人胃癌组织中fibulin5的表达及其临床意义

人胃癌组织中fibulin5的表达及其临床意义作者：文灿 董世武 余汇洋　    作者单位：400038 重庆，第三军医大学基础医学部外科应用解剖与手术学教研室； 2 400038 重庆，第三军医大学基础医学部解剖学教研室    【摘要】  目的 探讨fibulin5在人胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组织化学染色结合图像分析法，对32例胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中fibulin5的表达进行半定量分析。结果 fibulin5在胃癌组织中的表达强于癌旁组织和正常组织(P<0.05)，且表达强度与癌组织的分化程度有关，低分化癌组织的fibulin5表达强(P<0.05)。结论 fibulin5的表达可能与胃癌组织细胞的恶性转化及增殖有关。    【关键词】  fibulin5 胃癌 免疫组织化学    Expression and clinical significance of fibulin5 in human gastric carcinoma  WEN Can, DONG Shiwu, YU Huiyang. Department of Surgical Applied Anatomy and Operative Surgery, College of Medicine, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China   【Abstract】  Objective  To investigate the expression and clinical significance of fibulin5 in gastric carcinoma. Methods  The expression of fibulin5 in human gastric cancerous tissues, precancerous tissues and normal gastric tissue of 32 cases was semiquantitatively examined by immunohistochemical stain combined with image analysis. Results  The expression of fibulin5 in human gastric cancerous tissues was significantly higher than that in precancerous tissues and normal gastric tissues (P<0.05), with expression relating differentiation degree of gastric cancerous tissues, ie, the lower differentiation of gastric cancerous tissue resulted in higher expression of fibulin5 (P<0.05).Conclusion  The expression of fibulin5 may involve proliferation and malignant transformation of the gastric cancerous cells.   【Key words】  Fibulin5; Gastric cancer; Immunohistochemistry    fibulin5是细胞外基质蛋白家族fibulin家族中的最新成员，亦称为FBLN5、DANCE或EVEC。fibulin5为一含448个氨基酸的糖蛋白，含有6个与钙离子结合的表皮生长因子样(EGFlike)区域，其中一个区域含有能与整合素结合的RGD基序。后者能在细胞表面与整合素αvβ3、αvβ5结合［1］。fibulin5的表达与肿瘤的发生、发展关系密切［2-3］。但人胃癌组织中fibulin5的表达情况经笔者检索尚未见报道。我们采取免疫组织化学染色结合图像分析的方法，对胃癌组织中fibulin5的表达进行半定量分析研究，以了解胃癌组织中fibulin5的表达情况，并对其临床意义进行初步探讨。1  材料与方法    1.1  材料    胃癌手术切除标本32例，其中男22例，女10例；年龄25～74岁(平均56岁)，均经病理学确诊。按《中国常见恶性肿瘤诊治规范》(胃癌分册)标准进行病理分类：分化较好组：高分化腺癌2例，乳头状腺癌2例，中分化管状腺癌4例；分化较差组：低分化腺癌20例，印戒细胞癌2例，未分化癌2例。    取材部位包括胃癌、癌旁及远离癌灶的正常组织，经4%多聚甲醛(PFA)固定后浸于30%蔗糖(用4%PFA配制)溶液，4 ℃冰箱保存。羊抗人fibulin5 IgG单克隆抗体购自Santa Cruz公司；兔抗羊IgG抗体及抗体稀释液和DAB显色试剂盒等皆购自北京中杉金桥生物技术有限公司。    1.2  方法    常规冷冻切片，片厚10 μm，直接贴于载玻片。免疫组织化学染色按常规方法进行，fibulin5抗体工作浓度为1∶200，用抗体稀释液代替fibulin5抗体作阴性对照。以组织细胞中出现棕色或棕褐色颗粒为阳性。    每个标本随机取5张切片，在20倍物镜下，每张切片选阳性表达最高的5个视野照相(Olypus)，采用IPP图像分析软件，取5个视野的积分光密度(IOD)的平均值表示该切片的表达强度计量值。    1.3  统计学分析    计量数据以±s表示，采用SPSS 10.0软件包统计学分析，以α=0.05作为检验水准。    文灿，等. 人胃癌组织中fibulin5的表达及其临床意义 2  结果    阳性染色位于细胞质内，呈棕褐色，在正常胃组织中，染色浅，阳性细胞较为均一(图1A)。在分化较好胃癌组织中，阳性着色深浅不均，阳性细胞显著增多，多呈弥散分布，也有的密集成团，腺管及少数的炎性细胞也有染色(图1B)。而在低分化组织中，阳性细胞进一步增多，染色深，多密集成团，癌灶边缘及增生活跃区域最为密集，癌巢及癌细胞密集区阳性细胞较少(图1C)。在对照实验中没有阳性染色细胞(图1D)。共有27例检出阳性染色细胞，其中高分化组7例，低分化组20例，经χ2检验，阳性率差异无统计学意义(P>0.05，表1)。经图像分析结合单因素方差分析，胃癌组织fibulin5表达明显高于癌旁组织及正常的胃组织(P<0.05，表2)，但癌旁组织与正常胃组织的fibulin5表达差异无统计学意义(P>0.05)。经t检验，fibulin5的表达与胃癌组织的分化程度有关，分化较好组fibulin5阳性表达弱，而分化较差组阳性表达强(P<0.05，表1)。表1  不同分化程度胃癌组织fibulin5的表达表2  正常胃组织、癌旁胃组织和胃癌组织中的fibulin5表达情况3  讨论    fibulin家族成员的主要功能是形成和稳定基膜、弹性纤维和疏松结缔组织。但近年的研究发现，它们也参与了细胞与细胞、细胞与基质间的信号传导。Fibulin5是该家族中的最新成员，从一发现就受到学者们的高度重视。2002年同一期Nature上连续2篇论文报道了它在血管弹性纤维形成中的重要作用［4-5］。有研究发现，fibulin5能直接与原弹性蛋白结合，并将后者锚于细胞表面［6］。此外，fibulin5与细胞的增殖、运动和侵袭有关［7］。最新的研究结果也提示fibulin5的表达与肿瘤发生、发展关系密切［2-3］。本研究发现，胃癌组织中fibulin5的表达明显强于癌旁组织和正常胃组织，且与胃癌组织的分化程度有关，分化程度越低，表达越强，但癌旁组织与正常胃组织比较差异无统计学意义。癌旁组织最易受到癌细胞的侵袭，具有一定的癌变潜能。本研究中癌旁组织fibulin5的表达并未显著升高，提示fibulin5的高表达可能是癌组织与正常组织的区别之一，但它可能无法敏感地反应癌细胞的侵扰。    胃癌组织中fibulin5的高表达可能是多因素共同作用的结果，其调控机制尚不清楚。一方面，可能与胃癌组织中TGFβ1的高表达有关。有研究［8］表明，胃癌组织中TGFβ1显著高于正常组织和癌周组织，且胃癌组织的分化程度越低，TGFβ1表达越高。而在成纤维细胞和内皮细胞中，TGFβ1则可诱导fibulin5的表达［7］。本研究中低分化组织中fibulin5表达与此相一致。但有学者［2］认为尽管肿瘤中的TGFβ1升高，而fibulin5受抑制分子(包括Myc，VEGF，IL1β)的影响，其表达并不相应地升高。Schiemann等［3］的研究也表明：在肾癌、乳腺癌、卵巢癌和结肠癌中，fibulin5的表达皆降低，多数的纤维肉瘤中降低，但也有部分升高。另一方面，可能与原弹性蛋白的高表达有关。在胃癌组织中，癌细胞可能发出某种刺激因子，作用于邻近细胞，甚至渗透到癌组织周围，直到胃壁浆膜层作用于沿途的平滑肌细胞和成纤维细胞，使其生成弹性纤维的能力增强。癌组织还可刺激周围组织，直接通过基因的调节使胃壁中生成弹性纤维的细胞功能激活并增强。加之癌灶的慢性炎症刺激也会促使弹性纤维生成增多。最终使得其弹性纤维要显著高于正常胃组织和胃溃疡组织［9］，弹性纤维组分的90%为原弹性蛋白，而后者能促进fibulin5的表达［10］。另外，还可能与癌组织中丰富的血管有关。    Fibulin5通过抑制血管生成，从而抑制肿瘤发生、发展［2］。但为何胃癌组织中的fibulin5表达会升高，且在低分化组织中更高呢？这是否意味着机体或邻近癌组织的正常细胞对癌细胞的应答反应呢?研究中观测到的癌灶边缘及增生活跃区域的阳性细胞最为密集，癌巢及癌细胞密集区内部阳性细胞较少则符合这一推测。    总之，fibulin5确实以某种方式参与了胃癌的发生、发展过程。从本结果看，虽不能肯定fibulin5的高表达促进胃癌细胞的增殖，但低分化胃癌组织的fibulin5表达更高，说明fibulin5在胃癌组织恶性转化和增殖中可能起着某种作用，但其信号路径和调控机制尚有待进一步研究。【参考文献】  ［1］ Nakamura T, Ruiz L P, Lindner V, et al. 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