膀胱移行细胞癌微血管密度与其复发的关系

　　作者：邱国光,雷德利　　作者单位：解放军第161医院，湖北 武汉 430010

　　【摘要】 目的：探讨肿瘤微血管形成能力与膀胱移行细胞癌复发的关系及机制。方法：采用免疫组化的方法对42例膀胱移行细胞癌组织中的第Ⅷ因子相关抗原，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及血管内皮细胞生长因子(VEGF)分别进行特异染色，记数肿瘤内微血管密度(MVD)，并观察bFGF、VEGF的表达。结果：VEGF和bFGF的阳性表达率分别为：59.5%和40.5%，MVD阳性表达组显著高于阴性表达组(P<0.05)，术后复发组显著高于未复发组(P<0.05)，且高MVD组复发率高于低MVD组(P<0.05)。结论：MVD与膀胱移行细胞癌复发有关，而且血管形成因子的异常表达是其微血管形成能力增高的重要因素。

　　【关键词】 膀胱癌;血管内皮细胞生长因子;碱性成纤维细胞生长因子;微血管密度;复发

　　Relation between Microvascular Density and Recurrence in Primary Transitional Cell Carcinoma of Bladder

　　QIU Guoguang,LEI Deli

　　(The 161st Hospital of PLA, Wuhan, Hubei 430010, China;Pu’ai Hospital of Wuhan, Wuhan, Hubei 430022, China)

　　Abstract: Objective To elucidate the expression and significance of vascular endothelial growth factor(VEGF)，basic fibroblast growth factor(bFGF)and the microvascular density (MVD)in primary transitional cell carcinoma of bladder ，and to determine their magnitude of angioenesis. Methods Specimens form 42 patients with primary transitionalcel cell carcinoma of bladder were assayed using immunohistochenmical technique to examine the expression of factor Ⅷ related ：antigen ，basic fibroblast growth factor (bFGF)and vascular endothelial growth factor(VEGF)，as well as the microvascular density (MVD). Results He positive expression rate of VEGF and bFGF was 59.5% and 40.5% ，and the (P<0.05) and the recurrence rate of the high MVD group is higher than that of the low MVD(P<0.05).The MVD of the recurrence group is higher than that of the non –recurrence group (P<0.05)，and the recurrence rate of the high MVD group is higher than that of the low MVD group is higher than that of the low MVD group (P<0.05). Conclusion MVD is related with the recurrence of primary transitional cell carcinoma of bladder，and the abnormal expression of vascular endothelial growth factor(VEGF)is the major element in increasing forming capability of the microvascular.

　　Key words: Bladder cancer; Vascular endothelial growth factor (VEGF); Basic fibroblast growth factor(bFGF); Microvascular density (MVD); Recurrence

　　血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor VEGF)是与血管生长有关的因子之一，对血管内皮细胞的增殖、迁移和血管构建的调控起着最为重要的作用,是肿瘤的无限制性生长和转移的质基础。我们采用免疫组织化学技术研究膀胱移行细胞癌微血管密度(MVD)与其复发的关系，并就其机制作初步探讨。

　　1 资料与方法

　　1.1 研究对象 选择1999年至2005年在我院和武汉市普爱医院行膀胱部分切除且有随访结果的初发膀胱癌患者42例，其中男30例，女12例;平均年龄(55.36±2.5)岁;术后到随访的时间为1 a~2 a。手术切除后，经病理证实膀胱移行细胞癌(transitionalcell carcinoma of the bladder BTCC)。其中T1期18例、T2期17例、T3期7例。

　　1.2 方法 每一病理标本均经10%甲醛固定24 h，石蜡包埋，常规切片5张，分别行免疫组织化学染色。HE染色及空白对照染色，采用SABC免疫组织化学染色法，一抗为猴抗人第Ⅷ因子相关抗原，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)多克隆抗体及小鼠抗人VEGF单克隆抗体(均购于北京中山生技术有限公司)。操作方法按说明书进行，采用复合消化液暴露抗原，用PBS代替一抗作阴性对照。

　　2 结果

　　按照weidner 提供的方法记数微血管，其结果见表1、表2。

　　表1 膀胱癌分期与MVD的关系(略)

　　注:Ⅰ级与Ⅱ级比较,P<0.05;Ⅱ级与Ⅲ级比较P>0.05;Ⅰ级与Ⅲ级比较,P<0.01,Tis~T1与T2～T4比较P<0.01。

　　表2 VEGF表达与肿瘤MVD之间的关系(略)

　　注：P<0.01。

　　表3 bFGF与肿瘤MVD之间的关系(略)

　　注：P>0.05。

　　表4 MVD与膀胱癌复发的关系(略)

　　注：P<0.05。

　　由表1可以看出，Tis~T1 期平均MVD显著低于T2～T4期，由表4以看出，以MVD 80条为界，高MVD组复发率明显高于低MVD组(P<0.01)，表明MVD越高，术后复发率越高，MVD越低，复发率越低，呈显著的正相关。bFGF阳性肿瘤细胞均为胞浆着色，不同肿瘤的阳性细胞差别较大。从散在的几个癌巢至所有肿瘤的细胞均为阳性。以阳性细胞>30%为标准，本组bFGF阳性率33.3%，其中T1期为0、T2期为30%、T3期为82%。提示随着膀胱移行细胞癌浸润深度及异型性的增高，其合成bFGF的能力增强(P<0.05)，除逼尿肌纤维，阳性癌组织内及其周围血管内皮细胞也染成阳性。阳性组MVD为(55±4.7)条，阴性组MVD为(54±3.6)条，但阳性组MVD与阴性组MVD差异无显著性(P>0.05)。VEGF染色表现，阳性率为59.5%，其中Tis~T1期为32.6%，T2期为61.3%，T3~T4期为81.4%。阳性组MVD为(82.7±2.6)条，阴性组为(47.6±2.8)条，阳性组明显高于阴性组(P<0.01)。

　　3 讨论

　　膀胱移行细胞癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤，复发较高，其机制尚不清楚。目前有两种学说：原发肿瘤细胞脱落后种植于膀胱黏膜学说;尿中致癌物质刺激导致新生肿瘤发生的学说。许多学者认为，肿瘤内微血管密度数量与肿瘤的分级和侵袭性相关，研究发现，肿瘤内MVD是一个独立的预后因素。血管生长因子有：VEGF、表皮生长因子(EGF)、bFGF等。本组复发率为40.5%(17/42例)，大多数(63%)在1年内复发，因其可见肿瘤外存在原位癌或小肿瘤的可能性非常小，而有正常或不典型增生黏膜上皮发展为可见肿瘤需数年的时间。因此，有充分的理由认为脱落癌细胞种植是引发复发，特别是近期复发的主要原因。肿瘤生长主要依赖血管形成，附着与膀胱黏膜的脱落肿瘤细胞继续增殖和生长的前提是向其汇聚的微血管的形成。本研究发现，复发组MVD显著高于未复发组，表明MVD较高的肿瘤,其脱落细胞具有较强的血管形成能力，更易于附壁后继续生长而导致复发，而那些MVD较低的肿瘤细胞附壁后不易诱导新生血管的形成，随尿液的冲刷而排除体外。因此，有效的清除和杀灭脱落的肿瘤细胞是降低复发率，特别是近期复发率的非常重要的手段。肿瘤血管形成主要依赖血管调节因子，而血管调节因子是由肿瘤细胞分泌的一种蛋白质，参与调节微血管的形成。VEGF和bFGF是以被研究证实的促血管形成因子，均能诱导内皮细胞增殖，迁移及管腔结构的形成，从而促进微血管的形成。本研究发现，在VEGF和bFGF阳性的肿瘤中，肿瘤内部及临近区域的内皮细胞感染呈阳性，而远离肿瘤的区域的内皮细胞染色呈阴性。说明VEGF和bFGF作为旁分泌因子由肿瘤细胞分泌后作用于内皮细胞。VEGF阳性组MVD明显高于阴性组，也进一步证实它们对血管形成有促进作用。可见膀胱移行细胞癌促血管因子的异常表达、分泌，可使血管形成能力加强，对其复发起到至关重要的作用。本组bFGF与MVD差异无显著性，可能与样本过小有关。 “原发肿瘤细胞脱落后种植于膀胱黏膜学说”、“尿中致癌物质刺激导致新生肿瘤的发生学说”等，都从某个角度说明肿瘤的发生不是单一因素所致，其发生及转移与肿瘤的生物学行为有着密切的关系。通过本研究提示：MVD为较理想的膀胱移行细胞癌生物学行为的标志，能较好地预测膀胱移行细胞癌术后复发的风险。为了预防膀胱移行细胞癌手术后近期复发，我们建议在膀胱移行细胞癌手术过程中，用蒸馏水浸泡、冲洗手术野，清除、杀灭手术野中脱落的癌细胞以及术后早期(术后1周)行膀胱灌注化疗，对防止脱落肿瘤细胞种植、降低复发率、延长患者生存期、提高患者生活质量都有非常重要的意义。

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