高血压与氧化应激相关性研究

　　作者：高淑磊,高爱武,刘俊红,韩丽娟,李凤玲　　作者单位：河北省保定市第四医院(高淑磊、刘俊红、李凤玲);河北省保定市第二医院(高爱武、韩丽娟)

　　【摘要】目的探讨高血压病(EH)患者血清8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)和硝基酪氨酸(NT)水平的变化。方法选择EH患者40例，其中轻度EH患者20例，中度EH患者20例;健康对照组20例，应用酶联免疫吸附试验检测血清8-OHdG及NT水平。结果　轻度EH患者与对照组比较，中度EH患者与轻度EH患者组比较，血清8-OHdG及NT浓度升高(P<0.01)，而中度RH患者与对照组比较更高(P<0.01)。结论轻、中度EH患者存在8-OHdG、NT水平升高的变化，且与EH的病情严重程度相关，表明氧化应激及氧化损伤现象在中度EH患者中可能更明显。

　　【关键词】 高血压,8-羟基脱氧鸟苷酸,硝基酪氨酸;氧化应激

　　近年来随着生物医学的发展，较多的资料显示高血压(EH)的病情发展过程是机体的氧化和抗氧化水平失衡，以致过多的自由基引起血管内皮损伤和收缩血管的过程，而这一过程又加重了EH病情。大量证据表明氧化应激在EH病理生理过程中起重要作用，氧化应激对EH的发生发展，其相应的靶点是血管损害[1,2]。8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)、硝基酪氨酸(NT)是重要的氧化DNA损伤及蛋白质硝基化的生物标志物，本研究通过检测原发性EH患者血清8-OHdG及NT水平，探讨氧化应激在EH的病情进展中的作用及所造成的氧化损伤。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料

　　选择原发性EH患者40例，男31例，女9例。随机分为：轻度EH患者组20例，男15例，女5例;年龄53～79岁，平均年龄(66±9)岁;体重指数(BMI)19.81～25.01 kg/m2，平均BMI(23.2±1.3)kg/m2。中度EH患者组20例，男16例，女4例;年龄53～78岁，平均年龄(65±7)岁;BMI 20.54～25.82 kg/m2，平均BMI(23.2±1.5)kg/m2;符合达到EH诊断标准[3]，并排除肾源性、内分泌性等继发性EH。正常对照组：20例，男14例，女6例;年龄52～78岁，平均年龄(67±8)岁;BMI 21.09～24.82 kg/m2，平均BMI(23.5±1.0)kg/m2;无高血压病史，且无慢性肾病、内分泌性疾病等可导致继发性高血压因素的疾病。所有患者均除外继发性高血压、2个月内发生心脑血管意外、外周血管疾病、心瓣膜病、心功能不全、心律失常、糖尿病、肥胖、高脂血症、肝肾功能异常的患者。3组性别比、年龄、BMI等一般特征差异无统计学意义(P>0.05)。

　　1.2　方法

　　1.2.1　一般资料的采集：包括受试者的年龄、性别、身高、体重、高压病史、吸烟饮酒史以及既往史等。所有病例均由专人测量身高、体重、血压。血压测定采取坐位至少休息5 min以上后，应用台式水银柱血压计测量右肱动脉血压，收缩压(SBP)、舒张压(DBP)取3次血压读数的平均值。

　　1.2.2　方法与仪器：所有研究对象均于晨醒5 min内抽取肘静脉血3 ml，混匀，4℃，3 000 r/pm离心15 min，分离血清-70℃保存待测血清8-OHdG和NT。所有标本一批次由同一人、同一时间检测。8-OHdG及NT应用酶联免疫吸附法测定，试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供。

　　1.3　统计学分析

　　应用SAS 8.0统计软件，计量资料以x-±s表示，组间比较采用t检验，多组间计量资料的比较采用方差分析并进一步应用SNK-q检验行样本均数间的多重比较，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　轻度EH患者血清8-OHdG及NT水平与对照组比较(P<0.01)，中度EH与轻度EH患者组比较血清8-OHdG及NT浓度升高，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。表1　3组一般特征及血清NT和8-OHdG水平比较

　　3　讨论

　　正常机体在生理状态下的有氧代谢过程中，会产生一些氧自由基，如超氧阴离子等，同时机体内存在抗氧化系统，包括超氧化物歧化酶(SOD)等，氧化与抗氧化之间处于平衡状态。在病理状态下，机体内氧自由基的产生和抗氧化系统防御之间严重失衡，自由基产生增多或抗氧化能力减弱都将会发生氧化应激，导致内皮细胞功能失调、血管平滑肌细胞增殖和炎症等，引发多种疾病。研究表明高血压患者存在严重的氧化反应病理亢进及抗氧化能力锐减现象，氧化应激与高血压病的发生发展密切相关[2-4]。氧自由基能与细胞的蛋白质、脂质和核酸分子发生多种形式的氧化还原反应，构成不同层次的多种损害，最终造成血管内皮的损伤、通透性增加，平滑肌细胞增生、增殖，细胞外基质沉积和降解，血管壁重构。NT的形成的一个重要来源是由过氧亚硝酸盐(ONOO-) 与酪氨酸的快速反应而形成的内源性物质，被认为是体内蛋白质硝基化的生物标志[5]。而在氧化应激过程中， 可以被SOD催化生成H2O2，此外，血管壁产生的可以迅速与一氧化氮(NO)反应生成ONOO-[6]，ONOO- 具有细胞毒性，能够修饰DNA 碱基、造成DNA 单链断裂。8-OHdG作为体内DNA氧化损伤生物标志物，可反映体内DNA氧化损伤，在氧化应激存在条件下，明显升高，并且随着病情的加重而升高[7]。8-OHdG的生成量以及DNA 链断裂程度与ONOO -浓度有依赖关系[8]。ONOO-引起酪氨酸的硝基化使NT增加，直接引起细胞内蛋白质及酶变性、DNA损害，最后导致细胞死亡或凋亡。且氧化应激与内皮功能障碍程度密切相关[1]，研究发现内皮功能异常障碍时一氧化氮合酶表达和超氧化物产生同时增加，且与硝基酪氨酸生成增加密切相关[9]。表明ONOO-在高血压的病理生理过程中起着重要作用。因此NO和O-2之间保持平衡状态，在高血压的病理生理机制中具有重要意义。

　　本研究研究结果发现血清8-OHdG及NT水平在轻度高血压患者组比正常对照组明显升高，中度高血压患者组进一步升高，差异有统计学意义(P<0.01)。表明轻度高血压患者有着较高水平的氧化DNA、蛋白质硝基化损伤标志物产生，提示轻度高血压患者存在氧化应激。中度EH患者比轻度EH患者有着更高水平8-OHdG及NT，表明EH患者无论轻度还是中度升高机体内均存在氧化应激改变，有氧化损伤产物形成，中度EH患者存在更强的氧化应激，EH患者血压越高，氧化应激现象越显著，其氧化损伤现象可能越严重。Lee等[10]选择了性别、年龄相匹配的轻中度EH患者和对照组，并检测血浆8-OHdG。给予卡维地络治疗两个月后，发现高血压组存在有活性氧引起的DNA损伤，而卡维地络可降低高血压组的DNA氧化损伤，认为EH患者体内8-OHdG含量升高是因为在机体氧化应激状态下可引起组织内ROS大量增加，大量的ROS导致组织细胞损伤及功能异常。当线粒体中缺乏DNA修复体系时，DNA受到活性氧的攻击后产生氧DNA损伤的标志物8-OHdG。

　　总之，EH患者体内氧化抗氧化功能失衡，抗氧化物质可能不能有效地清除过多的超氧化物，而导致血管细胞的氧化或氧化应激损伤。本研究结果表明，轻、中度EH病患者血清8-OHdG及NT水平均升高，且与高血压的病情严重程度相关。说明在轻中度EH病患者可能存在氧化应激、氧化损伤现象，在中度EH患者中可能更为明显。

　　【参考文献】

　　1　Wang D，Strandgaard S，Iversen J，et al.Asymmetric dimethylarginine，oxidative stress，and vascular nitric oxide synthase in essential hypertension.Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2009,296：195-200.

　　2　Ceriello A.Possible role of oxidative stress in the pathogenesis of hypertension.Diabetes Care,2008,31：181-184.

　　3　中国高血压防治指南修订委员会.2004年中国高血压防治指南(实用本).中华心血管病杂志，2004,32：1060-1064.

　　4　Sun SR，Lian YG，Wang HM，et al.Effect of contenuous blood purification on oxidative stress in critically iu patients.China Journal of mordern Medicine,2006,16：407-411.

　　5　Ohshima H，Friesen M，Brouet I，et al.Nitrotyrosine as a new marker for endogenous nitrosation and nitration of proteins.Food Chem Toxicol,1990,28：647-652.

　　6　Guzik TJ，West NE，Pillai R，et al.Nitric oxide modulates superoxide release and peroxynitrite formation in human blood vessels.Hypertension,2002,39：1088-1094.

　　7　Bulckaen H，Prévost G，Boulanger E，et al.Low-dose aspirin prevents age-related endothelial dysfunction in a mouse model of physiological aging.Am J Physiol Heart Circ Physiol,2008,294：1562-1570.

　　8　罗云敬，李芸，刘立亚，等.过亚硝酸根诱导的DNA 损伤及其抑制剂的研究.化学通报，2006,7：514-518.

　　9　Yang YM，Huang A，Kaley G，et al.eNOS uncoupling and endothelial dysfunction in aged vessels.Am J Physiol Heart Circ Physiol,2009,297：1829-1836.

　　10　Lee J，Lee M，Kim JU，et al.Carvedilol Reduces Plasma 8-Hydroxy-2'-Deoxyguanosine in Mild to Moderate Hypertension.Hypertension,2005,45：986-990.