丹参川芎嗪治疗慢性肺源性心脏病急性发作的疗效

　　作者：陈丽敏,黄峥慧　　作者单位：福建医科大学附属协和医院呼吸内科， 福建， 福州市

　　【摘要】目的：探讨蒙药顺气补心十一味丸对心肌梗死后缺血心肌血管生成和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法：健康成年Wistar大鼠78只，随机分为正常对照组(6只)、模型对照组(18只)、蒙药低剂量组(18只)、蒙药高剂量组(18只)和卡托普利组(18只)。除正常对照组外所有大鼠背部皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)复制心肌梗死模型，模型建立后，蒙药低剂量组、蒙药高剂量组、卡托普利组分别在7d、28d和42d处死动物，观察CD34和HIF-1α蛋白的表达，以CD34阳性表达检测微血管密度 (MVD)。结果：模型建立后7d、28d和42d，蒙药低、高剂量组与模型对照组相比MVD均明显增加(P均<0.01)，卡托普利组在28d、42d时MVD较模型对照组显著增加(P均<0.01)，与蒙药两组无显著差异; 7d时HIF-1α表达在蒙药低(0.5610±0.0164)、高剂量组(0.5466±0.2135)较模型对照组(0.6060±0.0078)有显著增强(P<0.01)，而卡托普利组(0.5892±0.0319)与模型对照组比较无显著差异;相应时间点各治疗组较模型对照组坏死灶面积缩小，42d时心肌纤维化程度减轻。结论：顺气补心十一味丸能够促进心肌梗死大鼠缺血心肌的血管生成，上调缺血心肌的缺氧诱导因子1α蛋白表达，其作用优于卡托普利。其促血管生成机制可能与上调缺血心肌的缺氧诱导因子1α蛋白表达有关。

　　【关键词】 心肌梗塞,新生血管化,顺气补心十一味丸

　　Abstract：Objective： To explore effects of Shunqi buxin shiyiwei pellet (Mongolian drug)on angiogenesis of ischemic myocardium and expression of hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) after myocardial infarction. Methods： A total of 78 healthy adult Wistar rats were randomly divided into normal control group (n=6)， model control group (n=18)， low dose Mongolian drug group (n=18)， high dose Mongolian drug group (n=18) and captopril group (n=18). Myocardial infarction models were established by subcutaneously multi-point injecting isoproterenol hydrochloride (ISO) on back of rats. After establishment of model，rats of each group were executed on 7d， 28d and 42d， and expressions of CD34 and HIF-1α were observed. Microvessel density (MVD) was detected by positive expression of CD34. Results： Compared with model control group， MVD significantly increased in low and high dose Mongolian drug groups on 7d， 28d and 42d and in captopril group on 28d and 42d (P<0.01 all)， MVD was no significant difference among two Mongolian drug groups and captopril group. Expressions of HIF-1α in low dose Mongolian drug group (0.5610±0.0164) and high dose Mongolian drug group (0.5466±0.2135) significantly increased compared with that of model control group (0.6060±0.0078) on 7d， P<0.01， but there was no significant difference between captopril group(0.5892±0.0319) and model control group. Compared with model control group， size of necrosis focus decreased and extent of myocardial fibrosis relieved on 42d in each therapy group. Conclusion： Shunqi Buxin Shiyiwei pellet can promote angiogenesis of ischemic myocardium and up-regulate expression of HIF-1α in rats with myocardial infarction. Its effect is more than that of captopril. Its mechanism of promotion of angiogenesis may be related with up-regulation of expression of HIF-1α in ischemic myocardium.

　　Key words： Myocardial infarction; Neovascularization; Shunqi Buxin Shiyiwei Wan

　　心肌梗死是严重威胁人类健康的疾病之一。冠状动脉狭窄或闭塞可导致心肌缺血、坏死，使局部血管生长的平衡状态被打破[1];迅速有效地建立侧支循环对于改善梗死区血液供应及梗死区心肌的存活有非常重要的意义。研究发现某些药物可以增加病变部位血管新生诱导因子的浓度，促进局部血管的再生，改善患者症状和预后。因此，寻找有效促血管生成药物成为当前心血管领域研究的热点。

　　蒙药顺气补心十一味丸是蒙医药中用于治疗心肌梗死疗效显著的药物，成分为沉香、肉豆蔻、广枣、石膏、枫香脂、木香、诃子、木棉花、丁香、阿魏和紫河车。其对缺血心肌的保护作用尚未见报道，尤其关于心肌梗死缺血心肌血管生成的研究国内、外尚未见到相关报道。本研究探讨顺气补心十一味丸对心肌梗死大鼠缺血心肌血管生成的作用和可能的分子学机制，为顺气补心十一味丸治疗缺血性心脏病的临床应用提供实验依据。

　　1　资料与方法

　　1.1　实验分组

　　健康成年Wistar大鼠78只[内蒙古大学动物研究中心提供，许可证SCXK(蒙)2002-0001(清洁级)]，体重(220±20)g，雌雄不拘，每日每只进食15g，自由饮水。适应性饲养一周后随机分为：正常对照组(6只)、模型对照组(18只)、蒙药低剂量组(18只)、蒙药高剂量组(18只)、卡托普利组(18只)。

　　1.2　大鼠心肌梗死模型的复制

　　按文献和预实验结果，除正常对照组外所有大鼠连续两天在其背部皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)(40mg/kg?d)复制心肌梗死模型，以复制模型前、后心电图上J点的变化判断模型是否复制成功。模型复制成功后 24h开始药物干预，蒙药低剂量组、蒙药高剂量组、卡托普利组分别给予顺气补心十一味丸(内蒙古蒙药股份有限公司产品，国药准字：Z15020447，批号：060427)0.461g/kg、1.844g/kg和卡托普利25mg/kg，每日早晚各灌胃一次。

　　1.3　检测指标和方法

　　1.3.1　观察模型动物心电图：用3%的戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠，仰位固定，连接心电图机，在模型复制前，描记正常大鼠肢体II导联心电图，在ISO复制模型后12h，心电图J点上升0.05mV即说明模型复制成功[2]。

　　1.3.2　病理苏木素伊红(HE)染色和免疫组化染色：于实验第7d和第28d分别从模型对照组、蒙药低剂量组、蒙药高剂量组和卡托普利组各取6只大鼠处死，迅速摘取心脏，在乳头肌横切面切取心肌组织，10%福尔马林液固定，分别进行HE染色和免疫组化染色。

　　(1)微血管密度 (microvessel density，MVD)的检测：心肌组织CD34免疫组化染色后，显示血管内皮细胞胞浆被染成棕黄色和棕褐色为阳性表达。微血管判断标准：任何被CD34染成阳性的单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为一个血管计数。(2)缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor1α，HIF-1α)蛋白表达：HIF-1α免疫组化染色后的切片，细胞胞浆被染成棕黄色和棕褐色为阳性表达。每张切片在低倍视野(×100)下找到梗死灶边缘区HIF-1α阳性表达，随机选取5个视野采集图像后进行定量分析，结果以平均灰度值表示，平均灰度值大蛋白表达水平低，反之则示表达增强。

　　1.4　统计学分析

　　采用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理，检测结果数据以均数±标准差(x-±s)方式表示，多组资料间比较用方差分析，组间两两比较采用t检验，P<0.05为差异有显著性。

　　2　结　果

　　2.1　光镜下病理形态学改变

　　7d时模型对照组可见心肌呈广泛性片状坏死，部分坏死灶间相互连接，坏死灶内及周围可见大量的炎性细胞浸润，各治疗组心肌坏死呈灶性片状分布，灶间无连接，各组均可见心肌纤维排列紊乱、变粗，间隙增宽。28d各治疗组较模型对照组坏死灶面积缩小，各组均可见心肌纤维化改变。42d模型对照组心肌内可见严重的心肌纤维化，心肌排列紊乱，各治疗组心肌纤维化程度减轻，心肌排列整齐。

　　2.2　大鼠心肌梗死灶边缘区的MVD

　　可见 CD34在血管内皮细胞胞浆有阳性表达。光镜下观察梗死灶边缘区心肌组织。7d、28d和42d时蒙药低、高剂量组与模型对照组相比MVD均明显增加(P<0.01),28 d、42 d时卡托普利组与模型对照组相比MVD明显增加(P<0.01)，蒙药低、高剂量组与卡托普利治疗组相比差异无显著性(P>0.05)。见表1。表1　各组大鼠7d、28d、42d的微血管密度(个/HP)比较

　　2.3　HIF-1α蛋白表达

　　7d时HIF-1α蛋白在心肌细胞和血管内皮细胞的胞浆有表达，与模型对照组相比，蒙药低、高剂量组的HIF-1α蛋白表达均明显增强(P<0.01);而卡托普利组与模型组比较无显著差异(P>0.05)。28d、42d时各组均无HIF-1α蛋白表达。见表2。表2　各组大鼠7d 时缺氧诱导因子1α平均灰度值

　　3　讨　论

　　血管生成(angiogenesis)是指从已存在的微血管床上芽生出新的，以毛细血管为主的血管系统的过程，此过程与血管生成诱导因子和内源性血管生成抑制因子间的“平衡与失衡”相关[3,4]。炎症、缺血和缺氧是诱导血管生成的主要原因，当心肌梗死时缺血心肌可代偿性地促进血管生成增加，建立冠脉侧支循环，但这种代偿不足以满足机体改善心肌供血的需要。已有研究表明，外源性给予HIF-1可促进缺血心肌冠脉侧支的血管生成[5]。MVD是评估血管生成的标准之一;CD34标记血管内皮细胞的特异性较高，优于其它血管内皮细胞标记物[6]。本实验结果显示：心梗后模型对照组MVD值持续升高，与临床表现和文献报道一致。7d、28d和42d时蒙药低、高剂量组较模型对照组MVD明显增加，证实顺气补心十一味丸能促进心肌梗死大鼠缺血心肌的血管生成增加，蒙药低剂量组与高剂量组之间相比无显著差异。

　　出生后的血管生成主要是由原有血管上充分分化的内皮细胞经增殖、迁移、重塑等过程而形成，这些与心肌缺血时促血管生成因子的表达增加有关。心肌梗死患者和急性缺血动物心肌的HIF-1α的表达均明显增强。动物实验研究表明，上调或增加HIF-1α可促进大鼠缺血心肌的冠脉侧支血管形成[7]。HIF-1α是一个对缺氧非常敏感的标志物， 它在心肌急性缺血后数分钟即有基因表达上调， 之后出现蛋白质表达上调，如果诱因反复存在， 其表达将持续升高。HIF-1α可以介导心肌缺血和梗塞早期的适应性反应，它是心肌缺血后一系列分子反应的启动因子之一，已成为心肌急性缺血的时间标志物，而且HIF-1α可以通过多种环节促进细胞移行，有利于血管新生。

　　本实验结果显示：7d时蒙药低、高剂量组与模型对照组相比HIF-1α表达明显增强，提示在7d时蒙药顺气补心十一味丸可上调心肌梗死大鼠缺血心肌的HIF-1α蛋白表达，继而促进缺血心肌的血管生成。各检测组7d时梗死灶边缘区均有HIF-1α蛋白表达而在28d和42d均无表达。

　　总之，本研究发现顺气补心十一味丸能促进心肌梗死大鼠缺血心肌的血管生成，对缺血心肌有保护作用，其机制可能与上调缺血心肌的HIF-1α蛋白表达有关。

　　【参考文献】

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