CD44s和RAHMM在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

　　作者：程庆水,韩,杰,黄后保,姜书传,李志强　　作者单位：241001 芜湖 皖南医学院弋矶山医院泌尿外科

　　【摘要】目的 探讨CD44s和RHAMM在膀胱移行细胞癌的表达及其与膀胱移行细胞癌生物学行为之间关系及其临床意义。 方法 应用免疫组织化学方法检测60例膀胱移行细胞癌和6例正常膀胱标本CD44s和RHAMM的表达。 结果 膀胱癌中RHAMM、CD44s阳性表达率分别为60%、63%。随着膀胱癌进展CD44s表达显著下降，RHAMM阳性表达增高，与病理分级及分期有关。 结论 联合检测CD44s和RHAMM有助于膀胱移行细胞癌的的恶性程度及预后做出较准确的评估。

　　【关键词】 CD44s;透明质酸移动受体;膀胱癌;临床意义

　　Expressions of CD44s and RAHMM in transitional cell carcinoma of the bladder and their clinical significance　　Cheng Qingshui, Han Jie, Huang Houbao, et al　　Department of Urology Wannan Medical College Yijishan Hospital,Wuhu 241001　[Abstract] Objective To investigate the expression of CD44s and RHAMM in the bladder transitional carcinoma (BTCC), their relationship with the biological behavior of BTCC and their clinical significance. Methods The expression of RHAMM and CD44s in 60 cases of BTCC and in 6 of normal bladder was detected by immunohistochmical method. Results The positive expression rate of RHAMM, CD44s in bladder cancer was 60% and 63%, respectively. With the invasion of bladder carcinoma, the expression of RHAMM was increased and was related to the pathological stages and metastasis, while the expression of CD44s decreased obviously and reversely related to the metastasis. Conclusion Combined detection of CD44s and RHAMM can provide more accurate judgment of malignance and prognosis for BTCC.

　　[Key words] CD44s; RHAMM; Bladder transitional cell carcinoma; Clinical significance

　　在我国，膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤[1]，其中约90%为膀胱移行细胞癌，而浅表性膀胱肿瘤约占75%。近年来，人们发现细胞黏附因子CD44及其变异体参与介导的细胞与细胞、细胞与胞外基质黏附功能异常同膀胱移行细胞癌的侵袭转移及预后有密切关系[2，3]。在肿瘤进展过程中，透明质酸通过与透明质酸受体结合参与调节肿瘤细胞的移动浸润转移。本文旨在对CD44s和透明质酸移动受体(RHAMM)两种受体在膀胱癌中的作用进行研究。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本 收集我院2004年1月至2006年12月膀胱部分切除或全切手术患者的60例石蜡切片标本，所有病例标本均经病理证实，其中男性42例，女性18例，平均年龄63(33～88)岁。根据UTCC制定的TNM分期标准，膀胱移行细胞癌临床分期如下：Tis 17例，T1期16例，T2期18例，T3期6例，T4期3例;并分为表浅组(Tis～T1)33例和浸润组(T2～T4)27例。按照WHO标准进行病理分级：G1级25例，G2级20例，G3级15例。

　　1.2 方法 取10%中性福尔马林固定的石蜡包埋切片，厚4 μm，采用SABC法进行免疫组化染色，对研究标本进行检测。SABC试剂盒及兔抗人多克隆抗体CD44s、RHAMM，均为武汉博士德公司产品。

　　1.3 结果判断 光镜下观察RHAMM阳性染色为胞膜、胞质呈棕黄色。CD44s阳性染色胞膜为棕黄色。两种受体未见阳性染色为阴性。

　　1.4 统计方法 采用SPSS 13.0软件包进行χ2检验。

　　2 结果

　　60例膀胱癌中RHAMM在浅表组中阳性16例，浸润组中阳性20例，浅表组与浸润组相较其差异有统计学意义(P=0.044)，在各病理分级差异有统计学意义(P=0.02);CD44s浅表组中27例，浸润组中11例，两组相较差异有统计学意义(P=0.001)，在各病理分级中差异具有统计学意义(P=0.037)。见表1。

　　双变量相关分析发现RHAMM阳性表达与CD44s阳性表达显著相关(r=-0.409 P=0.001)。见表2。

　　3 讨论

　　细胞黏附因子CD44，属透明质酸受体，又称淋巴细胞归巢受体，是一种蛋白形式的细胞表面黏附因子，参与细胞-细胞、细胞-基质之间的特异性粘连过程[4]，基因定位于人类11号染色体P13～14上，由至少20个外显子和其间的内含子组成，仅含S型外显子的CD44称标准型CD44(CD44s)。本实验表明CD44s在浅表组的表达明显高于浸润组，随着膀胱移行癌细胞浸润程度增加，表达逐渐下降。表浅组CD44s阳性细胞主要位于移行上皮基底层，而表浅的细胞中染色明显变浅为阴性。同时CD44s的表达随组织学分级的升高呈下降趋势。近年来研究表明，CD44蛋白与许多系统的肿瘤恶性程度和淋巴结转移密切相关。现已证实，CD44s基因可由多种癌细胞表达。其在正常膀胱黏膜中主要表达于基底细胞层，在黏膜的表浅细胞表达为阴性，其对透明质酸有较强的黏附能力。Gadalla 等[5]在对55例膀胱癌患者的研究表明CD44在侵袭性膀胱移行细胞癌中的表达显著低于正常膀胱上皮和未侵袭的原位癌，并且表达与肿瘤的级别和浸润深度成反比。本研究中结果与之相符。CD44s的表达下降，可能是由于CD44s的mRNA异常转录所致。Nickolaos[6]认为CD44s可作为一种监测短期内肿瘤复发侵袭性增高有用的指标，但却不能作为一个能独立预测浅表膀胱癌进展预后的因子。

　　人RHAMM基因定位于染色体5q33.2，包括14个外显子。RAHMM不仅是一种细胞外表面受体，而且是细胞内的HA受体[7]。其拼接异构物分胞内和跨膜两种类型，前者称胞内HA结合蛋白即IHABP，后者称之为膜型RHAMM(CD168)。已知膜型RHAMM和IHABP 都能与HA 结合，但前者更易与ECM中的HA相互作用，促进肿瘤细胞的侵袭转移[8]。有资料显示，RHAMM基因是一种致癌基因，能调节肿瘤细胞的游走性和侵袭性。Kong等[9]64 例膀胱癌标本免疫组织化学染色中RHAMM染色阳性39 例,占60.9%，且随浸润深度的增加和转移的出现有明显增高的趋势,与病理分期有关,其膜型过表达者术后易复发及转移，可能参与了侵袭性癌细胞异质性的形成，而正常膀胱上皮组织RHAMM染色阴性，说明RHAMM与膀胱癌发生和发展有关。本试验结果也说明RHAMM表达随着膀胱肿瘤浸润的加深而增加，且各病理分级中差异也具有统计学意义，与上述研究结果吻合。RAHMM 参与肿瘤的可能机制是它可作为细胞外信号和核内癌基因的中介分子，作为ras的下游成分而参与细胞信号调控，当ras 基因突变时RHAMM 表达上调，RHAMM的高表达可导致erk信号持续活化，从而诱导肿瘤发生[10]。本试验研究显示浸润性膀胱癌中CD44s表达随着肿瘤级别、临床分期升高呈进行性下降趋势，而RHAMM表达与之相反，两指标之间呈负相关(r为-0.409)，可认为RHAMM与CD44s之间可能存在着某种形式的协同作用和或以互补形式介导膀胱癌细胞的侵袭，因此可认为联合检测RHAMM和CD44s有助于膀胱癌的早期诊断。

　　【参考文献】

　　[1] 吴阶平，马永江.实用泌尿外科学.北京：人民军医出版社，1991：81-104.

　　[2] Miyake H, Eto H, Arakawa S, et al. Over expression of CD44V8-10 in urinary exfoliated cells as an independent prognostic predictor in patients with urothelial cancer. J Urol， 2002，167(3):1 282-1 287.

　　[3] Ross JS,del Rosario AD,Bui HX,et al.Expression fo the CD44 cell adhesion molecule in urinary bladder transitional cell carcionma.Mod Pathol,1996，9(8):854-860.

　　[4] 杨秋霞，赵贤妹. CD44分子生物学特性及与肿瘤关系的研究进展.国外医学免疫学分册，2000，23(1):12-15.

　　[5] Gadalla HA,Kamel NA,Badary FA et al.Expression of CD44 protein in bilharzial and non-bilharzial bladder cancers.BJU Int, 2004，93(1):151-155.

　　[6] Nickolaos E,Stavropoulosl, Ioannis Filliadisl, et al.CD44 standard form expression as a predictor of progression in high risk superficial bladder tumors.Int Urol Nephrol, 2001，33(3):479-483.

　　[7] Evanko SP,Parks WT,Wight TN.Intracellular hyaluronan in arterial smooth muscle cells:association with microtubules,RHAMM,and the mitotic spindle. J Histochem Cytochem,2004,52(12):1 525.

　　[8] Li H,Guo L,Li JW,et al.Expression of hyaluronan receptors CD44 and RHAMM in stomach cancers:relevance with tumor progression.Int J Oncol,2000,17：927-932.

　　[9] Kong QY,Liu J,Chen XY,et al. Differential expression patterns of hyaluronan receptors CD44 and RHAMM in transitional cell carcinoma of urinary bladder. Oncol Rep,2003，10(1):51-55.

　　[10] 薛珺，黄后宝，姜书传.透明质酸受体与膀胱癌.国际泌尿外科杂志，2008，24(1)：34-37.