多配体蛋白聚糖4在瘢痕疙瘩中的表达
发表时间：2010-10-20 浏览次数：553次
作者：方洁 宋建星 吴媚 作者单位：第二军医大学长海医院整形外科，上海 200433
【摘要】目的 探讨多配体蛋白聚糖4(Syndecan4，SDC4)与瘢痕疙瘩形成的关系，为预防和治疗瘢痕疙瘩提供新途径。方法 应用免疫组织化学方法检测SDC4在瘢痕疙瘩及其周围正常皮肤组织中的表达。结果 瘢痕疙瘩中SDC4表达高于其周围正常皮肤组织，差异有统计学意义。结论 SDC4在瘢痕疙瘩中的表达增高，对瘢痕疙瘩的形成可能起促进作用。
【关键词】 瘢痕疙瘩 多配体蛋白聚糖 4 免疫组织化学
瘢痕疙瘩属于临床上常见的病理性瘢痕，是创伤过度愈合的结果，常表现为瘤样增生并伴有不同程度的功能障碍，形成机制不明，组织病理学上以成纤维细胞的异常增殖并分泌大量细胞外基质为特征。因此，成纤维细胞被认为是研究瘢痕疙瘩成因的金指标〔1〕。国外研究证明，作为细胞信号转导的调节剂多配体蛋白聚糖4(SDC4)在鼠类皮肤组织创伤修复过程中，促进成纤维细胞增殖、移行，并调控多种细胞外基质的生物学行为，共同促进创伤愈合。据此，考虑SDC4对瘢痕疙瘩形成可能起促进作用，把SDC4引入瘢痕疙瘩成因研究之中，目前国内未见相关报道。本文对SDC4在瘢痕疙瘩及其周围正常皮肤组织中的表达情况进行对比观察。
1 材料与方法
1.1 组织标本 瘢痕疙瘩22例均取自20052007年于本科行手术切除的患者。男、女各11例，年龄36～72岁;取材部位：胸部8例，面颈部8例，耳垂及臀部6例。取材瘢痕疙瘩术前均未行化疗及放射治疗，经病理学诊断排除恶性变可能。同时取瘢痕疙瘩周围正常皮肤组织作为对照组。标本采集后立即置入10%中性福尔马林液固定。经脱水、石蜡包埋、切片，采用Envision两步法对标本进行免疫组化染色。
1.1 主要试剂 采用SDC4多克隆抗体(美国Biovision公司)，Rabbit antiVEGF (美国 Santa Cruz公司)，bFGF IgG1(美国 Santa Cruz公司)，EnVision试剂 (丹麦Dako)等。
1.3 免疫组化染色 (1)石蜡切片常规脱蜡至水，PBS洗3×3 min。(2) 用pH6.0 0.01 mol/L CB热诱导修复(微波3档20 min),室温自然冷却，PBS洗3×3 min。(3)0.3%H2O2抑制内源性过氧化物酶20 min，室温。(4)PBS洗3×3 min。(5)20%正常羊血清室温孵育30 min，不洗。(6)PSAG 1∶400 37℃ 孵育2 h。(7)PBS洗3×3 min。(8)EnVision试剂(HRP/R)37℃ 30 min。(9)PBS洗3×3 min。(10)DAB显色8～12 min。(11) 苏木素衬染色，热水蓝化。(12)吹干后，树脂封片。
1.4 结果判定 200倍和400倍光镜下观察切片中SDC4的表达和分布情况(图1～图4)，每张切片选取4个高倍视野。采用二级计分法判定结果：染色强度阴性(不着色或显色强度与背景无差别者为阴性)为0分，淡黄1分，黄或深黄2分，褐或棕黄色3分;阳性细胞计数<10%为0分，阳性细胞计数10%～25% 1分，阳性细胞计数25%～50% 2分，阳性细胞计数50～75% 3分，阳性细胞计数>75% 为4分;两者相加<2分为阴性(-);2～3分阳性(+);4～5分中等阳性();6～7分强阳性()。
1.5 统计学处理 实验数据采用秩和检验(检验水准均取0.05)，数据分析全部采用SAS 9.13完成。
2 结果
组织染色后SDC4不同程度的表达情况见图1。SDC4在细胞核和细胞浆中均有阳性表达，表现为黄或棕黄色颗粒，呈局灶性或弥漫性分布，主要定位于上皮细胞，在毛囊上皮细胞和血管内皮细胞也可见阳性染色。在大部分瘢痕疙瘩中呈阳性至强阳性表达。从表1中可见，22例瘢痕疙瘩患者中，SDC4的阳性表达率为95.45%，强阳性率40.91%;正常皮肤的阳性表达率为36.37%，强阳性率0%。统计学分析表明，数据为等级资料，采用秩和检验，Hc=26.932 7，P<0.001，差异有统计学意义，可见SDC4在瘢痕疙瘩中阳性率高于其周围正常皮肤组织。
表1 SDC4在正常皮肤和瘢痕疙瘩中的表达(略)
与正常皮肤比较：1)P<0.001
图1 组织染色SDC4 -～表达(200×)(略)
3 讨论
瘢痕疙瘩具有侵袭性生长的特性，单纯手术切除后复发率为45%～100%〔2〕，目前临床采用综合施治的方法，也无法达到根治效果，该病已成为整形外科顽症之一。近年来，随着现代细胞生物学和分子生物学的发展，细胞信号转导调节因子在瘢痕疙瘩形成中的作用倍受关注。
SDC4由硫酸乙酰肝素和硫酸软骨素链组成，属于跨膜蛋白聚糖家族，广泛存在于哺乳动物中，可与多种肝素类生长因子结合充当复合受体，调节信号转导，如成纤维细胞生长因子、血管内皮成长因子、转化生长因子β、血小板衍生因子及整合素等〔3～6〕,已明确上述肝素类生长因子均有促进瘢痕疙瘩形成的作用。老鼠创伤愈合实验中发现，损伤区域上皮细胞和成纤维细胞中SDC4表达增高，创缘基质收缩，伤口愈合良好;而SDC4基因缺失老鼠出现伤口不愈合或延迟现象，表明与SDC4在血管形成和协调生长因子诱导成纤维细胞移行、增殖能力降低有关〔7～11〕。同时，SDC4作为细胞结构的组成成分，还参与细胞间、细胞与细胞外基质间的黏附、生长因子结合和活化、大分子物质转运、免疫应答等行为。
本实验结果表明，SDC4在瘢痕疙瘩中表达高于其周围正常皮肤组织。SDC4高表达可能因为在瘢痕疙瘩形成中，肝素类生长因子表达水平升高正反馈引起SDC4分泌增加，两者结合位点增多，信号转导级联反应扩大，生物学效应增强，导致诱导成纤维细胞增殖、移行、分泌旺盛，致使胶原合成超过降解，瘢痕疙瘩呈现超出创缘的持续增长。目前，SDC4与生长因子、细胞外基质、成纤维细胞之间的调控靶点还未明确，急待深入研究。本研究不仅有助于揭示瘢痕疙瘩成因及发展规律，而且有助于为今后预防和治疗该疾病提供更有效、便捷的手段。
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