脑出血患者血管紧张素转换酶I/D的基因多态性分析

　　作者：孙洪英,和姬苓,杨月明,袁利和,程景丽　　作者单位：包头医学院第一附属医院神经内科，内蒙古 包头 ;包头医学院在读研究生

　　【摘要】目的：探讨脑出血(ICH)患者血管紧张素转换酶(ACE)I/D基因多态性,并分析其是否有致脑出血效应。方法：应用聚合酶链式反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术检测80名ICH患者和90名健康对照者的ACE基因型和等位基因，并用Logistic回归分析其致脑出血的效应。结果：170例样本中ICH组ACE DD基因型频率为35.0%，D等位基因频率51.9%，明显高于正常对照组(P<0.05);经Logistic回归分析，ACE DD基因型发病的相对危险度(OR)为2.923，与ACE非DD基因型OR值0.582相比差异有统计学意义(P<0.05)，ACE DD基因型增加脑出血发生的概率。结论：ACE I/D基因多态性可能是ICH发病的独立遗传因素。

　　【关键词】 脑出血,血管紧张素转换酶,基因多态性

　　Abstract Objective: To identify an angiotensin I-converting enzyme (ACE) gene polymorphisms of the patients with intracerebral hemorrhage and analyze its causative effect on intraacerebral hemorrhage.Methods: ACE genotypes were examined with the method of PCR-RLFP in 80 patients with intracerebral hemorrhage (ICH) and 90 age-matched controls.Independent fatalness of ACE genotypes and alleles towards intracerebral hemorrhage were analyzed by Logistic regression.Results: ACEI/D genotype frequency(35.0%) and D alleles frequency(51.9%) in ICH group were remarkably higher than that in the control group(P<0.05).Logistic regression analysis showed that there was significant difference in the incidence risk between ACEI/D genotype(OR=2.923) and ACE non-I/D genotype (OR=0.582), and that ACEI/D genotype can increase the incidence risk of ICH.Conclusion: The gene polymorphism of ACE I/D is related to the incidence of ICH and may be the independent risk factor for intracerebral hemorrhage.

　　Key words Intracerebral hemorrhage; ACE; Gene polymorphism

　　人类疾病除外伤外几乎都存在遗传与环境因素的相互作用，仅是二者所占比重不同[1]。脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)的发生同样也受到环境与遗传因素的双重影响。目前有研究关注于ACE基因I/D多态性与脑梗死的关系，而ACE基因I/D多态性在ICH发病中的作用的研究报道少见。因此本研究运用聚合酶链反应及酶切结合银染色技术检测ICH患者ACE基因I/D多态性，探讨ACE基因多态性与ICH的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 对象 ICH组：随机选择2004年1月至2007年3月包头医学院第一附属医院神经内科就诊的ICH患者80例,男42例，女38例;年龄60～78岁,平均66.4岁，符合全国第四届脑血管病学术会议修订的诊断标准，并经头部CT和/或MRI证实。正常对照组：为同期本院健康体检者90名,男46名，女44名，年龄60～71岁,平均65.7岁，均经过临床和/或影像学检查排除ICH。两组的年龄、性别、体重指数(BMI)经比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

　　1.2 方法

　　1.2.1 DNA样品的提取 采集研究对象的周围静脉血2mL，储存于EDTA-Na2抗凝管，常规酚/氯仿抽提方法提取基因组DNA备用。

　　1.2.2 ACE I/D基因多态性的检测 采用PCR技术，引物设计参照文献[2]，上游序列为5’-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3’,下游序列为5’-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3’。反应在PCR扩增仪(Biometra PC48型)上进行，制备好的模板DNA 3μL,加入PCR反应混合液，反应体系25μL，含引物各0.7μL，2×Pfu PCR Master Mix 12.5μL。混匀后，液体石蜡封顶进行PCR反应，预变性94℃ 2分钟，变性94℃ 30秒，退火55℃ 45秒，延伸72℃ 60秒，共35个循环，最后72℃延伸5分钟，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察结果。

　　1.2.3 统计学方法 全部数据应用SPSS 11.5软件包进行分析。基因型分布及等位基因频率应用基因计数法并通过χ2检验，基因型及等位基因相对风险率Logistic回归分析后以比值比及95%可信区间表示。

　　2 结果

　　2.1 分型 人群中有3种ACE基因型：长度为490bp II纯合型、490/190bp ID杂合型和190bp DD纯合型。

　　2.2 两组ACE基因型及等位基因频率分布的比较 ICH组中DD基因型频率为35.0%，D等位基因频率为51.9%，与正常对照组比较有统计学意义(P<0.05)。

　　2.3 ACE基因型ICH患病风险的分析 ACE DD基因型患ICH的比值比为2.923，与ACE非DD基因型OR值0.582相比差异有统计学意义(P<0.05)。

　　3 讨论

　　肾素-血管紧张素系统(RAS)是调节血压、维持体内水、电解质平衡的重要因素。ACE是血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)形成过程中的一个重要的限速酶，它主要受控于血管紧张素转化酶基因。ACE基因具有插入/缺失(I/D)的多态性，由于ACE基因型不同而致个体间循环中ACE水平的差异，将对AngⅡ 形成和缓激肽的灭活产生作用，继而影响机体内钠水平衡代谢、醛固酮的分泌、血管收缩和血管平滑肌细胞增殖，而这些均是导致ICH的关键因素。国内外对ACE基因多态性与ICH发病间的关系研究尚少，且结论不一。Slowik等[3]认为ACE DD基因型是脑出血的危险因素，而国内有研究认为ACE基因多态性与脑出血无关[4-5]。本研究发现，在ICH组中ACE DD基因型和D等位基因频率明显高于正常对照组，提示ACE基因I/D多态性与ICH的发生有密切的关系，与蔡坤皓等[6]研究结论一致。同时，ACE DD基因型的个体患ICH的危险度比非DD基因型高2.9倍，提示ACE基因I/D多态性对ICH的发生、发展产生影响。由于基因变异对遗传表型的作用同时受环境因素的影响，而ACE基因多态性产生的微小表型效应积累与环境的协同作用使其在ICH发生、发展过程中的作用更趋复杂，应作进一步探索。

　　目前ICH的预防多是针对一些传统危险因素的控制和预防，通过对ICH的深入研究，分子遗传学的危险因素的识别将对ICH的预防和治疗产生更广泛的影响，通过对ICH高危基因的筛查，我们将有可能更为全面地判定ICH发生的高危人群，从而可采取有针对性的预防和治疗措施，有效预防ICH的发生和控制其进展。同时我们对ICH的认知也会变得更为深入和明晰。

　　【参考文献】

　　[1] Sagnella GA, Rothwell MJ, Onipinla AK, et al.A population study of ethnic variations in the angiotensin-converting enzyme I/D polymorphism relationships with gender, hypertension and impaired glucose metabolism [J].Hypertens,1999,17:657-664.

　　[2] Rigat B, Hubert C, Corvol P,et al.PCR detection of the insertion/ deletion polymorphism of the human angiotensin-converting enzyme gene[J].Nucleic Acids Res,1990, 20(6):1433.

　　[3] Slowik A,Turaj W,Dziedzic T,et al.DD genotype of ACE gene is a risk factor for intracerebral hemorrhage[J].Neurology,2004,63(2):359-361.

　　[4] 潘倩莹，孙莜放，廖宝平，等.ACE基因多态性与脑梗死、脑出血发病的关系[J].中国现代医学杂志，2004，14(23)：50-52.

　　[5] 尚蔚，窦相峰，张红叶，等.血管紧张素转化酶基因多态性与脑出血的关系[J].中风与神经疾病杂志，2004，21(5)：388-390.

　　[6] 蔡坤皓，戴黎萌，陈东，等.血管紧张素转化酶基因DD基因型与脑出血的相关性研究[J].中华神经医学杂志，2006，5(8)：778-780.