姜黄提取物对血管性痴呆模型小鼠内皮素及降钙素基因相关肽的影响

　　作者：袁耀欣 王四平 王亚利 张拴成 张雪静 作者单位：邢台医学高等专科学校，河北 邢台 054000

　　【摘要】 目的 探讨姜黄提取物治疗血管性痴呆(VD)的作用机制，为临床治疗VD提供理论依据。方法 采用脑缺血再灌注(I/R)合并尾部放血降压的方法制备VD小鼠模型，利用跳台实验观察小鼠行为学变化，放射免疫学方法检测小鼠血清及脑组织中降钙素基因相关肽(CGRP)和内皮素(ET)含量的变化。结果 姜黄提取物可使VD模型小鼠的反应时间缩短，潜伏期延长，错误次数减少，与模型组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01);同模型组相比，姜黄提取物高、中、低剂量组小鼠血清及脑组织中CGRP水平升高，ET水平下降，以高、中剂量组效果显著(P<0.01或P<0.05)。结论 姜黄提取物能改善VD模型小鼠学习记忆能力，其作用机制可能与其改变血清及脑组织的ET、CGRP含量，调节两者平衡有关。

　　【关键词】 姜黄提取物,血管性痴呆,内皮素;降钙素基因相关肽

　　【Abstract】 Objective To investigate the action role of the extractive from curcumin in the treatment of vascular dementia (VD), to provide the theory bases on the clinical treatment. Methods The mice model of vascular dementia was induced by the method of cerebral ischemia reperfusion and blood pressure reduction through tail bloodletting. The changes in the behavior of the mice model were observed by platform jumping test, and the changes of calcitionin peptide and endothelin in the serum and in the brain tissue were detected by radioimmunoassay.Results The extractive from curcumin shortened the response period, prolonged the latent period and reduced the error times, and there was significant difference between two groups(P<0.05 or P<0.01), the ET levels in the serum and in the brain tissue in the extractive from curcumin group of high, middle and low dosage were lower than those in model group, and CGRP levels were higher than that in model group, but the effects of high and middle group were better than those of the latter (P<0.01, P<0.05). Conclusions The extractive from curcumin could improve the learning and memorizing abilities in mice model of VD, which might be related to their changing the levels of ET and CGRP and balance between two levels.

　　【Key words】 The extractive from curcumin; Vascular dementia; Endothelin (ET); Calcitionin generelated peptide (CGRP)

　　目前研究认为，缺血性脑卒中与血管性痴呆(VD)发生关系最为密切〔1〕。中医学对于AD早有记载，其独特的理论及丰富的医疗实践已在VD的防治中取得了较好的疗效。但关于姜黄素对反复缺血再灌注(I/R)过程中神经肽的影响尚未见报道。本实验通过观察姜黄提取物对VD模型小鼠学习记忆及血浆、脑组织中内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(calcitionin generelated peptide，CGRP)的影响，探讨姜黄提取物治疗VD的机制，为临床防治VD提供科学依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物 清洁级雄性昆明种健康小鼠，体重28～32 g，6 w龄，由河北医科大学实验动物学部提供，实验动物质量合格证编号：605143;许可证号：SCXK(冀)20031003。普通喂养。

　　1.2 方法

　　1.2.1 药物、试剂及仪器 姜黄提取物(从中药姜黄中提取的有效组分，其中姜黄素含量为66%，去甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素含量为8%，由本课题组提供)用时以0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)配制成所需浓度;甲磺酸双氢麦角毒碱片(商品名：喜得镇，1 mg/片，天津华津制药厂、北京诺华制药有限公司合作生产，生产批号：040522);ET、CGRP试剂盒均购自解放军总医院科技开发中心放免所;小动物跳台仪(JXDT1型，冀星实验仪器有限公司研制)。

　　1.2.2 模型制备及分组 将小鼠适应性饲养1 w后，参照文献〔2〕行双侧颈总动脉反复I/R合并尾部放血降压方法建立VD小鼠模型。术前12 h禁食不禁水。用水合氯醛以350 mg/kg的浓度腹腔注射麻醉后，将小鼠仰卧固定于手术台上。消毒后沿颈正中切口，分离双侧颈总动脉(CCA)，丝线结扎阻断CCA，20 min后再灌注10 min，如此反复2次，第1次缺血时在距小鼠尾尖1 cm处剪断放血约0.3 ml。术中保持动物肛温在(37±0.5)℃。其中假手术组只分离CCA，套丝扣，但不阻断血流，尾部不放血，观察时间与其他组相同。将造模成功的小鼠，随机分为6组，每组13只。即假手术组、模型组、喜得镇组(0.7 mg/kg)、姜黄提取物低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组。姜黄提取物和喜得镇均用5 g/L CMC配制。各组术后第2天开始灌胃，灌胃容量为0.1 ml/10 g，假手术组和模型组灌服等量5 g/L CMC，1次/d，连续灌胃20 d。

　　1.2.3 行为学观察 末次给药后进行行为学观察。测试装置为被动回避反应箱。将小鼠放在此装置中适应3 min，然后接通电流，动物受到电击后逃避反应为跳上橡皮台以躲避电击。记录小鼠首次受电击后跳上安全台所需时间(反应时间)、5 min内受电击次数(错误次数)作为其学习成绩。24 h后，在通电情况下，将小鼠置于安全台上，记录小鼠首次从安全台跳至铜栅所需时间(潜伏时间)、5 min内受电击次数(错误次数)作为其记忆成绩。

　　1.2.4 ET及CGRP检测 行为学检测完毕后，将各组小鼠分批断头取血，分离血清，离心10 min(4℃，3 000 r/min)，置-20℃备用;冰盘上开颅取脑，弃去嗅球和小脑，定量称取大脑皮层组织，用预冷的生理盐水制成10 g/L匀浆，离心15 min(4℃，3 000 r/min)，取上清液-20℃保存。采用放射免疫分析法测定血浆及脑组织ET、CGRP浓度(其中，各组随机取3只小鼠大脑，作病理切片。模型组死亡1只)。

　　1.3 统计学分析 数据以x±s表示，采用SPSS11.5统计软件进行组间t检验。

　　2 结果

　　2.1 姜黄提取物对VD小鼠学习和记忆成绩的影响 模型组较假手术组反应期延长，潜伏期缩短，错误次数增多(P<0.01)。姜黄提取物各剂量组及喜得镇组与模型组比较，可使反应期缩短，潜伏期延长，错误次数减少。见表1。

　　2.2 姜黄提取物对VD小鼠血清及脑组织中ET、CGRP的影响 同假手术组相比，模型组小鼠脑组织及血清ET含量明显升高，CGRP含量明显下降(P<0.01或P<0.05)。同模型组相比，姜黄提取物高、中剂量组ET含量明显降低，CGRP含量明显升高(P<0.01或P<0.05);小剂量组ET含量略降低，CGRP含量略升高，但无统计学意义(P>0.05)。喜得镇组虽ET含量下降，但无统计学意义(P>0.05)，CGRP含量显著升高(P<0.05)。见表2。

　　表1 姜黄提取物对VD小鼠学习和记忆成绩的影响(略)

　　与模型组相比：1)P<0.05，2)P<0.01，下表同

　　表2 姜黄提取物对VD小鼠血清和脑组织ET、CGRP的影响(略)

　　3 讨论

　　VD的病因较复杂，但反复脑缺血所致多部位损害是其主要病因之一，其发生发展过程中涉及诸多因素的参与。近年关于药物对VD中枢神经肽影响的临床与实验研究日益增多。神经肽是具有生物活性的多肽，在脑内发挥多种生理和药理作用。ET 是目前已知作用最强、效应最持久的内源性血管收缩神经肽，由脑内胶质、血管内皮细胞分泌，广泛分布于中枢神经系统和血管内皮细胞。目前认为，在缺血性脑血管病发病过程中，ET 可使血管进一步收缩痉挛，加重脑缺血〔3，4〕，还可能对脑神经元或神经胶质细胞造成直接损害〔5〕。CGRP是目前发现的体内作用最强的一种舒血管神经肽，对全身血管有不同程度的扩张作用，对心、脑血管的作用尤为显著，可逆转血管痉挛和改善血液循环，明显增加脑缺血后的血流量，减少缺血性脑损伤的范围，拮抗ET的作用〔6〕。另有文献报道，CGRP对缺血性脑组织神经元具有保护作用，具有增加脑血流和保护脑神经的双重功能，可减轻I/R脑组织的损伤，减少缺血脑组织神经元的凋亡〔7，8〕。作为一种保护性神经肽，缺血性脑血管病时CGRP含量降低，不利于神经细胞功能的恢复。在正常情况下CGRP与ET相对稳定，呈动态平衡。有实验证明，CGRP不影响血浆ET的基础含量及基础释放，但能抑制病理条件下ET的大量释放〔9〕。两者平衡破坏后ET大量释放，不利于缺血区域或侧支循环血管的开放，进而使局部缺血持续加重，损伤亦加重，这是其导致I/R损伤的一个重要机制〔10〕。

　　姜黄提取物为黄色的结晶体，是从中药姜黄中提取的有效物质，其提取工艺稳定，其中姜黄素含量为66%，去甲氧基姜黄素和双脱甲氧基姜黄素含量为8%，总姜黄素含量为74%，含量稳定，具有可重复性。作为一种常用的传统中药，祖国医学认为姜黄具有破气行血、通经止痛的功效。姜黄素是中药姜黄最重要的活性成分，现代药理研究证明其有广泛的生物活性：抗氧化、抗凝、降血脂、抗炎、抗肿瘤、提高免疫力等，且毒性低，可适用于临床多种病症〔11〕。有研究表明，对I/R造成的脑损伤，姜黄素可从多条途径发挥保护效应〔12，13〕。

　　本研究表明，姜黄提取物高、中、低剂量可使VD小鼠反应期缩短，潜伏期延长，错误次数减少。提示姜黄提取物可改善VD小鼠的学习记忆能力。并且，姜黄提取物可升高VD小鼠血清及脑组织中CGRP水平，降低ET含量，表明姜黄提取物调节CGRP和ET的平衡关系，是其治疗VD的可能机制之一。

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