环氧合酶2在骨肉瘤中的表达与肺转移的关系

　　作者：王宪斌 苏利国 张晓军 樊利军 张娉霞 作者单位：056001 河北省邯郸市第二医院骨科

　　【摘要】 目的 探讨环氧合酶2(COX2)蛋白在骨肉瘤中的表达与肺部转移的关系及临床意义。方法 应用免疫组织化学染色方法(SP法)对骨肉瘤患者术后标本进行染色，光镜下观察结果。根据术后1年CT断层扫描肺部是否发生转移分为实验组、对照组，研究COX2在人骨肉瘤组织中的表达情况与骨肉瘤肺部转移的关系。应用统计软件分析实验组与对照组COX2蛋白表达情况的差异性。结果 实验组患者骨肉瘤组织中，COX2表达阳性率为82.5%，明显高于对照组的40%，两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论 COX2在骨肉瘤中的过高表达与骨肉瘤的肺部转移存在密切关系。

　　【关键词】 骨肉瘤;环氧合酶2;肺部转移;免疫组化

　　The correlation between the expression of cyclooxygenase2 in osteosarcoma and lung metastases WANG Xianbin, SU Liguo, ZHANG Xiaojun, et al.Department of Orthopaedics, The Second Hospital of Handan, Hebei,Handan 056001

　　【Abstract】 Objective To investigate the correlation between the expression of cyclooxygenase2 (COX2) in osteosarcoma and lung metastases. Methods The expression of COX2 in human osteosarcoma tissue was detected by immunohistochemistry. The lung metastases was detected by CT after one year, and the patients were divided into experiment group and control group according the results. The correlation between expression of cyclooxygenase2 in osteosarcoma and lung metastases was observed through optical microscope, and the results were analyzed by Chisquare test.Results Among the specimens with lung metastases, the rate of COX2 expression was 82.5% (27/40) in osteosarcoma, which was significantly higher than that(40.0%) of control group(non lung metastases),there was a significant difference between the two group, (P<0.05).Conclusion The overexpression of COX2 is closely related to and lung metastases in osteosarcoma.

　　【Key words】 osteosarcoma; cyclooxygenase2; lung metastases; immunohistochemistry

　　骨肉瘤是一种高度恶性肿瘤,早期即可发生肺部转移,对肺部转移的早期确定对提高疗效具有极大帮助,本实验应用免疫组化方法对骨肉瘤患者环氧合酶2(COX2)的表达与肺部转移的关系进行了初步研究。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 筛选河北医科大学第三医院骨科1998～2006年骨肉瘤患者术后石蜡切片60例作为研究对象，以术后1年为期限，进行肺部CT扫描,发生肺部转移40例，其中男21例，女19例;年龄9～29岁，平均年龄(18±5)岁;未出现肺部转移20例，其中男13例，女7例;年龄8～30岁，平均年龄(17±5)岁。以发生肺部转移的40例患者作为实验组，未出现肺部转移的20例为对照组进行研究。

　　1.2 免疫组织化学方法(SP)

　　1.2.1 主要试剂：COX2羊多克隆抗体(美国santa公司)、p53兔多克隆抗体(美国zyme公司)、9003工作试剂盒、9001工作试剂盒、DAB显色试剂盒(北京中山生物技术有限公司)。

　　1.2.2 实验步骤：严格按照试剂盒进行操作。

　　1.3 结果判断 光镜下观察染色切片，随机观察5个高倍视野，以胞浆内出现棕黄色颗粒者为阳性细胞(表示COX2在肺转移患者中的表达，见图1)，未出现棕黄色颗粒者为阴性COX2 在非肺部转移患者中的表达<5%。见图2。依据阳性细胞所占比例分为：“-”阳性细胞所占比例<5%;“+” 阳性细胞所占比例5%～25%;“++” 阳性细胞所占比例26%～50%;“+++” 阳性细胞所占比例>50%。

　　1.4 统计学分析 所有数据应用SAS 6.12统计软件处理。计数资料采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　发生肺部转移的40例骨肉瘤患者中，COX2蛋白表达阳性率为82.5%，且多为高表达。对照组阳性率为40%且多为低表达。两者差异有统计学意义(P<0.05)。表1 2组COX2的表达情况例

　　3 讨论

　　骨肉瘤是一种高恶性原发肿瘤，对人类健康具有极大威胁，国内外大量研究证实：COX2蛋白过高表达同肿瘤的发生、发展、转移密切相关。

　　COX具有Ⅰ、Ⅱ两型，Ⅰ型为结构酶，在机体内微量恒定表达，参与机体的正常生理过程。Ⅱ型为诱导型酶，正常生理状态并不表达，在细胞受刺激后迅速表达，参与病理过程[1]。大量研究表明，COX2的表达与肿瘤细胞转移呈正相关。COX2促进肿瘤细胞转移的机制是通过促进肿瘤细胞增殖，新生血管形成,上调肿瘤细胞基质金属蛋白酶(MMPs)的表达等因素起作用的。Ishizaki等[2]研究发现COX2选择性抑制剂Etodolac可通过降低MMP9活性,从而抑制结肠癌肝转移。这些都进一步解释了COX2可通过促进MMPs表达上调,从而增加肿瘤细胞侵袭力。

　　Takahashi等[3]的研究发现被NSCLC肿瘤细胞侵犯的淋巴结组织比原发肿瘤组织表达更高的COX2，而COX2抑制剂在体外可以抑制具有强转移特性的NCIH 460LNM 35细胞系的转移，这提示COX2的高表达可能与NSCLC转移有关。姜宇等[4]研究表明，COX2蛋白在骨肉瘤组织中的过高表达，可通过增加血管内皮生长因子，促进肿瘤细胞新生血管的生长，为骨肉瘤的生长、转移创造了有利条件。张俊等[5]研究证实,有淋巴结转移的胃癌原发灶内COX2蛋白的表达明显高于无淋巴结转移者,由此可推知COX2蛋白对胃癌的转移发挥了重要作用。王宪斌等[6]研究证实，COX2蛋白表达同骨肉瘤的发生、发展密切相关，COX2蛋白同P53突变型蛋白相互协同，促进了肿瘤组织血管的生长，为肿瘤的转移创造了条件。

　　本研究结果显示发生肺转移的骨肉瘤患者COX2蛋白的阳性表达明显高于非肺部转移患者的表达情况，且发生肺部转移的患者COX2蛋白呈过高表达，两者差异有统计学意义(P<0.05)，该研究认为，COX2蛋白在骨肉瘤中的高表达与肺部的转移存在密切关系，其通过与P53、MMPs、血管内皮细胞生长因子等多种因素协同作用促进了肿瘤细胞的新生血管的增长，抑制了肿瘤细胞的凋亡，逃避了机体的免疫监视，为肿瘤细胞的转移创造了有利条件，在临床上通过监测COX2蛋白的表达情况对骨肉瘤的治疗进行指导。

　　【参考文献】

　　1 Sugiyama T, Yoshimoto T,Sato R, et al . Endothelin1 induces cyclooxygenase2 expression and generation of reactive oxygen species in endothelial cells. J Cardiovasc Pharmacol,2004,44:332335.

　　2 Ishizaki T, Katsumata K, Tsuchida A, et al. Etodolac, a selective cyclooxygenase2 inhibitor,nihibits liver metastasis of colorectal cancer cells via the suppression of MMP9 activity. Int J Mol Med,2006,17:357362.

　　3 Takahashi T, Kozaki K,Yatabe Y, et al.Increased expression of COX2 in the development of human lung cancers.J Environ Pathol Toxicol Oncol，2002, 21:177181.

　　4 姜宇，杨树华，李进，等. 环氧合酶2在骨肉瘤中的表达及血管内皮生长因子相关性的研究.中国矫形外科杂志，2004，11：845847.

　　5 张俊，计俊，袁菲，等. 环氧合酶2表达与胃癌淋巴管生成及淋巴结转移的关系.中华胃肠外科杂志，2005，8：348351.

　　6 王宪斌，扈文海，李会杰，等. 环氧合酶2、P53在骨肉瘤中的表达及临床意义. 中国矫形外科杂志，2007，15:18221824.