凋亡抑制因子Survivin在胆囊癌中的表达及其意义

　　作者：李亮　智绪亭　张宗利　魏其珍　曲辉

　　【摘要】目的：检测凋亡抑制因子Survivin在胆囊癌中的表达，研究其与胆囊癌临床特征的关系，探讨Survivin在胆囊癌早期诊断及治疗方面的应用。方法：采用免疫组织化学技术检测45例胆囊癌、20例胆囊息肉、20例胆囊炎及10例正常胆囊组织Survivin的表达。结果：45例胆囊癌组织中40例表达Survivin蛋白(88.9%)，而在胆囊息肉、胆囊炎及正常胆囊组织中未表达，且Survivin的表达与胆囊癌患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分级、Nevin分期、淋巴结转移无关(P均>0.05)。结论：Survivin在胆囊癌中的高表达提示其与肿瘤的发生有关，有望成为一新的肿瘤标志物应用于临床，以协助胆囊癌早期诊断和靶向性基因治疗。

　　【关键词】Survivin?胆囊肿瘤?基因表达

　　Expression and implication of survivin in gallbladder cancer

　　LI Liang,ZHI Xuting,ZHANG Zongli,WEI Qizhen,QU Hui

　　Department of General Surgery,Qilu Hospital of Shandong University(Jinan 250012,China)

　　【ABSTRACT】Objective:To investigate the expression of Survivin and its relationship with the clinical features of gallbladder cancer. Methods:45 cases of gallbladder cancer,20 cases of chronic cholecystitis,20 cases of polypoid lesions of gallbladder (PLG) and 10 cases of normal gallbladder tissues were studied, the expression of Survivin was detected by immunohistochemisty assay.Results:Of the 45 cases of gallbladder cancer,Survivin was expressed in 40 cases(88.9%).Survivin was not detected in chronic cholecystitis,PLG and normal gallbladder tissues.The expression of Survivin in gallbladder cancer had no association with the patient’s age and gender, tumor size, pathological grading,clinical stage and lymph node metastasis of gallbladder cancer(P>0.05).Conclusion:The excessive expression of Survivin in gallbladder cancer indicates that Survivin could be not only correlated with the occurrence of carcinoma but an early and common event in gallbladder carcinogenesis. Survivin will promisingly become a novel tumor marker and can be applied in the clinical practice for helping the early diagnosis as well as targeting gene therapy for gallbladder cancer.

　　【KEY WORDS】Survivin?Gallbladder neoplasms ?Gene expression

　　Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAP)家族的新成员，直接抑制终末效应蛋白半胱氨酸蛋白酶3、7(caspase3、7)的活性，是迄今为止发现的最强的凋亡抑制因子，在直肠癌中的表达及其关系已有报道[1]，本研究采用免疫组织化学技术观察Survivin在胆囊癌组织中的表达并探讨其临床意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本山东大学齐鲁医院和山东省立医院手术切除并病理学证实为胆囊癌的组织蜡块45例，男26例，女19例，年龄25～74岁(平均58.3岁)。组织学：高分化9例，中分化17例，中低分化6例，低分化13例，伴局部淋巴结转移37例。Nevin临床分期：Ⅱ期4例，Ⅲ期9例，Ⅳ期21例，Ⅴ期11例。另取20例胆囊息肉、20例胆囊炎及10例正常胆囊组织作为对照。

　　1.2 试剂与方法兔抗人Survivin多克隆抗体、SP免疫组织化学染色试剂盒、DAB显色试剂盒均购于福州迈新生物技术开发公司。应用链霉菌抗生物素蛋白过氧化酶(SP)连接免疫组织化学方法，按试剂盒说明进行染色，DAB显色，苏木素复染。用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.3 结果判定Survivin表达在细胞浆，在组织切片中，细胞胞浆染为淡黄至黄棕色者为阳性细胞标志。将阳性细胞按其数量及显色强度分为3级：弱阳性(+)：阳性细胞数>10%，显色强度淡黄或仅个别细胞呈黄至棕黄色;强阳性(+++)：阳性细胞数>60%，多数细胞呈黄至棕黄色染色;中度阳性(++)：阳性细胞数及显色强度介于弱阳性与强阳性之间;凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。

　　1.4 统计学处理应用SPSS10.0统计分析软件采用x2检验或精确概率法，取a=0.05为显著性检验水准。

　　2 结果

　　2.1Survivin蛋白在胆囊癌中的表达阳性表达40例，阳性率88.9%，其中11例表达强阳性，25例阳性，4例弱阳性(见图1(略));癌周非癌组织未见阳性表达。

　　2.2 Survivin表达与胆囊癌临床病理学关系见表1。Survivin表达与胆囊癌病理分级、Nevin分期、淋巴结转移、患者性别、年龄、肿瘤大小无关。表1 Survivin表达与胆囊癌临床病理学的关系

　　3 讨论

　　胆囊癌是较常见的消化系统恶性肿瘤，早发现、早诊断、及时手术根治切除是目前治疗胆囊癌最有效的方法，但目前临床上尚缺乏一种用于早期诊断的检验方法。

　　Survivin是由Altieri等在1997年发现的一种新型凋亡抑制因子，它在人和鼠的胚胎和胎儿期表达丰富，在大多数终末分化的成人组织中(子宫内膜、胸腺和胎盘组织除外)不表达[2、3],但在几乎所有的恶性肿瘤组织中均可检测到Survivin 和蛋白的表达。研究表明，Survivin的存在代表着细胞生物学转化的中心环节，因而具有早期诊断的价值。本研究通过免疫组织化学方法检测Survivin在胆囊组织中的阳性表达率为88.9%(40/45)，而在正常胆囊、慢性胆囊炎及胆囊息肉组织中不表达，且Survivin表达与胆囊癌病理分级、Nevin分期、淋巴结转移、患者性别、年龄、肿瘤的大小无关，因此推测Survivin表达上调出现在胆囊癌发生的早期阶段，是胆囊癌发生的早期而普遍的事件。研究Survivin在胆囊癌中的表达对胆囊癌的诊断和治疗有重要的现实意义，检测血清中抗Survivin抗体及胆汁脱落细胞的Survivin表达水平，将有助于胆囊癌的早期诊断。由于Survivin在胆囊癌组织中表达而在其他性质胆囊组织包括正常组织中几乎不表达，以Survivin为靶点的基因治疗技术[4]可使肿瘤细胞的凋亡增加，抑制细胞增殖，降低细胞凋亡的阈值，增强化疗药物的敏感性，从而为胆囊癌的辅助治疗提供一条新的思路。

　　参　考　文献

　　[1]刘伟，傅仲学，宋炯.Survivin的表达与直肠癌细胞凋亡、血管形成及预后的关系[J].中国现代普通外科进展，2004，7(3)：162.

　　[2]Adida C,Crotty PL,McGrath J,et al.Developmentally regulated expression of the novel cancer antiapoptosis gene survivin in human and mouse differentiation [J].Am J Pathol,1998,152(1):4349.

　　[3]Ambrosini G,Adida C,Altieri DC. A novel antiapoptosis gene,survivin,expressed in cancer and lymphoma[J].Nat Med,1997,3(8):917921.

　　[4]Andersen MH,Thor SP. Survivin:a universal tumor antigen[J].Histol Histopathol,2002,17(2):669679.

　　[通讯作者]智绪亭，Tel：(0531)82169426 Email:zhixuting@hotmail.com

　　李亮，等.凋亡抑制因子Survivin在胆囊癌中的表达及其意义

　　山东大学齐鲁医院普外科(山东济南250012)