大黄素对大鼠移植肝细胞凋亡的作用
发表时间：2010-03-05 浏览次数：537次
作者：林胜璋 作者单位：温州医学院第二附属医院 外科，浙江 温州 325003 【摘要】 目的 探讨大黄素对大鼠肝脏移植术后肝细胞凋亡的作用。方法 建立大鼠肝移植模型，分为三组：对照组，供受体均为LEW大鼠；移植组；供体为LEW大鼠，受体为BN大鼠；大黄素组，在移植组基础上，移植术后每日以大黄素50 mg·kg-1腹腔注射。分别于术后第1，3，5，7天各取6只移植大鼠的肝脏，TUNEL法染色，检测肝脏细胞凋亡。以肝脏细胞凋亡阳性细胞数占总肝脏细胞数的百分比作为肝细胞凋亡指数(AI)。结果 移植组肝细胞于术后第1天即已出现凋亡，第3天明显增加，第7天达到高峰。大黄素组各时间点肝细胞凋亡指数明显小于对应的移植组(P<0.01)。结论 大黄素对肝移植急性排斥反应中肝细胞凋亡有显著抑制作用。
【关键词】 大黄素 肝移植 移植物排斥 细胞凋亡 大鼠
Effect of Emodin on hepatocellular apoptosis following orthotopic liver transplantation in rats LIN Shengzhang， XU Xianchou， Yang Xiao， et al. Department of Surgery， the Second Affiliated Hospital， Wenzhou Medical College， Wenzhou 325003
Abstract Objective To evaluate the effect of Emodin on hepatocellular apoptosis following orthotopic liver transplantation in rats. Methods The model of orthotopic liver transplantation in rats was set up. The rats were randomly divided into three groups. In control group， the donors and receptor were LEW rats； in transplant group， the donors were LEW rats and the receptor were all BN rats； in Emodin group， rats were treated with same agent as those in transplant group done， except that they were fed with additional Emodin after liver transplantation. On the 1st， 3rd， 5th and 7th day after transplantation， apoptosis index was evaluated by the percentage of liver cells with TUNEL positive staining. Results The apoptotic liver cells appeared on the 1st day and significantly increased at the 3rd day， while the apoptotic peak reached on the 7th day after transplantation in transplant group. Apoptosis indices of liver cells in Emodin group were significantly lower than those in transplant group(P<0.01). Conclusion Emodin can inhibit hepatocellular apoptosis in rat liver transplantation.
Key words Emodin； liver transplantation； graft rejection； apoptosis； rats
大黄素是中药大黄的有效成分，先前的实验研究表明，它能延长非同系大鼠原位肝移植的术后存活时间，能明显降低移植肝的排斥活动指数[1]。也有研究表明，移植肝排斥反应和细胞凋亡具有密切的相关性，抗排斥反应药物能有效地降低移植肝的细胞凋亡[2-3]。本实验采用近交系大鼠原位肝移植模型，探讨大黄素对肝移植急性排斥反应中肝细胞凋亡的影响。
1 材料和方法
1.1 药物和试剂 大黄素粉剂购自西安华萃公司，原位细胞凋亡检测(TUNEL检测)试剂盒及相关的染色试剂购自福建迈新公司。
1.2 实验动物和分组 实验大鼠购自北京动物实验中心。其中近交系Lewis(简称LEW)大鼠48只，近交系Brown Norway(简称BN)大鼠24只。质量220~280 g，均为雄性。将动物随机分为3组：?譹?訛对照组，供、受体各12只LEW大鼠；?譺?訛移植组，供、受体各12只，供体为LEW大鼠，受体为BN大鼠；?譻?訛大黄素组，在移植组基础上，肝脏移植术后每天以大黄素50 mg·kg-1腹腔注射。
1.3 指标检测和方法 分别于移植术后第1，3，5，7天各取6只移植大鼠肝脏，切取部分肝脏组织，用10%的中性福尔马林固定，常规制作蜡块。切片行原位末端标记(TUNEL)法染色，检测肝细胞凋亡情况。以肝细胞凋亡阳性细胞数占总肝细胞数的百分比作为肝细胞凋亡指数(AI)。
1.4 统计学方法 所得计量数据以均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS12.0软件行t检验。
2 结果
移植组肝细胞术后第1天即已出现凋亡，第3天明显增加，第7天达到高峰。与对照组相比，各时间点均有显著差异(P<0.01)。大黄素组各时间点肝细胞凋亡指数均明显小于移植组(P<0.01)，且各时间点与对照组相比无明显差异(P>0.05) (见表1)。各组术后第7天肝细胞凋亡情况：对照组偶见肝细胞凋亡（见图1）；移植组肝内肝细胞凋亡明显增多，以中央静脉周围为著，汇管区胆管上皮亦有大量凋亡细胞（见图2）；大黄素组凋亡细胞散在零星分布(见图3)。
3 讨论
细胞凋亡是生物机体为维持内环境的稳定，由基因控制的细胞自主性的程序性死亡，在全身免疫和器官移植中排斥反应起着重要的作用[4]。研究表明[5-6]，肝细胞凋亡是肝移植术后肝细胞死亡的一种重要方式，肝细胞凋亡是排斥反应中细胞免疫应答的结果，也是肝细胞损害或死亡的主要因素。研究者通过移植肝组织TUNEL染色，观察非同系大鼠肝移植术后肝细胞凋亡情况和排斥反应程度时发现[2,7]，排斥反应较重的移植肝的肝细胞凋亡指数(AI)也较高。经有效抗排斥药物如CsA处理或转染CD40Ig的移植肝排斥反应减轻，AI也明显降低。大黄素是一种蒽醌类化合物，我们先前的研究已经证实它具有抑制肝移植术后排斥反应的作用[1]。本研究观察大黄素对大鼠移植肝细胞凋亡的影响。结果表明，大黄素组各时间点肝细胞凋亡指数均明显小于移植组(P<0.01)，且各时间点与对照组相比无明显差异(P>0.05)。可见，大黄素对大鼠原位肝移植模型中移植肝细胞的凋亡具有抑制作用，也进一步验证了大黄素具有抗肝移植术后排斥反应的作用。研究表明，肝移植术后TNF-?琢，IL-6，IFN-γ等细胞因子随排斥反应的加重而明显增高，是介导肝移植后排斥反应、肝细胞凋亡的重要因素[8]。而体外实验证实，大黄素对脂多糖刺激下单个核细胞释放细胞因子有显著抑制作用[9]，还能抑制由内毒素诱导的TNF-?琢，IL-6，IL-1等炎症细胞因子的分泌，从而进一步影响免疫激活的后续环节[10]。因此推测，肝移植术后应用大黄素可通过抑制细胞因子的释放而影响移植免疫过程，从而减少移植肝细胞凋亡，支持抗移植排斥作用。
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