ＡＢＢ配合ＰＲＰ促进即刻种植体周骨生长重建的效果评价

随着经济及技术的发展，种植牙因为有稳固、耐用、美观、舒适等诸多优点，成为越来越多的牙齿缺失患者及专业口腔医师的首选修复方案。但临床上很多患者的缺牙区都没有足够的牙槽骨高度及宽度，缺乏骨支持，成为种植手术的禁忌证。如何重建骨缺损，增加新骨形成的量及密度来保证种植体的初期稳定性，成为当前的研究热点。本研究建立狗的牙槽骨种植体周骨缺损模型，观察不同的植入材料对骨再生和重建的效果，为临床应用提供参考。现报告如下。

1　材料与方法

1.1　材料：健康杂种狗12只，无全身及口腔疾病，7～8个月龄，体重13～15kg，雌雄不限，适应性喂养1周后开始实验。

1.2　试剂和器材：包括ABB(BIO-OSSGeistlich公司，瑞士)、种植体(Dio公司，3.8mm×8mm，韩国)、牛凝血酶(Sigma公司，美国)、氯氨酮注射液(江苏恒瑞医药，中国)、种植机(安多健，韩国)、BI2000型图像分析系统(中国四川)等。

1.3　PRP的制备：采用Anitua′s的方法，术前用真空抗凝采血管采血20ml。在离心机上第一次以1500r/min离心20min，将红细胞和含血小板的血浆分离。无菌操作将含血小板的血浆层，约3ml放入另一离心管，进行第二次离心，2000r/min离心10min，将上层的乏血小板血浆(Plateletpoorplasma，PPP)与PRP分开。弃掉上层液体，剩余液体约1.5ml，即为所需的PRP。在填充前，按顺序抽取1.2mlPRP、0.2ml氯化钙牛凝血酶与0.2ml空气混合，将混合液与1.2gBIO-OSS材料混匀，用于实验。

1.4　实验方法：3%氯氨酮对犬全身麻醉、侧卧位固定、保持张口度，消毒、铺巾。拔除双侧第二前磨牙，搔刮拔牙窝。用刀片在拔牙窝旁将黏骨膜全层切开，做辅助切口于舌侧，完全掀起黏骨膜瓣，暴露牙槽嵴顶，用先锋钻在原拔牙窝近中处钻入3mm深度。依次用扩孔钻逐级预备，即刻植入埋植型种植体，用扳手使种植体完全就位至与骨上缘平齐，在种植体远中制作一宽3mm、深4mm的骨缺损区，其间用常温NaCl溶液冲洗降温，避免手术操作中温度过高，造成种植体周骨组织的坏死。两侧缺损区分别放入骨替代材料，左侧为实验组，填充ABB与PRP混合物，右侧为对照组，填充ABB，伤口严密缝合。术后使用青霉素80万U肌内注射3d预防感染，分笼饲养，分别于术后4周、6周、8周用过量麻醉法处死动物，每组4只，获取完整下颌骨种植体骨块标本，行大体观察及组织学染色检查，测量新生骨面积。

1.5　观察指标1.5.1　组织学检查：在距种植体周骨缺损区5mm处取材，经100ml/L福尔马林固定，50ml/L硝酸脱钙，梯度乙醇、丙酮脱水，石蜡包埋，连续切片，HE染色，光镜观察。1.5.2　新生骨定量分析：在每组各个时间段的同一部位随机取5张组织学切片，在光学显微镜下(×100)观察新生骨生成情况，采集图像，导入计算机图像分析系统。每张切片采集上下左右及中心区共5个视野，测量每个视野下新生骨组织面积，计算与缺损重建区总面积的百分比，对结果进行统计学分析。

1.6　统计学处理：组织形态学数据采用SPSS16.0软件进行统计分析，用配对t检验对实验组与对照组结果进行处理，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　大体观察：所有狗均无围手术期并发症发生。所有种植体稳定，无松动脱落及术区炎性反应发生。随着时间的延长，缺损区凹陷逐渐减小，但在同一时期，实验组伤口愈合比对照组更平整。

2.2　组织学观察：术后4周犬牙槽骨缺损重建区开始有新骨生成。实验组有大量成纤维细胞和毛细血管，少量淋巴细胞、巨噬细胞和中性粒细胞，新生骨呈条索状;对照组与之相似，但毛细血管较疏散，细胞成分较少，纤维组织较丰富，新生骨分散呈点状。术后6周犬牙槽骨缺损重建区新骨形成活跃。实验组可见大量新生类骨质和骨基质，新生骨粗大致密，融合成网状;对照组成骨细胞及血管较稀疏，新生骨较少，排列不规则。术后8周骨缺损重建区新生骨开始矿化成熟，纤维间质成分减少，血管密度下降。实验组骨基质中骨细胞多而致密，新生骨融合成片，骨单位和骨桥开始形成，趋向成熟;对照组骨基质中骨细胞少，分布不均，新生骨面积较小，骨单位和骨桥少见。

2.3　新生骨定量分析：术后4周、6周、8周实验组新生骨面积大于对照组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，详见表1。

3　讨论

在种植手术中，40% ～80%的患者都会因为牙槽骨高度和宽度的不足而无法进行[1]。如何引导骨再生，为骨量缺失及骨量不足的种植位置提供新生骨，对于维持种植体长期稳定的骨结合，完成骨轮廓的扩增及达到长期的美学效果有重要意义[2]。解决这一问题的植骨材料有自体骨、同种异体骨和异种骨。自体骨有着最佳的骨传导及诱导功能，是骨移植材料的最佳选择，但常常因为手术创伤和获取量有限而难以在临床上得到广泛应用。同种异体骨为尸体取骨，常常因为伦理等问题，患者难以接受。异种骨是哺乳动物的骨，经过处理后去除了其有机成分，消除其免疫原性，保留了其无机结构，是目前应用较广泛的骨替代材料。理想的骨移植材料应具有以下特性[3]：有良好的生物相容性;作为新生骨长入的支架;刺激新生骨从受区长入;有骨传导和骨诱导特征、不会传播疾病和产生免疫反应;使用方便、费用低、易消毒等。小颗粒的无机牛骨BIO-OSS材料，是从牛骨中提取的碳酸盐磷灰石结晶体，其不含有任何有机成分，因此，植入动物体内不会引起免疫、过敏及炎性反应。它有类似人体骨的化学成分和物理结构，其多孔的骨小梁结构，为骨细胞的长入提供了支架，同时BIO-OSS可被吸收，避免了二次手术，具有很好的生物学性能[4]，但作为理想的骨替代材料，尚没有刺激新生骨从受区长入的能力，缺乏良好的骨诱导作用[5]。PRP是自体血的提取物，其血小板含量是全血的4～5倍，含多种刺激骨形成的生物活性因子，例如血小板源性生长因子、胰岛素样生长因子、表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、转移生长因子等[6]。笔者采用自体PRP与BIO-OSS混合及单独使用BIOOSS，填充于种植体周围骨缺损区，观察其促进骨增殖与重建的效果。本研究中笔者采用测量新生骨面积的方法，直观量化新生骨新成的量及成熟度，可以看到在4周、6周、8周时，随着时间的延长，两组的新生骨面积都在不断增加，但在同一时期，新生骨实验组比对照组形成得更多，更成熟。术后4周时，实验组的成骨细胞和毛细血管都多于对照组，说明实验组的成骨能力及潜力都大于对照组。术后6周，组织学染色切片中，实验组新生骨已经连接成网状，对照组新生骨仅仅成条状。术后8周实验组新生骨连接成片，有骨陷窝和骨单位形成，除了面积显著大于对照组外，骨的成熟度也更胜一畴，证实了PRP在钙离子和凝血酶的作用下，被活化为自体纤维蛋白凝胶，为新骨生长提供了一个有利于成骨细胞增殖与分化的微环境，从而促进新骨形成，这与Weibrich的实验结果相同[7]，证实了在BIO-OSS的支架作用下，PRP可以诱导和促进骨的再生与增殖，对种植体周围的骨缺损重建具有积极意义。因此BIO-OSS与PRP配合是一种结合了骨引导和骨诱导功能的良好的骨替代品，对种植体周围骨量不足及骨缺损重建有积极意义，为临床应用提供了实验依据。但在本研究中，样本量较小，观察时间有限且对其作用机制的研究不够深入，对于长时间的作用效果及其作用机制尚需进一步研究。

4　参考文献

[1]　徐淑兰，周　磊，黄建生，等.Bio-Gide生物膜引导再生骨中种植体短期成功率的临床回顾[J].中国口腔种植学杂志，2004，9(4)：170.

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[3]　诸葛春耕，张　燎.PRP与骨替代材料复合对即刻种植牙周围骨再生影响的实验研究[J].中国口腔种植学杂志，2007，12(2)：55.

[4]　耿　威，宿玉成，徐　刚，等.无机牛骨结合可吸性胶原膜修复种植牙骨缺损的定量分析[J].口腔医学研究，2003，19(2)：B280.

[5]　NevinsML，CameloM，LynchSE，etal.Evaluationofperiodontalregenerationfollowinggraftingintrabonydefectswithbioosscollagen：ahumanhistologicreport[J].IntJPeriodonticsRestorativeDent，2003，23(1)：9.

[6]　MazorZ，PelegM，GargAK，etal.Platelet-richplasmaforbonegraftenhancementinsinusflooraugmentationwithsimultaneousimplantplacement：patientseriesstudy[J].ImplantDent，2004，13(1)：65.

[7]　WeibrichG，HansenT，KleisW，etal.Effectofplateletconcentrationinplatelet-richplasmaonperi-implantboneregeneration[J].Bone，2004，34(4)：665.[收稿日期：2014-02-09　编校：郑英善]