基质金属蛋白酶2在胆管癌组织中的表达及与预后的关系

作者：肖广发，汤恢焕    作者单位：(中南大学湘雅医院普外科，湖南 长沙 410078 )

【摘要】  目的： 探讨基质金属蛋白酶2(MMP2)在胆管癌(CCA)组织中的表达及与预后的关系. 方法： 随机选取CCA患者106例，应用SP免疫组化方法检测MMP2蛋白的表达. 其中89例术后随访1～60 mo，分析MMP2蛋白与CCA患者预后的相关性. 结果： MMP2蛋白在CCA组织中的阳性表达率为76.42% (81/106)，并与CCA组织的临床病理学特征及患者的预后均有密切的关系. 在发生肿瘤浸润、淋巴道转移及低分化的肿瘤组织中，MMP2蛋白高表达. 此外，MMP2蛋白阳性表达的CCA患者的生存率明显低于阴性表达的患者 (P<0.01). 结论： MMP2蛋白的表达可能与CCA的浸润、转移有关；检测MMP2蛋白在CCA组织中的阳性表达率，并结合其临床病理学分级，可提高对患者预后的判断准确性.

【关键词】  基质金属蛋白酶类；胆管肿瘤；临床病理学；预后

    0引言

    肿瘤的侵袭、转移是恶性肿瘤的基本病理学特征，也是绝大多数肿瘤患者主要的死亡原因之一. 同时，大量研究已证实恶性肿瘤的侵袭、转移与癌基因、生长基因及其受体基因的活化、抑癌基因的失活或丢失密切相关. 因而，研究胆管癌（cholangiocarcinoma，CCA）的相关基因不仅有利于理解其发病机制，还可能发现在诊断和评价预后中具有临床意义的分子标记物. 基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase2，MMP2），又名明胶酶A , 是基质金属蛋白酶家族的主要成员之一［1］. 已有多项研究表明，MMP2蛋白在乳腺癌、肝癌等多种肿瘤侵袭、转移中起关键作用，并可用于预测术后复发、转移［2-3］. 然而，关于MMP2蛋白的表达与CCA病程进展的关系鲜见报道. 我们采用免疫组化方法检测106例CCA组织中MMP2蛋白的表达情况，探讨其与CCA发生、浸润、转移及预后的相关性.

    1材料和方法

    1.1材料我院普外科200002/200202经手术切除并经病理检查证实的胆管癌组织标本106（男57，女49）例；年龄50.1±13.7 (27～79)岁. 患者术前均未行化放疗. 对于有完整临床及随访资料的89例患者进行为期1～60 mo的随访研究. 对照组标本15 例，为非肿瘤组织中的正常胆总管组织. 鼠抗人MMP2 mAb（工作浓度1∶100）和免疫组化采用的SP法试剂盒均购自北京鼎国生物技术有限公司.

    1.2方法采用免疫组织化学SP法染色，标本经40 g/L中性多聚甲醛固定,石蜡包埋，4 μm 连续切片，70℃烤片15 min. 脱蜡至水，30 mL/L H2O2灭活内源酶，PBS 漂洗5 min×3次. 正常羊血清室温孵育15 min. 滴加20～30 μL PBS 稀释的一抗4℃过夜. PBS 漂洗5 min×3 次. 二抗（生物素标记的山羊抗鼠IgG，1∶500）于37℃孵育45 min，PBS 漂洗5 min×3次. DAB显色5～10 min，自来水充分洗涤，苏木素复染5 min，冲洗5 min. 脱水、透明、封片，镜检. 设阳性对照, 用PBS替代第一抗体作阴性对照. MMP2蛋白表达阳性为细胞质出现棕黄色颗粒，不出现者为阴性. 在光镜下（400×）观察10个视野，每个视野计数100个细胞，阳性细胞计数打分标准如下：0分为阴性，1分为10%～50%细胞呈阳性表达，2分为51%～75%细胞呈阳性表达，3分为>75%细胞呈阳性表达.

    统计学处理：所有数据用SPSS12.0处理, 计数资料采用χ2检验. 生存分析用KaplanMeier法. P<0.05为差异具有统计学意义.

    2结果

    2.1MMP2蛋白表达及其与CCA临床病理参数的关系免疫组织化学染色结果显示，在CCA组织中，MMP2蛋白的阳性表达主要定位于癌细胞质，呈弥漫分布的棕黄色颗粒. MMP2蛋白的阳性表达率为76.42% (81/106)，而在正常胆总管组织中不表达. MMP2蛋白在CCA组织中的表达情况与患者临床病理参数之间的关系见表1. MMP2蛋白的表达与CCA分化程度、TNM分期、有无浸润转移有关. 低分化及存在浸润转移的肿瘤组织中，MMP2蛋白的阳性表达率高于高、中分化（P=0.02）及未发生浸润转移者（P<0.01）；TNMⅠ~Ⅱ期的CCA组织中MMP2蛋白的阳性表达率明显低于TNMⅢ~Ⅳ期的CCA组织 (P=0.01). 表1MMP2蛋白表达与CCA临床病理参数的关系

    2.2MMP2蛋白表达与CCA患者预后的关系本研究对89例CCA患者进行了术后随访研究. MMP2蛋白表达情况与患者术后生存率的关系分析如表2，图1所示. 根据TNM分期和浸润转移情况分组的CCA患者中，有MMP2蛋白阳性表达的患者，其生存率则明显低于阴性表达者. 从生存分析结果看，当MMP2蛋白阴性表达时，CCA患者的生存率高于MMP2蛋白阳性表达的患者.

    3讨论

    已有研究表明［4-5］，肿瘤的浸润转移是个多步骤的复杂过程，癌细胞脱离原发灶及进出血管时，需要首先突破细胞外基质及基底膜屏障，向临近纤维结缔组织浸润进而向远处转移，其中细胞外基质及基底膜的降解是肿瘤侵袭转移过程中最关键的一步. 近年来, 肿瘤细胞间质成分的改变在肿瘤浸润转移中的作用成为肿瘤研究的一个热点. 研究表明，基质金属蛋白酶(MMPs) 是降解细胞外基质的主要家族之一. 它们在肿瘤侵润转移中扮演着重要角色，MMPs通过降解细胞外基质中的大分子物质(如胶原、层粘连蛋白等)而破坏癌细胞浸润的物理屏障. MMP2 是MMPs 家族中分布最广的成员，因其主要反应底物为细胞外基质中的IV 型胶原故又称之为IV 型胶原酶，未激活的酶原Mr为72 000，水解后Mr变成66 000的激活形式［6］. 当细胞恶变时常有MMP2 的升高. 目前认为MMP2 表达和功能的调节发生于转录、分泌、前酶原的激活、细胞表面的结合以及与源于肿瘤或宿主细胞的MMPs 抑制剂的相互作用等多个不同的水平. 已有许多关于MMP2的报道证实，在肺癌、乳腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、皮肤鳞状细胞癌等多种肿瘤细胞中均发现MMP2 表达的增高，在部分肿瘤中还发现随着肿瘤恶性程度的增高，MMP2的表达也增高，且与肿瘤的浸润和转移相关［7-8］. 表2MMP2蛋白表达与CCA患者术后生存率的关系

    CCA是恶性梗阻性黄疸的原因之一，多发生在肝门部，以浸润性生长为特征，病变范围与周围组织分界不清，造成手术根治困难，术后易复发. 影响胆管癌预后的因素主要有肿瘤组织分化程度、浸润深度、有无神经浸润及临床分期等［9-10］. 本研究中，MMP2蛋白在高、中、低分化型癌中，阳性表达率呈逐渐上升趋势，分化越低的癌组织中，MMP2蛋白的强阳性表达率越高，提示MMP2蛋白的异常高表达与肿瘤的分化程度密切相关. 我们同时发现MMP2蛋白表达与浸润转移和TNM分期有关，随着浸润转移的出现及TNM分期的进展，MMP2蛋白的强阳性表达率明显增加. 此外，通过对患者进行术后1～60 mo的随访观察发现，MMP2蛋白阳性表达的患者生存率低于其阴性表达者.

    综上所述，MMP2蛋白的表达可能与CCA的浸润、转移有关；检测MMP2蛋白在CCA组织中的阳性表达率，并结合其临床病理学分级，可提高对患者预后的判断准确性.

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