复方双黄溶液对Ⅲ度烧伤大鼠免疫调节及肠粘膜局部免疫屏障功能的影响

　　作者：段九梅 仇树林 张培培

　　【关键词】 烧伤;免疫;大黄;复方双黄溶液

　　【摘要】 目的 观察复方双黄溶液对重度烧伤后大鼠免疫调节功能及肠粘膜局部免疫屏障功能的影响。方法 将32只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组：不烫伤、自由进食水;烧伤组：烧伤前1 h胃饲1 ml生理盐水，烧伤后6 h第2次胃饲，4次/d;烧伤胃饲大黄组、烧伤胃饲双黄组在同等时间胃饲等量大黄溶液、复方双黄溶液。测定胸腺指数、脾脏指数，肠粘液中分泌型免疫球蛋白A(SlgA)含量。结果 复方双黄溶液组大鼠的胸腺指数和脾脏指数、肠粘膜分泌SlgA的量明显高于烧伤对照组及烧伤胃饲大黄组，差异显著P<0.05。结论 复方双黄溶液可调节严重烧伤大鼠机体免疫及保护肠粘膜局部免疫屏障功能。

　　The affection of Compound Shuanghuang liquor on the immunoregulation and the local immunobarrier of intestinal mucosa of the rats with severe degree burn DUAN Jiumei,QIU Shulin,ZHANG Peipei.Burn and Plastic Department，Youanmen Hospital ,Association of Beijing Hospital, Beijing 100069

　　【Abstract】 Objective To discuss the affection of Compound Shuanghuang liquor on the immuno-regulation and the local immunobarrier of intestinal mucosa of the rats with severe degree burn.Methods 32 healthy male SD rats were divided into three groups randomly. The normal control group were freely ate food and water without scalded.Scalded control group were orally administered 1 ml 0.9% saline before the scalded for an hour,the same were orally administered 1 ml 0.9% saline after the scalded for 6 hours,4 d.for the rats in scalded with rhubarb liquor treatment and scalded with Compound Shuaghuang liquor treatment group equal amount of rhubarb liquor and Compound Shuanghuang liquor were orally administered respectively at the same time. The thymus index, the spleen index and the content of SlgA in intestinal mucus were determined.Results The Compound ShuangHuang liquor could increase the thymus index and the spleen index of the rats with severe degree burn. It could protect the function of excreting the SlgA in intestinal mucose, also.Conclusion The Compound Shuanghuang liquor could regulate the immunity and protect the local immunobarrier of intestinal mucosa of the rats with severe degree burn.

　　【Key words】 burn; immunity; rhubarb; compound shuanghuang liquor

　　当严重烧伤后，机体应激反应使内脏血流减少，肠粘膜因缺血缺氧，出现水肿甚至糜烂出血，肠粘膜免疫功能遭到破坏，可能引起胃肠微生物群出现失调。此时，细菌有可能穿越粘膜屏障，随淋巴液和血流发生定位转移，首先是肠系膜淋巴结，然后是肝、脾、肾 ，造成肠源感染。大量的实验数据也证实了肠源感染的存在。发生移位的细菌主要是革兰阴性杆菌和肠球菌。本实验通过观察复方双黄溶液(主要成份为大黄和黄芪)对重度烧伤后大鼠免疫调节功能及肠粘膜局部免疫屏障功能的影响，为防治严重烧伤后肠道粘膜损伤及细菌移位探索一条新的有效途径。

　　1 材料与方法

　　1.1 一般材料 实验动物：雄性健康SpragueDawley(SD)大鼠32只(河北医科大学实验动物中心提供)，将大鼠分为4组，每组8只：(1)正常对照组：不烫伤，自由进食水。(2)烧伤对照组：烧伤前1 h胃饲1 ml生理盐水，烧伤后6 h第2次胃饲，4次/d。(3)烧伤胃饲大黄组：烧伤前1 h胃饲1 ml(5 g/kg)大黄溶液，烧伤后6 h第2次胃饲，4次/d。(4)烧伤胃饲双黄组：烧伤前1 h胃饲1 ml(5g/kg)双黄溶液，烧伤后6 h第2次胃饲，4次/d。

　　1.2 仪器与药品试剂 20PR52D高速低温离心器(日本HITACHI);超低温冰箱(德国贺利氏公司);GC911r放射免疫计数器(科大创新股份有限公司中佳分公司)。试剂与药品：分泌型免疫球蛋白A(SLgA)放免药盒(北京原子高科核技术应用股份有限公司)、黄芪(石家庄华中中药饮片厂提供)、大黄(石家庄华中中药饮片厂提供)。

　　1.3 药品配制

　　1.3.1 100%大黄溶液： 取大黄50 mg加水250 ml煎30 min后，过滤、浓缩为50 ml，即为100%大黄溶液。4℃保存，给药前复温。

　　1.3.2 100%双黄溶液： 取用大黄50 mg、黄芪50 mg，方法同上。

　　1.4 烧伤大鼠模型制备 10%水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉，10%硫化钠背部脱毛，温清水擦洗干净，饲养24 h后。水合氯醛麻醉，大鼠取俯卧位，将其四肢用橡皮筋固定木板上，每只大鼠均用7.5 cm×8.5 cm[应用Meeh's公式计算大鼠的体表面积A(m2)=K×W2/3/10000，进而计算出大鼠的烧伤总面积]的煤油纱布紧贴在脱光毛的大鼠背部皮肤上，周围其余部分用湿纱布保护，着火燃烧20 s，即制成烧伤总面积达总体表面积20%Ⅲ度皮肤烧伤模型(病理切片证实 见图1)，烧伤后立即给50 ml/kg无菌生理盐水腹腔注射复苏，然后分笼饲养，自由进食水。大鼠背部Ⅲ度烧伤(HE×40)图1 大鼠背部Ⅲ度烧伤(HE×100)

　　1.5 检测方法及观测指标

　　1.5.1 脾脏指数、胸腺指数的测定：烧伤后72 h，将以上4组大鼠分别在腹腔麻醉下称重，取仰卧位四肢固定，术区碘酒、酒精消毒，铺无菌单，于胸腹部中线切开皮肤、皮下组织，打开腹腔、胸腔取出胸腺、脾脏后放置电子天平称重。计算脾脏指数、胸腺指数。见表1。

　　1.5.2 肠粘液SlgA测定： 剪取空回肠约10 cm，翻转使肠粘膜暴露，轻轻刮除肠腔内成型粪便，再用小刀片刮取肠粘液，收集于EP管，用生理盐水1∶10(W/W)稀释，30 000 r/min离心20 min，取上清液，-80°冻存。测定时，依照试剂盒(由北京原子高科核技术应用股份有限公司提供)说明书中SlgA放免分析操作程序表操作，放置Gc911г放射免疫计数器上，结果由其计数器读出每毫升肠粘液蛋白中SlgA的微克数，见表2。

　　1.6 统计学方法 用SPSS 12.0统计软件进行分析统计,计量资料以±s表示，组间比较采用方差分析，计数资料采用Fisher's检验。P<0.05为差异有显著性。表1 脾脏指数和胸腺指数变化表2 肠粘液中SlgA含量的变化

　　2 结果

　　2.1 脾脏指数和胸腺指数的测定：与正常对照组相比，其余3组的脾脏指数、胸腺指数均降低，烧伤胃饲大黄组明显高于烧伤对照组(P<0.05)，烧伤胃饲双黄组较烧伤胃饲大黄组增高(P<0.05)。见表1。

　　2.2 肠粘液中SlgA含量比较 烧伤对照组、烧伤胃饲大黄组、烧伤胃饲双黄组肠粘液的SlgA的含量低于正常对照组，烧伤胃饲大黄组高于烧伤对照组(P<0.05)，烧伤胃饲双黄组高于烧伤胃饲大黄组(P<0.05)。见表2。

　　3 讨论

　　肠道是人体最大的贮菌库和内毒素库，存在大量的革兰阴性菌、厌氧菌及真菌。在正常生理状态下，正常微生物及其毒素并不对机体产生损害。原因在于肠道具有一个高效选择性屏障系统，包括：(1)正常细菌组成的生物屏障;(2)完整的肠粘膜上皮、上皮间紧密连接及基底膜等构成的机械屏障;(3)肠上皮内淋巴细胞、固有层淋巴细胞、派氏集合淋巴结(Peyer's patches)及分泌型抗体(SlgA)形成的免疫屏障;如果肠粘膜屏障功能丧失、肠道菌群失调、宿主免疫功能受损，则可能发生肠源性感染。前2者为构成肠源性感染发生条件，后者是移位细菌存活并造成感染的原因。实验结果表明：烧伤后大鼠免疫功能受到抑制[1，2]，脾脏指数 、胸腺指数及肠粘膜SlgA明显减少。胸腺是免疫系统发育和执行功能的中枢，并提供T细胞发育成熟所必需的环境，具有重要的免疫调节功能。脾脏是各类免疫细胞居住的场所，也是对抗原物质产生免疫应答及产生免疫效应物质(如抗体)的重要基地，它能增强巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬作用。脾脏合成干扰素、补体、细胞因子等生物活性物质[3]。肠道粘膜免疫反应主要依靠分泌至粘膜表面及肠腔中的免疫球蛋白(以SlgA为主)与肠道粘膜内以淋巴细胞为主体的免疫活性细胞，共同构成肠道相关淋巴组织，共同完成肠道的局部免疫功能。其主要功能有：(1)阻断细菌对粘膜的吸附，使其不能形成集落，从而达到排菌的目的;(2)中和病毒的作用;(3)中和毒素的作用;(4)对有食物摄入和空气吸入的某些抗原物质具有封闭作用，使这些抗原游离于粘膜表面，不致进入机体，从而避免全身的免疫反应;(5)激活补体的C3旁路途径，并与补体和溶菌酶协同抗菌作用;(6)阻止机体对肠腔内共栖的正常菌群产生免疫应答，因此SlgA对机体局部免疫和肠粘膜屏障的保护具有重要作用。复方双黄溶液可明显提高烧伤后脾脏指数和胸腺指数，增加SlgA的含量，其作用优于烧伤后胃饲大黄组。提示严重烧伤时给予复方双黄溶液可调节机体免疫功能及保护肠粘膜局部免疫屏障功能，且优于单独使用大黄组。这对防治肠道细菌移位和增加机体抗感染能力具有重要意义。其作用机制可能为：大黄具有下瘀血、破症瘕积聚、荡涤胃肠推陈致新的功能，能活血、止血、改善微循环，清除胃肠内细菌、毒素和毒物，有研究证实大黄具有清除氧自由基、促进肠粘膜杯状细胞增生、改善肠粘膜通透性的作用;能加快胃肠道内细菌和毒素的排泄，提高危重症患者胃肠粘膜内血流灌注，促进损害的胃肠粘膜修复，并能抑制多种致病菌，防止肠道细菌移位，防治内毒素血症的发生;此外，大黄还能抑制血液中肿瘤坏死因子α(TNFα)及白细胞介素(IL2)浓度的增高，抑制细胞因子的分泌，阻止重症感染患者的病程向MODS演变。黄芪对免疫有双向调节作用，可提高抗病毒及抗菌能力;具有补气养血，去瘀散结之效，可改善微循环，增加红细胞对氨基酸和葡萄糖的摄取，提高或恢复红细胞的功能;还可增强胃肠蠕动[4]。2者配伍可增强对肠粘膜屏障的保护，从而抑制肠道细菌移位，其详细作用机理尚需进一步探讨。

　　参考文献

　　1 Ljungdahl M, Lundholm M,Katouli M, et al.Bacterial translocation in experimental shock is dependent in the intestinal flora. Scand　J Gastroenterol, 2000,35:389397

　　2 Naaber P,Smidt I,Tamme K,et al.Translocation of i版社, 2003,1463 Hansbrough JF. Immunmodulation following burn injury. Surg Clin Nor Am, 1987,67:69.

　　3 龚非力主编. 基础免疫学.第3版.武汉：湖北科技出版社，1998.17.

　　4 Ellen JM, Lammel CJ, Shafer MA,et al. Cervical secretory immunoglobulin A in adolescent girls. J Adolesc Health, 1999,25:150154.

      作者单位：100069 北京市右安门医院烧伤整形科(段九梅);河北省人民医院烧伤外科(仇树林，张培培)