非转移性细胞蛋白1基因在前列腺癌中的表达及临床意义

非转移性细胞蛋白1基因(NME1基因)又名NM23基因,是第1个被发现能够抑制肿瘤转移的基因,其表达与多种恶性肿瘤的转移病理学指标、淋巴结浸润及不良预后有密切关系’j我们应用基因芯片筛选出在前列腺癌与前列腺增生组织特异性表达的基因NME1,蛋白组学对比前列腺癌组织和癌旁组织中NME1基因结合蛋白差异表达程度,免疫组织化学法结合NME1免疫组织化学评分和前列腺癌患者的临床病理参数进行分析,探讨其在前列腺癌中的作用及其机制.　　材料与方法　　1.材料:收集2008年至2012年、州市第一人民医院泌尿外科前列腺根治手术摘除或者经尿道前列腺电切术切下前列腺癌组织标本54例,其中原发前列腺癌30例、前列腺癌并转移24例、癌旁组织29例_所有患者在手术前均未经辅助化疗及放疗_液氮速冻收集保存以上标本均经过病理诊断证实单克隆鼠抗人NME1抗体购自北京博奥森有限公司、超灵敏的链霉菌抗生物素蛋自一过氧化物酶(SP)免疫组织化学试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购自福建迈新生物技术开发有限公司.　　2.NME1免疫组织化学检测:听有组织标本经10%甲醛液固定,石蜡包埋,厚4N.n.连续切片贴于经3-氨丙基一3一乙氧基甲硅烷(APE幻处理的载玻片_免疫组织化学按SP法试剂盒要求操作,DAB试剂盒显色,苏木素复染胞核.　　3.结果判断:NME1阳性细胞着色主要定位于细胞胞质及细胞膜根据染色细胞阳性比例及染色强度,采用二次记分法评判:阳性细胞数<5%为.分,5%一25%为1分,26%一50%为2分,>50%为3分_染色强度:不着色为0分,淡黄色为1分,深黄色或者棕黄色为2分,棕褐色颗粒染色为3分两者相乘为最后结果,0一3分为阴性(一),,4分者为阳性(*)用PBS代替一抗作为阴性对照免疫组织化学评分由分别由2位病理学专家完成.　　4.统计学方法:数据均用均数士标准差表示,应用SPSS13.0统计软件分析,计量资料采用两独立样本t检验,计数资料采用Pearson2x2丫检验,I}aplan-Meier检验进行生存率及生化复发分析.　　结果　　1.基因芯片筛选结果:通过前期基因芯片(GEODataSets.GSE28204)筛选可见相对于前列腺增生组织,NME1在前列腺癌组织中表达是上调的,_上调达2.24倍(P<0.01).　　2.蛋白组学结果:利用双向差异凝胶电泳(2D-DICE)技术对比在前列腺癌组织和癌旁组织中差异表达的蛋白,利用DeC川erBVA软件分析差异性表达的蛋白点,可见NME1基因结合蛋白在前列腺癌组织中表达调2.36倍(P<0.01).　　3.NMEl免疫组织化学结果:54前列腺癌组织中50例NME1阳性表达,阳性率为92.6%,29例癌旁组织中24例NMEI染色阳性,阳性率为82.8%,NMEI在前列腺组织中的表达明显强于癌旁组织,两者差异有统i十学意义(P<0.01)}19例前列腺癌转移组织中有18例\MEI染色阳性,阳性率为94.7%;NME1在前列腺癌并转移组织的表达明显强于原发前列腺癌组织,两者差异有统计学意义(P<0.01).　　4.ND2E1免疫组织化学评分与前列腺癌临床病理参数的相关分析:采用二次计分法计算NME1在前列腺癌组织的染色评分,将此评分与相应前列腺癌患者的临床病理参数结合分析,发现NME1表达在前列腺癌患者血清前列腺特异抗原(P}1)水平<10},群L,,10},群L的评分分别为((3.69士1.69)分和(4.51士1.19)分(P<0.OS)}Gleason评分<8和)8评分分别为(3.74士1.75)分和(4.88士1.88)分(P<0.01)、肿瘤TNM分期<T气,>T2A评分为(3.60士1.65)分和((4.士1.93)分(P<0.05),与前列腺癌转移无和有一评分为(3.66士1.64)分和(5.84士1.89)分(P<0.01),而与患者年龄<70岁,70岁无明显相关(P>0.05).利用Kaplan-Meier检验作前列腺癌患者的生存曲线,发现illME1阳性的患者预后不良(LogRank=11.117,P<0.O1).　　讨论　　前列腺癌发病隐匿,前列腺癌的腹部B超误诊率达45.1%,CT检查的误诊率达34.5%,经直肠彩超的误诊率达10.1%,MR的误诊率是7.5%PSA在筛选、诊断前列腺癌及判断前列腺癌复发上已应用多年,是经典的血清生物标志物,但其在判断前列腺癌转移方面作用局限,大部分患者确诊前列腺癌时已发生转移,失去根治性手术的机会,只能行姑息性或对症治疗"飞SC111T11C1等通过研究证实在临床_L24}/0的患者在确诊前列腺癌时已发生骨转移.目前,国内外许多研究证实前列腺癌的复发及转移与雄激素水平及雄激素受体密切相关,但雄激素水平及雄激素受体影响前列腺癌复发及转移的机制尚未明确NMF1的研究或许可以提供一条研究前列腺癌复发及转移的新思路、新方法.　　Steeg等L6首先从鼠K-1735黑色素瘤细胞株中,经差异显示杂交分离出来NME1基因.人类的NME1基因定位于17号染色体长臂上,该基因全长8.5kh,由5个外显子及4个内含子组成,编码一种相对分子质量约为17000的蛋白质,具有二磷酸核脊激酶活性,对肿瘤的增殖、分化、侵袭及转移起重要作用.而NMEl-1465T>C位点位于Nmel基因启动子区域;(等,A〕报道该位点的基因多态性与乳腺癌预后密切相关,相对野生型等位基因T,携带C等位基因的患者有更高的病死率.但是NME1与前列腺癌的关系尚不明确.　　本实验结果显示,NME1基因结合蛋白在前列腺癌组织中呈显著上调表达,随后进行免疫组织化学染色证实NMEI在前列腺癌组织中是高表达的,在癌旁组织中是低表达的.结合NME1免疫组织化学评分与前列腺癌患者临床病理参数分析,我们发现NME1表达水平与血清PSA水平、Gleasoi:评分、肿瘤TNM分期以及前列腺癌转移呈正相关,而与年龄无明显相关,以上结果表明,NME1在前列腺癌患者中是高表达的,其表达与肿瘤的恶性程度相关本实验结果证明NME1可能与前列腺癌的发生和发展有关,抑制前列腺癌的恶变,并能够反映前列腺癌恶性程度因此,NME1有可能成为早期诊断前列腺癌重要的实验室参考指标.同时,前列腺癌的患者也可以通过NMEI蛋白的表达了解肿瘤的恶性程度、疗效判断及初步判断预后,对临床医生选择治疗方案具有指导作用对NME1基因药物的进一步探索,或可成为抑制前列腺癌浸润、转移的一条新途径.　　本研究结果显示,通过K-M检验绘制生存曲线得知在所有前列腺癌患者中,NMEI高表达患者的生存时间明显低于NME1低表达患者,而在前列腺癌并转移患者中发现相同结果,表明NME1可以指导判断前列腺癌的预后、因此,临床上已确诊为前列腺癌的患者,可通过检测体内NME1水平预测其是否发生早期转移而针对NME1药物的进一步研究或许可成为抑制前列腺癌转移的新途径,从而延长前列腺癌患者的总体生存率.　　参考文献　　Marshall JC,Collins J,Marino N. The Nm23-H1 metastasis suppressor as a translational target[J].European Journal of Cancer,2010.1278-1282.　　Zhong WD,Liu LS,Liu WH. A clinical study on prostate cancer diagnosis with cDNA macroarry[J].Chinese Journal of Cancer Research,2005.66-70.　　江先汉,毕学成,何慧婵. 前列腺癌与良性前列腺增生中NFK-BIA及SREBF2的表达[J].中华实验外科杂志,2010,(3):328-329.doi:10.3760/cma.J.issn.1001-9030.2010.03.021.　　钟惟德,何慧婵,刘文华. 前列腺癌与前列腺增生相关基因的选择和克隆[J].中华实验外科杂志,2005,(2):189-191.doi:10.3760/j.issn:1001-9030.2005.02.022.　　Schmid HP,Stamey TA,McNeal JE. Effect of the natural history on management of adenocarcinoma of the prostate[J].Urologe A,1994.144-148.　　Steeg PS,Horak CE,Miller KD. Clinical-translational approaches to the Nm23-H1 metastasis suppressor[J].Clinical Cancer Research,2008.5006-5012.　　Postel EH,Zou X,Notterman DA. Double knockout Nmel/Nme2 mouse model suggests a critical role for NDP kinases in erythroid development[J].Molecular and Cellular Biochemistry,2009.45-50.　　Qu S,Long J,Cai Q. Genetic polymorphisms of metastasis suppressor gene NME1 and breast cancer survival[J].Clinical Cancer Research,2008.4787-4793.