NMP22、BTAstat和B超联合运用诊断膀胱肿瘤

　　作者：陈智,梁培育,徐海波,李浩勇,何书明　　作者单位：1.海南医学院附属医院泌尿外科， 海南 海口 571101; 2.贵阳中医学院， 贵州 贵阳 550002

　　【摘要】 目的：探讨核基质蛋白(NMP22)、膀胱肿瘤抗原(BTAstat)和B超联合检查在膀胱肿瘤诊断和术后随访中的价值。方法 ：对90例怀疑膀胱肿瘤以及膀胱癌术后随访的患者，均在预约膀胱镜检查前行尿NMP22、BTAstat和经腹B超检查，以病理检查为金标准，分析评价NMP22、BTAstat和B超联合检查在膀胱肿瘤诊断中的作用。结果 ：90例中膀胱移行细胞癌患者41例，泌尿系统其他疾病患者49例，NMP22、BTAstat和经腹B超检查3者联合诊断膀胱肿瘤的敏感性为92.7%,与膀胱镜(92.7%)比较,差异无统计学意义(P=1)，联合检测膀胱肿瘤的特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为75.5%、79.1%、91.2%。结论：NMP22、BTAstat和B超联合检查有助于提高膀胱肿瘤早期诊断的能力，可部分替代膀胱镜检。

　　【关键词】 膀胱肿瘤;核基质蛋白;膀胱肿瘤抗原;B超;联合诊断

　　Combined use of NMP22、BTAstat and ultrasonography in the screening and surveillance of bladder tumor

　　CHEN Zhi1,2 ，LIANG Peiyu1,XU Haibo1, LI Haoyong1,HE Shuming1

　　( 1. Department of Urology, Affiliated Hospital, Hainan Medical College Haikou 571101,China; 2. Chinese Traditional Medical College of Guiyang Guiyang 550002 ,China)

　　[ABSTRACT] Objective: To assess the value of combining use of NMP22, BTAstat and ultrasonography in Screening and Surveillance of bladder tumor(BT). Methods: NMP22, BTAstat and ultrasonography were carried out for 90 symptomatic patients suspicious of BT or after surgical treatment before cystoscopy . Pathology was used as the gold standard. Analysis the sensitivity(Se),specificity (Sp),positive perdictive value (PPV) and negative perdictive value (NPV) for each and conbined using in bladder tumor. Results: 41 bladder transitional cell carcinomas were diagnosed by pathology.49 cases were other benign urological diseases .With conbined use of 3, the Se (92.7%)was equal to the cystoscopy (92.7%)(P=1). The cinbined Sp, PPV, NPV was 75.5%79.1%91.2%respectly.Conclusions: Conbined use of NMP22, BTAstat and ultrasonography improve the diagnostic value in early BT .It can be adopted of cystoscopy partly .

　　[KEY WORDS] Bladder neoplasms;NMP22;BTAstat; Ultrasonography; Combination diagnosis

　　膀胱癌90%以上为移行细胞癌，其中80%以上为无浸润的浅表性癌，初发为浅表性并且局部切除者治疗效果良好，然而50%～57%的患者术后复发，并且15%～25%的患者向高级、高期进展[1]。降低膀胱癌的死亡率需要更好的普查方法和诊断技术，膀胱镜检依然是目前诊断膀胱癌的金标准，但其侵入性检查性质限制了其临床运用。目前单个非侵入性膀胱癌检测方法在临床上取得了一定进展,但敏感性和特异性均不十分理想,尚难以取代膀胱镜。本课题分别采用核基质蛋白(NMP22)、膀胱肿瘤抗原(BTAstat)和经腹B超单项或者联合检查膀胱肿瘤，以病理检查为金标准，分析比较单项及联合检查的敏感度、特异性、阳性预测值、阴性预测值，研究NMP22、BTAstat和B超检查在膀胱肿瘤早期诊断中的作用。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料

　　收集2004年4月～2007年12月我院门诊因血尿或膀胱刺激症状等不适、怀疑膀胱癌以及膀胱癌术后随访的患者90例，经病理证实膀胱移行细胞癌患者41例作为实验组，男性25例，女性16例，年龄32～80岁，平均56岁，按WHO(2004年)、国际抗癌联盟(UICC，2002年)TNM标准进行分级、分期：G1 级13例，G2级 20例，G3级 8例 ;Tis期 3例，Ta期14例，T1期 13例，T2期 7例，T3期 4例。泌尿系统其它疾病患者49例作为对照组，膀胱上皮不典型增生2例，急性肾盂肾炎4例，急性膀胱炎3例，肾癌5例，前列腺癌9例，前列腺癌并骨转移2例，尿石症16例，肾移植术后肾盂结石1例，腺性膀胱炎2例，双肾囊肿3例，肾结核2例。41例膀胱移行细胞癌中复发13例 ，首次复发9例，第二次复发4例，复发时间 4个月～6年。膀胱镜检肿瘤直径大小0.5～4 cm，数目1～5个。90例中肉眼血尿27例，其中结石2例，多囊肾1例。

　　1.2 方法

　　90例均在预约膀胱镜检查前1周留取新鲜尿液进行尿NMP22、BTAstat和经腹B超检查。膀胱镜检观察肿瘤位置、大小、数目、基底宽窄,并取活检，确诊后手术治疗，根据术后病理进行分级、分期。(1) 尿NMP22检测：美国Matritech公司试剂盒，采用ELISA法进行检测，利用抗NMP22地高辛结合物和地高辛辣根过氧化物酶显示系统。酶标仪490 nm波长处测OD值，绘制直线回归曲线(ROC曲线)，计算尿样中NMP22抗原浓度，确定最佳临界值。(2)尿BTAstat检查：采用商用BTAstat检测试剂盒，留取患者新鲜尿液5 mL，混匀后滴5滴于BTAstat试剂检测板中，5 min后读取结果,观察孔中出现粉红或红棕色条带判定为阳性，未出现条带则为阴性，同时观察对照孔，如果对照孔中未出现色带，则认为检查无效。(3)B超(OPENO 380二维彩色多普勒超声)检查：患者膀胱充盈，俯卧位，以线阵探头、频率3.5MHz，经腹壁在耻骨联合以上进行纵横及各种角度扫描膀胱内的肿瘤。

　　以膀胱镜检病理及术后病理检查为金标准，3项检查并联实验，其中一项检查结果阳性即为联合检查阳性，3项检查结果均阴性为联合检查阴性，并计算单项及联合检查的灵敏性、特异性、阳性预计值和阴性预计值。

　　1.3 统计学处理

　　采用SPSS12.0统计软件进行统计学处理，计量资料均数比较采用t检验，计数资料比较采用四格表Pearson χ2检验，检验水准α=0.05。

　　2 结果

　　根据ROC曲线，本实验以7.35 U/mL作为NMP22诊断膀胱癌(海南地区)的最佳临界值，膀胱肿瘤患者NMP22含量[(26.2±22.5)U /mL]明显高于泌尿系统其它疾病患者[(7.0±4.4)U/mL](P<0.01)。两组患者采用不同方法NMP22、BTAstat、B超和膀胱镜的检查结果。NMP22、BTAstat、B超和膀胱镜检查膀胱癌的总体敏感性、特异性、阳性预计值和阴性预计值，在膀胱肿瘤中3项并联检查敏感性(92.7%)均高于NMP22、BTAstat、B超单项检查的敏感性(分别为75.6%、65.9%、70.7%)(P<0.05)，与膀胱镜检(92.7%)比较差异无统计学意义(P=1)，并联检查特异性(75.5%)明显低于膀胱镜检(93.9%),差异有统计学意义(P<0.05)，其阳性预测值为79.1%，阴性预测值为91.2%，均低于膀胱镜检(93.8%、92.8%),联合检查假阳性率为24.5%。各检查方法对不同期别、级别、初发及复发膀胱癌患者诊断的敏感性见表3，并联检查膀胱癌敏感性随肿瘤级别、期别的增高而升高。陈智等.NMP22、BTAstat和B超联合运用诊断膀胱肿瘤 表1 两组患者采用不同方法检测结果(例)表2 不同方法诊断膀胱癌总体敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值的比较注：与膀胱镜比较，﹟P=1;与NMP22、BTAstat、B超单项检查比较，△P<0.05;与膀胱镜比较, *P<0.05。各诊断方法检测不同期别、级别、初发及复发膀胱癌敏感性注：()中为例数

　　3 讨论

　　NMP是组成细胞核内部结构的支架成分，而且同DNA的复制、RNA的合成、激素的联接、基因表达的调节密切相关，在乳腺、结肠、骨骼和尿路上皮中均发现了特异性肿瘤相关标记物。NMP22是特异性表达于尿路上皮肿瘤细胞中的一种核基质蛋白，在膀胱癌中NMP22因肿瘤细胞凋亡由细胞核释放进入尿中，可被特异性的单克隆抗体所识别，在尿路上皮肿瘤细胞中NMP22表达远高于正常细胞。Saad等[2]研究表明 NMP22敏感性与膀胱肿瘤期别、大小、数目呈正相关。本实验中7.35U/mL为最适临界值，诊断膀胱癌的敏感性为75.6%，特异性为85.7%，NMP22诊断膀胱癌敏感性随肿瘤分级、分期增加而增加，对13例复发患者诊断敏感性为76.9%。本组中2例前列腺癌，1例肾癌患者，NMP22值升高明显但低于膀胱癌诊断临界值。

　　尿路肿瘤分泌内源性基底膜蛋白与基底膜表面受体结合，释放出蛋白水解酶破坏膀胱黏膜上皮细胞下的基底膜。含基本组分的基底膜破坏碎片进入膀胱腔内，聚合成高分子复合物，即是膀胱肿瘤抗原(BTA)。BTAstat是通过对未处理尿样进行一步免疫层析测试诊断膀胱肿瘤2个单克隆抗体，检测抗原为肿瘤细胞产生的人类补体因子H相关蛋白hCFHrp[3]。本实验BTAstat检测膀胱癌的敏感性为65.9%，低于NMP22表达，特异性为87.8%，对于复发患者诊断敏感性为84.6%。Mahnert等[4]研究表明BTA升高60%复发风险增加10倍，本组检测显示BTAstat单独用于膀胱癌诊断价值小，但对复发监测有一定价值。

　　陈华等[5]采用尿膀胱癌抗原(UBC)、CYFRA211和透明质酸(HA)3种尿肿瘤标记物均联合检测诊断灵敏度可提高至96.2%，SanchezCarbayo等[6]联合应用NMP22、CYFRA211、BTA检测膀胱癌术后复发及监测敏感性为91%，特异性为95%。本组NMP22、BTAstat和B超联合诊断膀胱癌敏感性为92.7%，特异性为75.5%，3者联合诊断敏感性与文献报道相近。联合运用3种检查诊断膀胱癌出现假阳性12例，NMP22假阳性7例，BTAstat假阳性6例，B超1例，NMP22合并 BTAstat假阳性2例 。12例中，2例为膀胱癌术后丝裂霉素膀胱灌注患者，膀胱镜检阴性，其它均为泌尿系良性疾病。Li等[7]报道膀胱炎、结石、尿流改道、损伤、放疗、激素治疗会导致NMP22假阳性出现。NMP22检测膀胱癌是否受到泌尿系之外其它疾病(如肾功能不全、糖尿病)以及年龄、种族、吸烟等因素的影响尚缺乏证据。Schroeder等[8]报道尿路感染、损伤等导致BTAstat假阳性。血尿及丝裂霉素膀胱灌注干扰BTAstat检测，建议短期内应避免BTAstat检测[9，10 ]。本组膀胱癌患者术后均行丝裂霉素或比柔比星膀胱灌注，出现丝裂霉素假阳性1例，比柔比星灌注患者未见出现。27例血尿患者中BTAstat呈假阳性者3 例，血尿明显者居多，对于BTAstat与血尿严重程度的相关性有待进一步研究。

　　NMP22对于膀胱癌诊断及复发监测的效率均较高，BTAstat用于膀胱癌诊断价值小，但对于复发随诊效果明显，两者均存在假阳性干扰因素。B超检查对结石、肾癌敏感性高，可以帮助排除对于NMP22和BTAstat的假阳性干扰。3者联合检查应用提高了膀胱癌早期诊断的能力，可以部分替代膀胱镜检查。临床上，对于初发膀胱癌患者可以先行NMP22、BTAstat和B超联合检查，出现阳性结果时即行膀胱镜检查。复发患者联合检查阴性则不必行膀胱镜检查，可加大B超随诊频率或B超与膀胱镜交替使用随诊，减少病人痛苦。对于复发病例，3者联合检查具体应用方法有待进一步研究，可以参照术后随诊膀胱镜检查标准。

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