自身免疫性肝病患者自身抗体谱的检测及临床应用

　　作者：张健　纪龙　徐瑞亮　王文龙　孙敏　李莉　申爱华　李永哲 作者单位：272029　山东济宁，济宁医学院附属医院检验科(张健、徐瑞亮、王文龙、李莉、申爱华)，消化科(纪龙);济宁传染病医院检验科(孙敏);北京协和医院风湿免疫科(李永哲)

　　【摘要】 目的　探讨联合检测多种自身抗体在原发性胆汁性肝硬化(PBC)及自身免疫性肝炎(AIH)诊断中的价值及临床意义。方法　用免疫印迹法分别检测2005～2009年济宁医学院附属医院及北京协和医院、山东省立医院、济宁传染病医院提供的32例PBC患者、27例AIH患者和7例健康体检者血清中的抗线粒体(AMA)-M2亚型抗体、抗3E(BPO)抗体、抗Sp100抗体、抗早幼粒细胞性白血病(PML)抗体、抗gp210抗体、抗肝肾微粒体-1(LKM-1)抗体、抗肝特异性胞质1型(LC-1)抗体、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原抗体(抗SLA/LP抗体)、 抗Ro-52抗体。结果　32例PBC中抗AMA-M2抗体、抗3E(BPO)抗体、抗Sp100抗体、抗PML抗体、抗gp210抗体、抗LC-1抗体、抗SLA/LP抗体、 抗Ro-52抗体阳性率分别为81.25%、78.13%、15.63%、56.25%、46.88%、9.38%、6.25%、56.25%，而以上8种自身抗体在27例AIH患者中的阳性率分别为18.52%、18.52%、14.81%、14.81%、7.41%、3.70%、7.41%、66.67%。抗LKM-1抗体在PBC中未检测出，而在AIH的阳性率为11.11%。抗AMA-M2抗体对PBC诊断的敏感度达81.25%，特异度达86.00%;抗3E(BPO)抗体对PBC诊断的敏感度达78.13%，特异度达89.00%;抗PML抗体对PBC诊断的敏感度达56.25%，特异度达75.00%;抗gp210抗体对PBC诊断的敏感度达46.88%，特异度达86.35%，未检测到抗LKM-1抗体。抗LKM-1抗体对AIH诊断的敏感度为11.11%，而特异度为100.00%。结论　抗AMA-M2抗体、抗3E抗体、抗PML抗体、抗gp210抗体的联合检测对PBC的诊断有着较高的应用价值，而对AIH的诊断意义不大，而LKM-1对PBC的诊断没有价值，而对AIH具有较高的诊断价值。自身免疫性肝病自身抗体谱检测对PBC、AIH诊断、鉴别诊断、治疗及预后判断均有重要意义。

　　【关键词】 肝硬化，胆汁性;　肝炎，自身免疫性;　自身抗体

　　自身免疫性肝病是患者自身免疫系统攻击肝脏引起的炎症和肝细胞坏死，其特征是慢性和进展性的，其主要包括自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)、原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC)、原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis，PSC)[1]。自身免疫性肝病发病机制与免疫功能异常密切相关，自身抗体在发病机制中起重要作用。每种自身免疫性肝病都具有特征性自身抗体，因此自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断、分型及鉴别诊断具有重要意义，肝病相关自身抗体谱检测也已逐步成为自身免疫性肝病实验室诊断的常用指标[2]。本文拟对59例自身免疫性肝病患者的自身抗体检测结果加以分析，以评估不同自身抗体在不同类型自身免疫性肝病中的特征表达及检测意义。

　　一、对象与方法

　　1. 研究对象：59例自身免疫性肝炎患者均来自济宁医学院附属医院、北京协和医院、山东省立医院、济宁传染病医院住院及门诊患者，并得到以上医院的认可。其中，PBC 32例，其中女31例，男1例，平均年龄(40±15)岁。AIH 27例，女21例，男6例，平均年龄(42±17)岁。所有患者甲、乙、丙、丁、戊病毒性肝炎血清标记物均阴性。另选取7例健康体检者为正常对照组，来自济宁医学院附属医院，并得到患者的许可，均为证明无疾病的健康体检者，所有入选者均签署知情同意书。

　　2. PBC及AIH诊断依据：PBC按2000年美国肝病学会(AASLD)PBC诊断指导建议诊断标准[3]进行诊断;AIH按1999年国际AIH小组会议中提出临床诊断积分系统进行诊断，总分在治疗前超过15分者为确定诊断，10～15分者为可能的AIH;治疗后总分超过17分者为确定诊断，12～17分者为可能的AIH。

　　3. 检测项目及检测方法：试剂为德国欧蒙医学诊断股份公司新产品，能够同时检测抗线粒体(AMA)-M2亚型抗体、抗3E(BPO)抗体、抗Sp100抗体、抗早幼粒细胞性白血病(PML)抗体、抗gp210抗体、抗肝肾微粒体-1(LKM-1)抗体、抗肝特异性胞质1型(LC-1)抗体、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)抗体、 抗Ro-52抗体，方法采用免疫印记法，并能够半定量出结果，本研究操作方法严格按试剂说明书进行。

　　4. 统计学处理：数据均采用SPSS 17.0软件进行统计分析。抗体阳性率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　二、结果

　　32例PBC及27例AIH患者的各抗体阳性率检测结果见表1。抗LKM-1抗体在PBC中未检测出，而在AIH的阳性率为11.11%。抗AMA-M2抗体对PBC诊断的敏感度达81.25%，特异度达86.00%;抗3E(BPO)抗体对PBC诊断的敏感度达78.13%，特异度达89.00%;抗PML抗体对PBC诊断的敏感度达56.25%，特异度达75.00%;抗gp210抗体对PBC诊断的敏感度达46.87%，特异度达86.35%，未检测到抗LKM-1抗体。抗LKM-1抗体对AIH诊断的敏感度为11.11%，而特异度为100.00%。综上所述，抗AMA-M2抗体、抗3E抗体、抗PML抗体、抗gp210抗体的联合检测对PBC的诊断有着较高的应用价值，而对AIH的诊断意义不大，而LKM-1对PBC的诊断没有价值，而对AIH具有较高的诊断价值。联合在一起对于自身免疫性肝病的筛查可起到重要作用，自身抗体的检测最怕漏检。　表1　32例PBC和27例AIH联合检测多种自身抗体结果

　　三、讨论

　　目前对于自身免疫肝病实验室的检测，仅仅是对单个抗体的诊断，特异抗体的阳性对疾病的诊断有重要意义，如何将几种最特异的抗体联合诊断一直困绕着检验界。本研究将与自身免疫性肝病相关的各种最特异的抗体捆在一起，并应用先进的免疫印迹的技术，进行粗筛及定性，一次结果全部出来，用时仅2 h，实验室能够为临床提供更多的依据，极大地增加了自身免疫性肝病的诊断率，使临床不容易漏诊。诊断每种抗体的作用论述如下。

　　抗AMA抗体是一种以线粒体为靶抗原、无种属和器官特异性的自身抗体，PBC患者中的抗AMA抗体阳性率高达95%，此项检测已成为PBC诊断的重要实验室指标。抗AMA-M2抗体以线粒体内膜上的2-酮酸脱氢酶复合物为靶抗原的抗AMA-M2抗体亚型抗体，是PBC患者的高度特异性自身抗体，敏感性为95%～98%，特异性为86%～97%[4-5]，而本研究抗AMA-M2抗体抗体的敏感性为81.25%，比以上报道的结果低，究其原因可能与检测方法的差异及人种等因素有关，此尚需进行进一步研究。采用天然M2抗原和重组蛋白BPO检测抗AMA-M2抗体，其灵敏度较单独使用天然的M2抗原检测方法要高。本研究发现AMA-M2抗体与抗3E抗体在PBC诊断的敏感度为81.25%与78.13%，在AIH均为18.25%，而且抗AMA-M2抗体与抗3E抗体一定同时出现，所以应用此项目检测能够提高自身免疫性肝病的诊断率。抗Sp100抗体与抗PML抗体都表现为核点型荧光染色模型，抗Sp100抗体在PBC患者中的阳性率为10%～30%，其他肝病患者均为阴性[6]。本研究结果抗Sp100抗体在PBC患者中的阳性率为15.63%，AIH为14.81%，与文献报道基本一致。本研究发现PBC中抗AMA-M2抗体与抗Sp100抗体同时出现，AIH两者可不同时出现，表明联合应用检测能够提高PBC及AIH的诊断率。抗gp210抗体被认为是PBC的高度特异性抗体，其诊断PBC的特异性高达96%～99%，本研究其阳性率为46.88%，该抗体极少见于AIH，本研究阳性率为7.41%，和文献报道基本一致。本研究表明抗gp210抗体在PBC中阳性率较高，可以作为报道PBC的粗筛。

　　目前常规检测抗LKM抗体以抗LKM-1抗体为主。抗LKM-1抗体为AIH-Ⅱ型血清特异性抗体，敏感性为90%，在AIH中检出率较低，约为10%[7]，本研究为11.11%，而PBC患者阳性率为0，提示这项指标对于AIH诊断的特异性高，AIH中抗LKM-1抗体阳性患者，较多具有典型的自身免疫现象，大多为青年女性。抗SLA抗体在非自身免疫性肝病中不能检出，为AIH高度特异性自身抗体。抗肝-胰抗体(抗LP抗体)被许多学者证明为AIH高度特异性自身抗体，目前认为SLA/LP是同一抗原，SLA/LP抗原是分子量为50 kD的细胞溶质分子，被称为UGA抑制物tRNA相关蛋白，抗LP抗体和抗SLA抗体合称抗SLA/LP抗体，抗SLA/LP抗体可能与AIH的发病机制有关[8]。抗SLA/LP抗体为公认的少数AIH高度特异性自身抗体，在AIH所有相关自身抗体中最具有诊断价值。抗SLA/LP抗体在AIH中的阳性率为10%～30%。本研究结果为AIH 7.41%，与文献相比要低一些，可能和病例数少有一定的关系。

　　在临床上抗LC-1抗体多见于年龄<20岁的年轻AIH患者，抗HCV与抗LC-1抗体没有交叉反应，因此抗LC-1抗体对诊断AIH要优于抗LKM-1抗体。本研究表明抗LC-1抗体和抗LKM-1阳性率很低，这可能与AIH-Ⅱ型在AIH占的比例低有关。临床研究已表明抗Ro抗体在系统红斑狼疮患者血清阳性率为30%～50%，干燥综合征为50%～80%，新生儿红斑狼疮为95%～100%，亚急性皮肤红斑狼疮为60%，类风湿性关节炎为3%～5%，成为所有已知的抗PNP抗体中分布最广、最常见的一种抗体[9]。本研究发现其阳性率较高，其特异性较差，故其可作为自身免疫性疾病粗筛抗体。

　　检测PBC及AIH患者中9种基质片中抗AMA-M2抗体、抗3E抗体、抗Sp100抗体、抗PML抗体、抗gp210抗体、抗LKM-1抗体、抗LC-1抗体、抗SLA/LP抗体和抗Ro-52抗体结果发现，PBC患者中抗AMA-M2抗体、抗3E抗体相对较高，表明抗AMA-M2抗体、抗3E抗体与PBC患者存在密切的相关性。AIH患者的抗Ro-52抗体最高，抗Ro-52抗体与AIH患者存在密切的相关性。本研究还发现抗AMA-M2抗、抗3E抗体、抗Sp100抗体、抗PML抗体与AIH疾病有着密切的关系。抗AMA-M2抗体、抗3E抗体、抗PML抗体、抗gp210抗体的联合检测对PBC的诊断有着较高的应用价值，而对AIH的诊断意义不大，而抗LKM-1抗体对PBC的诊断没有价值，而对AIH具有较高的诊断价值。本研究利用先进的免疫印记法将9项有诊断价值的抗体放到一起检测，极大地方便了实验室诊断，增加了检测出自身免疫性肝病的机会，对于PBC及AIH的免疫学诊断与分型提供了可靠的依据。

　　因此对自身免疫性肝病的早期发现和临床诊断显得尤为重要。临床根据自身特异性抗体的联合检测结果，更能有利于作出自身免疫性肝病的诊断，目前检测抗体的试剂已由德国欧蒙医学实验诊断股份公司大批量生产，已经应用于全国各大医院，对于提高自身免疫性肝病的诊断率有着重要的意义。

　　【参考文献】

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