腺癌、黏液腺癌分类分析，所测微血管密度计数，在大肠癌远端2 cm处肠黏膜与远端肿瘤组织、肿瘤远近端癌组织与中心处癌组织、肿瘤近端癌组织与肿瘤近端2、4 cm处正常肠黏膜之间，差异有统计学意义(P＜0.01)(见图1～3、表1)。微血管密度计数，在高分化、中分化和黏液腺癌中差异无统计学意义。但从实际测得数据来看, 高分化腺癌的微血管密度较高，而黏液腺癌的微血管密度较低。表1  62例结直肠癌标本6个部位微血管密度3  讨论    近年来人们对肿瘤微血管进行了较多的研究，肯定了肿瘤和肿瘤血管互为因果不可分割的关系，对肿瘤的发生、发展、侵袭和转移有了深入的了解，但对肿瘤的恶性程度问题仍存在争议。    3.1  结直肠癌的发生和发展依赖于血管形成    肿瘤生长的先决条件是肿瘤血管的形成。肿瘤血管的形成是实体肿瘤生长、侵袭、转移的基本条件［2］。为保持肿瘤细胞和瘤细胞量不断增殖及生长，肿瘤的新生血管也必然相应增加。肿瘤血管化后，瘤细跑呈指数倍增，开始造成对组织脏器的侵袭，并发生转移倾向。否则，肿瘤将不可能继续生长，也不可能发生侵袭和转移。在无血管状态下，大部分肿瘤生长的直径不超过1 mm［3］。本组62例各种分化程度的结直肠癌，镜下微血管密度，在癌肿远近端瘤组织内显著高于癌肿远近端肠黏膜，两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。本组癌肿瘤的平均直径为5.65 cm。结果表明：结直肠癌的发生和发展与血管形成密切相关。    3.2  微血管密度与结直肠癌的恶性程度    本组62例结直肠癌和3种不同病理组织类型的研究显示，微血管密度在高分化、中分化和黏液腺癌中差异无统计学意义(P>0.05)。微血管密度用于肿瘤恶性程度的判定，现争议较多。Acikalin等［2］在结直肠癌复发患者中，有较高的微血管密度和肥大细胞计数；微血管密度是结直肠癌复发和肝转移的一个独立预后指标。本研究发现，通过立体显微镜下微血管密度计数，在结直肠癌不同病理组织类型中差异无统计学意义。Shan等［4］通过测定微血管密度对进展期和早期结直肠癌进行研究，结果也显示，微血管密度差异无统计学意义，血管密度不是一个可靠的预后指标。具体血管密度对结直肠癌和其他肿瘤的恶性程度判断，有待进一步研究和探讨。我们测得高分化腺癌的微血管密度较高，而黏液腺癌的微血管密度和肿瘤中心的微血管密度较低，可能与黏液腺癌恶性程度高和肿瘤中心缺血，肿瘤变性坏死致血管严重破坏有关。    3.3  结直肠癌微血管密度的临床应用    基于肿瘤微血管和正常血管在结构上的差异，肿瘤微血管可作为血管介导治疗的最佳靶位。目前，通过抗肿瘤血管形成来治疗癌肿，已成为癌肿研究最活跃的领域之一。已有许多抗体或单克隆抗体、血管生长抑制剂等针对肿瘤血管形成不同环节进行干涉、阻止或破坏其血管形成的过程，达到治疗肿瘤的目的［5］。Okaji等［6］研制的肿瘤疫苗正在一期临床试验中，认为癌肿的治疗要结合抗肿瘤血管形成和癌肿的免疫治疗，是一种有效的方法。我们对结直肠癌微血管密度的测定，可作为结直肠癌术后血管介导治疗观察肿瘤微血管密度的改变， 计算及筛选作用剂量， 设计有关前瞻性研究奠定一些基础。    根据结直肠癌的发生、发展依赖于血管形成的理论，肿瘤在血管化前期，瘤体限制在很小的直径，无血管形成的能力和活性，不发生侵袭和转移。结直肠癌根治术后，如辅以血管生长抑制剂治疗，使残留的少量肿瘤组织细胞，或已有转移而未发现的微小癌灶，停留在1 mm左右的相对静止期，对阻止肿瘤细胞的生长或产生新的转移灶，延长或防止转移和复发，结合其他抗癌治疗，提高临床疗效和患者生存率，有重要临床意义。【参考文献】［1］ 大肠癌病理与预后关系研究协作组.从预后结果探讨大肠癌的Dukes分期.中华肿瘤杂志,1986,8(2):144-145.［2］ Acikalin M F, Oner U, Topcu I, et al. Tumour angiogenesis and mast cell density in the prognostic assessment of colorectal carcinomas. Dig Liver Dis,2005,37(3):162-169.［3］ 靳明林,石彦,蔡志民.大肠癌基质血管的微机图象定量分析.第三军医大学学报,2003,25(8):715-717.［4］ Shan Y S, Lee J C, Chow N H, et al. Immunohistochemical microvessel count is not a reliable prognostic predictor in colorectal carcinoma. Hepatogastroenterology,2003,50(53):1316-1320.［5］ Sanz L, AlvarezVallina L. Antibodybased antiangiogenic cancer therapy. Expert Opin Ther Targets,2005,9(6):1235-1245.［6］ Okaji Y, Tsuno N H, Saito S, et al. Vaccines targeting tumour angiogenesis-a novel strategy for cancer immunotherapy. Eur J Surg Oncol,2006,32(4):363-370.