缺血预处理对肢体缺血再灌注时炎性介质的影响

　　作者：黄明光 作者单位：广东省佛山市顺德区第一人民医院骨科,广东 佛山 528300

　　【摘要】目的：观察缺血预处理对肢体缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其作用机制。方法：32例胫腓骨切开复位内固定患者被随机分为常规治疗组及缺血预处理组，每组16例。两组分别于再灌注前(手术结束)及再灌注后(手术结束后)30 min、2 h采集外周静脉血标本4 mL检测血小板计数及IL8、NO、TXB2、6KetoPGFlα含量。结果：与再灌注前比较，两组在再灌注后2 h血小板计数及NO含量明显降低(P<0.05，P<0.01)，血浆IL8、TXB2和T/K明显升高(P<0.05，P<0.01);与常规治疗组比较，缺血预处理组相同时相点血小板计数及NO含量明显升高(P<0.05，P<0.01)，血浆IL8、TXB2和T/K明显降低(P<0.05)。结论：肢体缺血再灌注后出现的血小板活化和炎性介质浸润是再灌注损伤的重要机制，缺血预处理能减轻缺血再灌注损伤的程度。

　　【关键词】 四肢 缺血预处理 再灌注损伤

　　Effects of ischemic preconditioning on inflammation medium in ischemia reperfusion limbs

　　HUANG Mingguang

　　(Department of Orthopedic, First People's Hospital, Shunde District, Foshan 528300, China)

　　[ABSTRACT] Objective: To observe the effect of ischemic preconditioning on inflammation medium in ischemia reperfusion limbs and to investigate the related mechanisms. Methods: A total of 32 patients undergoing selected limb operation were divided randomly into two groups: control group (Group C, n=16) and ischemic preconditioning group (Group IP, n=16). The platelet count and the concentrations of inflammatory medium interleukin8 (IL8), nitric oxide (NO) and thromboxane (TXB2) were determined at 30 min and 2 h before and after reperfusion. Results: Compared with those before reperfusion, at 2 h after reperfusion, platelet count and NO decreased significantly (P<0.05 or P<0.01), but IL8, TXB2, T/K increased significantly (P<0.05). Compared with those in Group C, at 2 h after reperfusion, platelet count and NO increased significantly (P<0.05 or P<0.01), but IL8, TXB2, T/K decreased significantly (P<0.05). Conclusion: Platelet activation and inflammation medium soakage may be the important mechanism of ischemic reperfusion injury of limb. Ischemic preconditioning can alleviate ischemia reperfusion injury of limbs.

　　[KEY WORDS] Limbs; Ischemic preconditioning; Reperfusion injury

　　肢体的创伤、断肢再植、血栓形成、组织移植及止血带的应用时间过长均可引起肢体缺血，随着血流的恢复，会造成肢体缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion， IR) [1]。肢体缺血再灌注损伤与血小板的功能状态和炎性介质有重要关系[2，3]。研究表明，缺血预处理(ischemia preconditioning， IP)对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用[4]。本研究旨在观察缺血预处理对肢体缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其作用机制。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　2006年5月～2007年7月，选择32例，男性24例，女性8例，年龄20～60岁。所有患者均需充气止血带加压肢体止血。32例随机分为常规治疗组及缺血预处理组，每组16例。两组患者性别、年龄、手术时间均无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。

　　1.2 处理措施

　　①常规治疗组：抬高患肢驱血，3～6 cm宽气囊止血带环扎肢体近端，止血带加压肢体压力70 kPa。首次松止血带时间为1.5 h，遇手术时间延长，可重复缺血再灌注。②缺血预处理组：在止血带持续充气加压止血前，按上述压力，止血带预先阻断术肢血流5 min，然后松止血带，恢复血流灌注5 min，反复3次。以后处理措施同缺血组。

　　1.3 检测指标

　　两组分别于再灌注前(手术结束)及再灌注后(手术结束后)30 min、2 h采集外周静脉血标本4 mL检测血小板计数及IL8、NO、TXB2、6KetoPGFlα含量，并计算TXB2/6KetoPGFlα比值(T/K)。血小板计数采用常规光镜直接计算外周血循环血小板数。IL8检测采用ELISA法，试剂盒由第四军医大学生产。NO检测采用硝酸还原酶法，试剂盒由南京聚力生物医学研究所生产。血浆TXB2和6KetoPGFlα含量检测采用放射免疫测定法，试剂盒由解放军301医院生产。

　　1.4 统计学处理

　　计量数据以均数±标准差(±s)表示，组内比较采用方差分析, 组间比较采用t检验;计数资料用χ2检验，P<0.05为有显著性差异。

　　2 结果

　　与再灌注前比较，两组在再灌注后2 h血小板计数及NO含量明显降低(P<0.05，P<0.01)，血浆IL8、TXB2和T/K明显升高(P<0.05，P<0.01);与常规治疗组比较，缺血预处理组相同时相点血小板计数及NO含量明显升高(P<0.05，P<0.01)，血浆IL8、TXB2和T/K明显降低(P<0.05)。见表1。表1 两组灌注前后血小板计数及IL8、NO、TXB2、T/K的变化(略)注：与再灌注前比较，△P<0.05，△△P<0.01;与常规治疗组比较，*P<0.05，**P<0.01。

　　3 讨论

　　目前，对缺血再灌注损伤预防和治疗的研究报道较多，以动物实验为主，临床观察报道相对较少[1]。近来研究表明，短暂反复的缺血和再灌注不会造成损伤的叠加，反而可以提高组织对缺血缺氧的耐受性，此种现象被称为缺血预处理的保护作用[1]。肢体缺血再灌注损伤其发病机制尚未完全阐明，目前观点较多，如钙超载、氧自由基损伤、血小板活化、白细胞浸润和炎性因子的介导等，其中血小板的活化和炎性因子介导在肢体缺血再灌注损伤中的作用正得到许多学者的重视和肯定。

　　骨骼肌缺血再灌注后，外周循环血中血小板计数可明显减少，其原因在于缺血再灌注过量生成的氧自由基介导血小板活化，进而导致血小板聚集和微血栓的形成，血小板被破坏、裂解和消耗。血小板同时释放大量血栓素A2(TXA2)、白三烯和血小板活化因子等炎性介质，加重骨骼肌缺血再灌注损伤。氧自由基激活的中性粒细胞、血小板和巨噬细胞大量生成TXA2，并且组织缺血缺氧、粒细胞和血小板聚集、微血栓形成等因素引起血管内皮细胞受损，反应性地促进前列环素(PGI2)生成和释放。TXB2和KetoPGF1。分别为TXA2和PGI的主要代谢产物，检测两者的血浆含量，可间接反映TXA2和PGI2的水平。TXA2具有强烈的缩血管作用，促进血小板聚集和粒细胞脱颗粒反应，增加血管阻力和通透性。TXA2和PGI的动态平衡紊乱，加剧了血小板聚集、微血栓形成和微循环障碍的恶性循环。IL8是与炎症反应密切相关的细胞因子，肢体缺血再灌注后，由于细胞损伤和应激引起中性多核细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板等炎症细胞释放过多的IL8。NO在微循环调节、炎症反应等方面均有重要的作用，再灌注后NO显著下降。其原因可能由于脂质过氧化使膜系统受损，再加上IL8促使中性白细胞粘附于内皮细胞上，损伤血管内皮，使内源性NO合成下降所造成。

　　在本研究中，肢体缺血再灌注可使炎性介质IL8和TXB2明显增高;使血小板计数及NO减少，抗炎作用减弱。研究结果证实肢体缺血再灌注病理过程，是炎症的病理过程，肢体缺血再灌注后出现的血小板活化和炎性介质浸润是再灌注损伤的重要机制之一。

　　缺血预处理能够使血小板计数及NO含量明显升高，血浆IL8、TXB2和T/K明显降低，再次证实缺血预处理能减轻缺血再灌注损伤的程度，对机体有保护作用，其机制可能与抑制再灌注期问中性白细胞和血小板聚集，抑制氧自由基释放，调节炎性介质IL8、NO和TXB2的表达有关。缺血预处理在临床上简单易行，效果显著，值得推广应用。

　　【参考文献】

　　1 刘光军,王成琪.肢体缺血再灌注损伤防治的研究进展[J].骨与关节损伤杂志,2003，18(10):712714.

　　2 蓝旭,刘雪梅,葛宝丰,等.银杏叶提取液抗肢体缺血再灌注损伤[J].中国骨伤,2002,15(8):471472.

　　3 王洪震,沈施仁,董启榕.肢体缺血再灌注时炎性介质的表达和临床意义[J].中国血液流变学杂志,2005,15(1):4849,59.

　　4 卢卫忠,贺小兵,吴清,等.缺血预处理和丹参对肢体缺血再灌注损伤影响的临床观察[J].实用医学杂志,2002,18(10):10321034.