Survivin和nm23H1及PTEN蛋白在胆囊癌组织中的表达及其相关性研究

　　作者：谷化平 尚培中 作者单位：中国人民解放军第251医院　1病理科　2普外科　(河北　张家口　075000)

　　【摘要】目的：探讨Survivin(SVV)和nm23H1及PTEN蛋白在原发性胆囊癌组织中的表达与癌组织类型、病理分级和转移状况的关系,以及SVV与nm23H1和PTEN表达之间的相关性。方法：应用免疫组化方法检测52例胆囊腺癌、20例胆囊腺瘤和20例慢性胆囊炎组织中SVV、nm23H1和PTEN表达水平。结果：在胆囊癌中SVV、nm23H1和PTEN表达阳性率分别为67.3%, 51.9%和42.3%。SVV高表达和nm23H1及PTEN低表达与胆囊癌的分化程度、浆膜浸润和转移密切相关(P<0.05)。SVV表达与nm23H1和PTEN蛋白表达呈负相关(P<0.05)。结论：检测SVV和nm23H1及PTEN基因蛋白表达可作为评价胆囊癌生物学行为的参考指标。

　　【关键词】 胆囊肿瘤　基因表达调控　肿瘤转移　免疫组织化学

　　Expression and correlation of survivin and nm23H1 and PTEN in gallbladder carcinoma

　　GU Hua-ping1, SHANG Pei-zhong2

　　1Department of Pathology, 2Department of General Surgery, Chinese PLA 251 Hospital (Zhangjiakuo 075000, China)

　　【ABSTRACT】 Objective: To study the relationship of the expression of survivin (SVV), nm23H1 and PTEN protein with the pathology, differentiation and metastasis of gallbladder cancer. Methods: Immunohistochemical method was used to investigate the expression of SVV, nm23H1 and PTEN gene in 52 cases of gallbladder carcinoma, 20 cases of gallbladder adenoma and 20 cases of chromic cholecystitis. Results: The positive rate of SVV, nm23H1 and PTEN was 67.3%, 51.9% and 42.3% respectively. The expressions of SVV were positively correlated with the pathological grading, serosa infiltration and metastasis in gallbladder carcinoma (P<0.05). The expression of SVV had a reverse correlation with nm23H1 and PTEN expression in gallbladder carcinoma (P<0.05). Conclusion: Expression of SVV, nm23H1 and PTEN could be helpful in predicting the biological behavior and prognosis of gallbladder carcinoma.

　　【KEY WORDS】 Gallbladder Neoplasms·Gene Expression Regulation·Neoplasm Metastasis·Immunohistochemistry

　　Survivin(SVV)基因是凋亡抑制蛋白家族的重要成员，具有强烈的凋亡抑制功能和促细胞增殖活性;nm23H1基因是一种具有肿瘤转移抑制作用的基因;PTEN是一种新型抑癌基因,3种基因的表达均与肿瘤侵袭和转移有关[1-8]。本研究应用免疫组化方法联合检测胆囊癌组织中SVV、 nm23H1和PTEN基因蛋白，探讨这3种基因蛋白表达与胆囊癌临床预后性指标的关系及3种基因蛋白表达之间的相关性，为判断患者预后提供客观的参考指标。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料来源　标本取自我院1994年6月～2004年12月手术切除胆囊腺癌的患者共52例，其中男23例，女29例，平均发病年龄59.9岁(24～72岁)。病理组织学分级：高分化腺癌32例，低分化腺癌20例;伴有淋巴结和脏器(淋巴结、肝脏、胰腺、腹膜及大网膜)转移者29例，未转移者23例。取同期手术的胆囊腺瘤20例和慢性胆囊炎20例作为对照。标本经4%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。

　　1.2　试剂　鼠抗人SVV、nm23H1和PTEN单克隆抗体和LSAB试剂盒购自迈新生物技术公司(均为即用型)。

　　1.3　免疫组织化学染色　采用微波-LSAB法。切片常规脱蜡水化后，放入PBS(10 mmol/L, pH6.0)内，用YWY781A型医用微波仪170 W辐射抗原修复处理5 min，冷却后水洗。其他操作流程同常规LSAB法，不同者为三步抗原孵育和正常羊血清封闭均用微波仪130W各辐射处理5 min，保温2 min。DAB显色。实验用已知SVV阳性大肠癌、nm23H1和PTEN阳性乳腺癌组织作阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.4　结果判断　SVV、nm23H1和PTEN在细胞质有棕黄色染色者为阳性,凡未着色者为阴性。

　　1.5　统计处理　采用χ2检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　SVV、nm23H1和PTEN在胆囊良恶性病变组织中的表达　免疫组织化学染色显示，SVV、nm23H1和PTEN阳性产物呈棕黄色或棕褐色,均定位于细胞质(图1)。SVV蛋白表达阳性率在胆囊癌组织中显著高于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织(P<0.05)。nm23H1和PTEN蛋白表达阳性率在胆囊癌组织中的显著低于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织(P<0.05)。见表1。

　　2.2　SVV、nm23H1和PTEN表达与胆囊腺癌临床病理特征的关系　SVV、nm23H1和PTEN表达均与胆囊癌患者的发病年龄、性别和肿瘤大小无关,而随着胆囊癌的分化程度减低、浆膜浸润和转移程度的加深，SVV蛋白阳性表达率增高，而nm23H1和PTEN蛋白阳性表达率降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

　　2.3 SVV表达与nm23H1和PTEN表达的关系 在SVV阳性表达的35例胆囊癌患者中，nm23H1阳性者为15例(42.9%)，PTEN阳性者为11例(31.4%)，在SVV阴性的17例胆囊癌患者中，nm23H1阳性表达者为12例(70.6%)，PTEN阳性者为11例(64.7%)。胆囊癌组织中，SVV表达与nm23H1和PTEN表达呈负相关(χ2值分别为5.71和5.19, P值均<0.05)。

　　3　讨论

　　SVV是一种凋亡抑制基因，属于IAP(inhibitor of apoptosis)家族新成员，具有显著的抗凋亡作用和肿瘤特异性表达的特点，其表达与细胞周期密切相关。生理状态下，SVV主要表达于胚胎和胎儿组织，在正常成人组织中不表达(胸腺和生殖腺除外)。在癌组织中，存在不同程度的SVV表达，并与肿瘤的发生发展、不良的组织学分化、侵袭转移及预后密切相关 [1，2]。nm23是一种肿瘤抑制相关基因,分为nm23H1和nm23H2两个亚型，其编码产物二磷酸核苷激酶(NDPK)与微管聚合、G蛋白介导的信号传递、细胞与周围组织附着力、完整的基底膜形成及转录调节有关。nm23表达降低与肿瘤的淋巴结转移、高复发率及低生存率等显著相关[3]。PTEN基因是1997年在染色体10q23上克隆得到的一种新型抑癌基因。当PTEN抑癌基因突变或缺失可能构成一个新的信号转导途径，在调节细胞的增殖和死亡、细胞的转移和粘连等方面均起重要作用，与人类恶性肿瘤的发生、发展关系密切[4，5]。PTEN突变或缺失可以促进血管内皮因子形成，使血管内皮细胞增殖和肿瘤微血管的形成，从而使肿瘤的侵袭转移能力增高[6]。本研究应用免疫组化方法，检测了胆囊良、恶性病变组织中SVV、nm23H1和PTEN蛋白表达，结果显示，在胆囊癌组织中SVV蛋白阳性表达率显著高于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织(P<0.05)，nm23H1和PTEN蛋白阳性表达率均显著低于于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎组织(P<0.05);随着癌细胞分化程度减低、浆膜浸润和转移，SVV蛋白阳性表达率显著性增高(P<0.05)，与李亮等[9]人报道不完全一致,nm23H1和PTEN蛋白阳性表达率显著性减低(P<0.05)，与文献报告一致，表明在胆囊癌的发生、细胞恶性转化、侵袭和转移过程中，SVV基因起到一定促进作用，可能是胆囊癌的发生和临床进展过程中的早期事件;而nm23H1和PTEN基因在此过程中起着重要的抑制作用，可能是胆囊癌的发生和临床进展过程中的晚期事件。在临床病理活检中，检测胆囊癌组织中三种不同基因蛋白表达，从不同方面观察和综合分析，更有助于深入研究肿瘤的发生发展，并可作为诊断、预后判断和评价肿瘤生物学行为的客观指标，尤其对指导临床采用基因治疗提供依据具有更重要的意义。

　　恶性肿瘤的发生、侵袭与转移是一个复杂的生物学过程，受多种基因的调控。本研究发现，在胆囊癌组织中SVV表达与nm23H1和PTEN表达呈负相关,提示在胆囊癌的发生发展、临床进展和转移的病理过程中，这三种基因可能发挥着协同效应，共同参与了胆囊癌的演化过程。

　　【参考文献】

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　　[9] 李亮，智绪亭，张宗利，等. 凋亡抑制因子survivin在胆囊癌肿的表达及其意义[J]. 中国现代普通外科进展，2005，8(5)：292-293.