老年前列腺癌手术前后外周血调节性T细胞变化的临床意义

　　作者：李继清 冯国生 秦 俭 作者单位：广西壮族自治区人民医院泌尿外科，广西 南宁 530021)

　　【摘要】 目的 探讨老年前列腺癌(PCa)患者手术前后外周血调节性T细胞(TrCs)比例的变化和临床意义。方法 采用流式细胞技术检测14例老年PCa患者治疗前后和9例健康对照组外周血中T细胞亚群和CD4+CD25+ TrCs的比例，观察其变化情况。结果 老年PCa患者术前CD3、CD8较健康对照者降低，但差异无统计学意义(P>0.05);手术前后CD4均明显低于健康对照组，术前CD4+CD25+TrCs显著高于健康对照组和术后水平(P<0.05)，术后水平与健康对照组无明显差异(P>0.05);老年PCa病理级别越高，外周血CD4+CD25+TrCs的比例越高，G3～4级者的外周血CD4+CD25+TrCs的比例显著高于中低级别PCa患者(P<0.05);术后CD4+CD25+TrCs降低，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 老年PCa患者存在免疫功能失调和免疫抑制的情况;外周血CD4+CD25+TrCs比例的增加与PCa的病理分级有一定关系。

　　【关键词】 PCa癌;CD4+CD25+调节性T细胞;流式细胞术

　　有研究表明CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,TrCs)比例增高是肿瘤免疫抑制导致多种实体肿瘤进展和化疗耐受的重要原因之一〔1〕。本研究采用流式细胞术检测手术治疗前后老年前列腺癌(PCa)患者外周血T细胞，并与健康对照者比较，探讨免疫治疗在老年PCa综合治疗中的价值。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象 选择2007年6月至2008年6月在我院泌尿外科住院的初治无远处转移的老年PCa患者14例(PCa组)，年龄59～91岁，平均(61.2±4.4)岁。全部病例均行PCa根治术，术后病理均证实为腺癌。健康对照组9例，年龄59～78岁，平均(61.9±3.2)岁，所有研究对象采血前3个月及治疗中均未使用过免疫制剂。

　　1.2 方法 老年PCa组手术前后和健康对照组均于晨起空腹抽取外周静脉血10 ml，EDTA抗凝。应用BeckmanCoulter EPICS XL型流式细胞仪(美国Coulter公司产品)检测外周血单个核细胞膜表面CD3、CD4、CD8和CD4+CD25+TrCs数量。

　　1.3 主要试剂 CD3Cy5单克隆抗体、CD8FITC/CD28RPE单克隆抗体、CD4FITC/CD25RPE/CD3Cy5单克隆抗体、CD3FITC/CD16+56RPE/CD45Cy5单克隆抗体均为美国BD公司产品。

　　1.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件，计量数据以x±s表示，采用多个样本均数比较的单因素进行方差分析(one wayANOVA)和StudentNewmanKeuls(SNKq)检验。

　　2 结 果

　　2.1 老年PCa组手术前后外周血TrCs变化 与健康对照组比较，PCa组术前CD3、CD8较健康对照组降低，但差异无统计学意义(P>0.05);手术前后CD4均明显低于健康对照组，术前CD4+CD25+TrCs显著高于术后水平和健康对照组(P<0.05)，术后水平与健康对照组无明显差异(P>0.05)。见表1。表1 老年PCa患者手术前后外周血TrCs变化比较与健康对照组比较：1)P<0.05;与术后比较：2)P<0.05

　　2.2 肿瘤分化程度与TrCs的关系 老年PCa病理级别越高，外周血CD4+CD25+TrCs的比例越高，G3～4级者外周血CD4+CD25+TrCs的比例显著高于中低级别老年PCa患者(P<0.05)，术后虽有降低，但无显著差异(P>0.05)。见表2。表2 PCa分化程度与TrCs的关系与G3～4级比较：1)P<0.05;与术前比较：2)P<0.05

　　3 讨 论

　　CD4+CD25+TrCs是调节免疫功能的一个T细胞亚群，在维持机体免疫自稳、调控免疫应答方面起重要作用，主要参与抑制自身免疫性疾病的发生和肿瘤的免疫调节。肿瘤环境中CD4+CD25+TrCs比例增加可导致肿瘤免疫失调，去除这细胞群可以有效诱导肿瘤免疫。CD4+CD25+TrCs的免疫抑制机制目前尚不完全清楚。有学者体外实验数据表明在培养基中添加IL2、抗CD28抗体或脂多糖，TrCs会发生增殖〔2，3〕。癌症患者中许多由自体同源T细胞识别的肿瘤相关抗原已被证实是正常的自体成分，而不是突变基因的异常产物，表明肿瘤免疫在一定程度上也是一种自身免疫〔4〕。已有的实验证据表明，CD4+CD25+TrCs可以从多方面抑制自然免疫和适应性免疫，包括：①TrCs以接触依赖、抗原非特异的方式抑制CD4+和CD8+T细胞的增殖及分泌IL2;②通过下调MHCⅡ类分子、CD80、CD86在树突细胞的表达而影响抗原递呈;③阻碍高亲和力识别肿瘤的效应T细胞库的增殖以抑制肿瘤免疫;④抑制效应细胞进入肿瘤部位，体内实验表明，CD4+CD25+TrCs可抑制CD8+T细胞浸润进入肿瘤部位;⑤通过抑制CD8+T细胞、NK细胞和NKT细胞的细胞杀伤作用抑制肿瘤免疫〔5，6〕。最近研究显示在肿瘤发展过程中，CD4+CD25+TrCs和抗肿瘤效应性CD4+T细胞来源于相同的肿瘤引流淋巴结，前者通过抑制后者的活性而阻断肿瘤免疫反应。

　　本研究显示，老年PCa患者术前外周血T细胞比例失衡，CD4比例降低，CD4+CD25+调节性T细胞比例增加，与健康对照组比较差异有统计学显著意义，提示老年PCa患者存在免疫功能失调和不同程度的免疫抑制。患者术后CD4+CD25+TrCs比例比术前显著降低，提示肿瘤负荷的减轻有助于改善患者的免疫抑制状态。在人类健康个体的外周循环血中CD4+CD25+TrCs占总CD4+T细胞的5%～10%，而在乳腺癌、胰腺癌等肿瘤患者的外周血中，这种TrCs高达13.2%～16.6%，而且肿瘤恶性程度越高，CD4+CD25+TrCs比例越高，其预后也越差〔7〕。有研究报道肺癌患者外周血中CD4+CD25+TrCs的数量与病理类型无明显相关关系，但与肺癌分化程度和临床分期关系密切〔8〕。本研究表明，无论术前还是术后G3～4级患者外周血TrCs比例均高于G1～2级患者，提示外周血CD4+CD25+TrCs比例的增加与PCa的病理分级有一定关系。为了寻找更多的有力证据，可以进行大样本的进一步研究。各病理级别在术后CD4+CD25+TrCs都有所降低，但G3～4级与术前比较无统计学差异，考虑与纳入本研究的病例数较少有关。另外，延长观察时间或进行动态性观察，对了解老年PCa患者术后CD4+CD25+TrCs的变化规律和掌握机体的免疫状态可能有帮助。

　　【参考文献】

　　1 Sakaguchi S.Naturally arising Foxp3expressing CD25+CD4+ regulatory T cells in immunological tolerance to self and nonself〔J〕.Nat Immunol，2005;6(4):34552.

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　　3 Caramalho I，LopesCarvalho T，Ostler D,et al.Regulatory T cells selectively express tolllike receptors and are activated by lipopolysaccharide〔J〕.J Exp Med,2003;197(4):40311.

　　4 Sasada T，Kimura M，Yoshida Y，et al.CD4+CD25+ regulatory T cells in patients with gastrointestinal malignancies〔J〕.Cancer，2003;98(5):108999.

　　5 Hiura T，Kaqamu H，Miura S,et al.Both regulatory T cells and antitumor effector T cells are primed in the same draining lymph nodes during tumor progression〔J〕.J Immunol，2005;175(8):505866.

　　6 Linehan DC，Goedeqebuure PS.CD25+CD4+ regulatory Tcells in cancer〔J〕.Immunol Res，2005;32(13):15568.

　　7 Seo N，Hayakawa S，Takigawa M，et al.Interleukin10 expressed at early tumor sites induces subsequent generation of CD4+Tregulatory cells and systemic collapse of antitumour immunity〔J〕.Immunology，2001;103(4):44957.

　　8 刘顺民，吴昌归.肺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其临床意义〔J〕.第四军医大学学报，2006;27(10):9302.