ET-1 SP-B在肺水肿组织中表达的研究

　　作者：郁葱颖,刘海丽,段庆华,钦建平　　作者单位：河北省承德市中心医院病理科， 河北 承德

　　【摘要】 目的：探讨各型肺水肿病理形态改变及ET-1、SP-B表达对发病机制的相关性研究。方法:20例对照组病例因肺部肿瘤行右肺全切术，经病理学检查右肺中叶没有肿瘤细胞侵犯。76例尸检组光镜观察肺组织病理学改变，并应用免疫组化方法测定病例肺组织SP-B 、ET-1的含量。结果:76例尸检组肺组织SP-B含量较对照组明显减少，ET-1含量明显增多(P<0.05)。结论:ET-1 、SP-B在导致各型肺水肿发生的肺损伤中均有明显的相关性;ET-1、SP-B在各型肺水肿组织表达呈明显负相关性。

　　【关键词】 ET-1,SP-B, 尸 检,肺水肿,免疫组化

　　Abstract： Objective: To study the role of ET-1、SP-B in the meehinic of disease in pulmonary edema. Method:20 patients in control group was excised the right line for lung cancer. 76 cases of autopsy group in pulmonary edema, by immunohistochemical method to study the role of SP - B, ET - 1 in lung tissue. Result: The results of the role of SP-B was decreased than the control group, and ET - 1 increased obviously(P < 0.05). Conclusion: The role of ET - 1, SP - B is obviously related to pulmonary edema .

　　Key words： ET-1; SP–B; Autopsy; Pulmonary edema; Immunohistochemistry

　　肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)是肺表面活性物质的重要组分之一，它与肺损伤的发生与发展密不可分，它即是肺损伤的结果，同时也是肺损伤过程中的重要内在因素。由内皮素-1(ET-1)引起的白细胞在肺内潴留、坏死、崩解而导致的炎性损伤过程可能是肺水肿发生的重要机制，同时它可直接激活细胞膜上的卵脂酶A2，加速花生四稀酸代谢，产生大量自由基，使细胞膜通透性增加，肺水肿形成。本课题通过尸检病例肺水肿不同分型及分期的病理形态改变，以及ET-1、 SP-B的表达对发病机制的探讨，将为干预和治疗急危重病人肺水肿提供可靠依据。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料：收集承德市中心医院病理科自1996年至2009年有明确病理诊断的急性肺水肿尸检病例76例,均在死后24～48h以内进行尸体解剖，选取的肺组织未发现明显自溶现象。男性46例,女性30例,年龄3～76岁，中位年龄51±12.5岁。其中神经源性肺水肿32例，非神经源性肺水肿44例。另取同期因肺部肿瘤行右肺切除术，并经病理学证实没有肿瘤细胞侵犯的正常肺组织20例做为对照。

　　1.2 方 法

　　1.2.1 标本取材制片：所有标本均经10%中性福尔马林充分固定，取各组病例的右肺中叶，楔形切除2. 5 cm×2.0cm×1. 0 cm大小肺组织，常规石蜡包埋，切片厚5μm，HE染色，观察肺组织的形态学变化。

　　1.2.2 免疫组化：采用SP法免疫组化染色，一抗：兔抗人Endothelin(ET-1)单克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司(工作浓度1：300)，鼠抗人Surfacthant proteinA(SP-B)单克隆抗体购自福州迈新生物技术开发有限公司(即用型)。二抗：即用型SP试剂盒。显色剂：DABKit(20X)，购自中杉金桥生物技术公司。

　　1.3 结果判断：SP-B免疫组化结果半定量分析[1]：每张切片在图像分析系统40倍物镜下随机选取10个视野(避开大血管及支气管)，数出每个视野内(S=0.199mm2)肺泡数(Na)和SP-B阳性肺泡上皮细胞数(N)，按以公式计算单位肺泡SP-B阳性肺泡上皮细胞个数(单位肺泡阳性肺泡上皮细胞=N/Na)。ET-1免疫组化图象分析[2]：尸检组及对照组肺组织免疫组化染色切片用(MOTIC MED 6.0)数码医学图像分析系统进行分析(每组5张切片)计算每张切片5个肺小血管壁及5个细支气管壁的ET-1平均光密度值(OD)。

　　1.4 统计学处理:应用SPSS12.0软件包，组间比较应用方差分析。

　　2 结 果

　　2.1 肺大体形态和组织病理学变化:76例尸检病例均有不同程度的肺水肿病理变化。大体形态表现为肺脏肿胀，被膜紧张，边缘变钝，颜色呈红褐色或暗红色，肺间裂和肺表面可见点片状浆膜下出血。肺重量明显增加，切开肺实质可见泡沫状液体从切面流出。光镜下肺泡壁毛细血管扩张充血，可见透明血栓，部分肺泡萎陷;肺泡间隔炎症细胞浸润，肺泡间隔加宽，含粉红色水肿液;肺泡内充满红染均质蛋白性液体，部分可见红细胞、白细胞及脱落的上皮细胞。

　　2.2 免疫组化结果:SP-B免疫组化结果：各组均可见SP-B阳性肺泡II型上皮细胞表达，尸检组较对照组SP-B肺组织阳性上皮细胞明显减少(P<0.05)。而神经源组和非神经源组SP-B阳性表达数量无统计学差异(P>0.05)。ET-1免疫组化图象分析结果:各组肺血管内皮及平滑肌和细支气管上皮及平滑肌对ET-1均呈阳性表达。与对照组相比，神经源性肺水肿组和非神经源性肺水肿组的光密度值均明显增加(P<0.05)，而神经源组和非神经源组ET-1的光密度值无统计学差异(P>0.05)，SP-B、ET-1在各型肺水肿组织表达呈明显负相关性。见表1。表1 SP-B、ET-1免疫组化检测(略)注：与对照组比较，* P<0.05

　　3 讨 论

　　在尸检组病例中,我们观察到SP-B在肺组织表达明显减少甚至消失， ET-1表达明显增多，有统计学差异。

　　有研究显示，肺泡表面活性蛋白主要由肺泡Ⅱ型细胞合成与分泌,分疏水性蛋白SP-A、SP-D和亲水性蛋白SP-B、SP-C。SP-B是减小肺泡表面张力的主要相关蛋白,它在板层小体、髓鞘小管内水解成熟后分布于气液界面起降低肺泡表面张力的作用[3]。SP-B表达明显减少使得肺泡呼气末塌陷，无气体交换功能，导致急性肺水肿的发生。ET为内皮细胞分泌释放的一种具多种活性功能的血管活性多肽，他是迄今认为在体内作用最强、持续时间最久的缩血管物质[4]，损伤后ET-1含量升高，升高的ET-1选择性的作用于肺血管内皮和平滑肌，使其收缩，肺血管动力学发生改变[5]。此外 ，有研究证明：ET-1可直接激活细胞膜上的磷脂酶A2，加速花生四烯酸代谢，产生大量自由基，使细胞膜通透性增加，肺水肿形成[6]。ET-1还可促进多种细胞分裂、增殖、合成、分泌多种生物活性物质，如PGI2，IL-6，TNF-1等，间接使肺血管通透性增加[7]。

　　有研究表明，使用外源性表面活性物质(PS)，可以弥补肺损伤(ALl)时内源性PS的数量减少和功能降低而达到治疗肺损伤(ALl)的目的。本课题证实人体肺损伤时SP-B含量明显降低，提示使用外源性表面活性物质治疗肺水肿具有积极意义。

　　【参考文献】

　　[1]韩业兴,谷建平,靳国硕,等.神经源性肺水肿研究进展[J].中国法医学杂志,2007,22(4):250-251.

　　[2]孟颖,赵举,阮应茆.外源性肺表面活性物质对离体鼠肺缺血再灌注损伤的作用[J].中国医学科学院学报,2004,26(3):302-305.

　　[3]李敏才,时燕,李娜萍,等. 表面活性蛋白B在新生儿肺透明膜病中的作用[J].华中科技大学学报(医学版),2007,2(36):169-172.

　　[4]Okada M, W amashita C,Okada M ,et al.Contribution of endothelin l to warm ischemia / reperfusion injury of the rat lung [J].Am Respir Crit Care Med,1995,152(6.Pt1):2105-2110.

　　[5]段国贤，等.内皮素-1在神经源性肺水肿中的作用[J].中国应用生理学杂志，2004，20(3)：268-270.

　　[6]Helset E kjaeve J Hauge A.Endothelin l induced increases in microvascular permeability in isolated perfusedrat rcqurcs lcukocytcs and plasma[J].Circ Shock，1993, 39(1)：15-20.

　　[7]Okada M, W amashita C,Okada M , () al.Contribution of endothelin l to warm ischemia / reperfusion injury of the rat lung[J].Am Respir Crit Care Med,1995,152(6.Pt1):2105-2110.