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《泌尿生殖系外科学》

NSE在慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型前列腺组织中的表达及意义

发表时间:2014-07-09  浏览次数:1192次

慢性前列腺炎(chronic prostatitis, CP)是泌尿外科的常见疾病,占泌尿外科门诊的8%一 2500,全球900 }-14%的男性受其困扰a},其中 90%左右为慢性非细菌性前列腺炎(CNP) vz}。大规模流行病学调查表明〔3y CP在我国的患病率约为4.500,而前列腺炎样症状的发生则更为普遍,约为8.4%,其所引起的下尿路症状和慢性疼痛严重影响患者的生活质量。近年来的研究提示CP 的发生可能与前列腺神经内分泌功能改变以及细胞因子等多种因素有关,前列腺神经内分泌细胞 (NECs)可分泌多种细胞因子等产物,作用于前列腺上皮及平滑肌细胞,对前列腺生长、分化和分泌功能等起着调节作用。本研究通过建立大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型,分别借助酶联免疫吸附测定法,免疫组化等实验对大鼠前列腺组织中神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达进行比较,探讨神经 分泌细胞在前列腺炎发生、发展中的作用。

1材料与方法

1.1材料 1. 1. 1实验动物选取2月龄清洁级雄性SD大鼠40只,体重220-}-275 g(安徽医科大学实验动物中心提供)。 1. 1. 2主要试剂与仪器17-}3雌二醇(美国Sig- ma公司),一抗即抗一}1SE一抗体(英国abcam公司);SP免疫组化检测试剂盒、DAB试剂盒(北京中杉金桥公司);酶联免疫检测试剂盒(美国R乙D 公司)。仪器包括:Olympus显微镜,恒温离心机 ( Eppendorf),全自动酶标仪(美国Bio-Tek公司)等。

1.2动物分组及建模 将40只雄性SD大鼠按体重排序编号,采用区组随机化分组。模型组SD大鼠以10%水合氯醛3 ml/kg麻醉后,无菌条件下行去势手术,手术当日及术后2d给予注射用青霉素5万U/(kg/d> 肌肉注射,1周后观察伤口愈合良好,开始皮下注射17 b-雌二醇0. 25 mg · (2 ml·kg),正常对照组每只大鼠皮下注射生理盐水0. 6 ml,每天1 次,连续注射30 d。末次给药24小时后,在无菌条件下以心脏穿刺采血法收集5 ml全血,迅速取出前列腺组织置人D-Hanks液中,小心剔除前列腺包膜及周围脂肪、血管等其他组织,获得较为纯净的前列腺组织,一部分组织HE染色、石蜡包埋切片后光镜观察,另一部分组织经4%多聚甲醛固定以备免疫组化实验。

1.3实验方法 病理切片:取大鼠前列腺组织制作病理切片,常规HE染色,光镜观察。 免疫组化方法:标本均经4%多聚甲醛固定后常规石蜡包埋,连续切片,用免疫组化SP法进行。 NSE一抗工作浓度为1:100.按实验步骤操作, DAB显色,苏木素复染,脱水、透明、封片。阴性对照以PH;7.4,0.01 mmol/LPBS缓冲液代替一抗 酶联免疫吸附测定法:经心脏穿刺收集全血离心后,取其上清液移人无菌瓶内,采用双抗体夹心 ELISA法定量分析各组大鼠前列腺中NSE的表达,严格按照试剂盒说明书操作。

1.4结果判断

免疫组化染色:NSE阳性细胞主要为胞浆着色,以细胞胞浆中见到棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞。每张切片在高倍镜下(40X10视野)随机选择5个视野,分别记录阳性细胞百分数,并取5个视野的平均值作为最终阳性细胞百分比。根据切片上细胞着色的程度不同分别标示为阴性(一):无着色细胞或仅有少量细胞着色;弱阳性(+):阳性细胞数10%-25%;阳性(++):阳性细胞数26% -50%;强阳性(+++):阳性细胞数>50%。阳性表达率为阳性例数所占百分比。 酶联免疫吸附测定法:ELISA试剂盒检测范围为0.1-40.ug/L,用全自动酶标仪以450 nm 为主波长,读取吸光度(A)值,绘制标准曲线并读取每孔待测样品的浓度,含量用ug/L表示。

1. 5统计学处理 所有数据均输人SPSS 13.。软件进行分析.样本的率的比较采用四格表资料卡方检验,量化结果数据均以王士、表示,采用单因素成组资料的t检验进行统计学检验,P <0. 05表示差异有统计学意义。

2结果

2. 1大体标本及光镜观察 大体标本示:对照组前列腺组织表面光滑,平整,易与周围组织剥离,结构完整;模型组前列腺组织质地较硬,腺体明显变小,与周围组织粘连,不易剥离,结构不完整。光镜观察:对照组大鼠的前列腺组织结构完整;腺体未见萎缩;间质无水肿,无炎症细胞浸润,腺泡上皮排列整齐无增生现象。模型组前列腺间质充血水肿,局部组织结构遭到不同 程度的破坏,腺腔细胞不均匀的增生,导管扩张或损毁,部分基膜被破坏,同时腺泡腔内和周围均见大量淋巴细胞和浆细胞浸润,部分组织还可见局限性坏死等改变(图1).

2. 2免疫组化实验结果 在对照组和CAP模型组阳性表达率分别达到 25%(其中弱阳性2例,阳性3例)和80%(其中弱阳性3例,阳性9例,强阳性4例),组间比较,差别具有统计学意义(P <0. 0l)(图2①一④)。

2.3 ELISA实验结果 ELISA检测结果显示在CAP模型中NSE表达明显高于正常对照组。统计结果显示各组之间差异有统计学意义(P <0. O1),具体结果见表to

3讨论

慢性前列腺炎是泌尿外科的常见病,国内外学者对于CP的研究已经涉及多个领域,但其确切病因及发病机制还不是很清楚。近年相关研究发现慢性前列腺炎的发生与神经内分泌细胞功能之间有一定的联系 神经内分泌细胞(neuroendocrine cells; NECs)又称内分泌一旁分泌细胞或APUD ( amine precusor uptake and decarboxylation)细胞。

参考文献

[1] Shoskes D A.Use of antibiotics in chronic prostatitis syndromes. The Canadian Journal of Urology . 2001

[2] Liang CZ,Li HJ,Wang ZP,Xing JP,Hu WL,Zhang TF,Ge WW,Hao ZY,Zhang XS,Zhou J,Li Y,Zhou ZX,Tang ZG,,Tai S.The prevalence of prostatitis-like symptoms in China. Journal d Urologie . 2009

[3] Kamijo T,Sato S,Kitamura T.Effect of Cernitin pollen-extract on experimental nonbacterial prostatitis in rats. Prostate . 2001

[4] Huang J,Wu C,di Sant‘Agnese PA,et al.Function and molecular mechanisms of neuroendocrine cells in prostate cancer. Analytical and Quantitative Cytology . 2007

[5] Santamaria L,Martin R,Martin J Jet al.Stereologic estimation of the number of neuroendocrine cells in normal human prostate detected by immunohistochemistry. Applied Immunohistochemistry . 2002

[6] Sun Y,Niu J,Huang J.Neuroendocrine differentiation in prostate cancer. Am J Transl Res . 2009

[7] Wang, X,Kruithof-de Julio, M,Economides, K.D. et al.A luminal epithelial stem cell that is a cell of origin for prostate cancer. Nature . 2009

[8] LiangC Z,Guo QK,HaoZ Yet al.K~+ channel expression in prostate epithelium and its implications in men with chronic prostatitis. BJU International . 2006

[9] F Gackiere,G Bidaux,P Delcourt,F Coppenolle,M Katsoqiannou,E Drwailly,A Bavencoffe,MT Chuoi-Mariot,B Mauroy,N Prevarskaya,P Mariot.CaV3.2 T-type calcium channels are involved in calcium-dependent secretion of neuroendocrine prostate cancer cells. Journal of Biological Chemistry . 2008

[10] Helle KB.Regulatory peptides from chromogranin A and secretogranin Ⅱ: Putative modulators of cells and tissues involved in inflammatory conditions. Regulatory Peptides . 2010

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