共刺激分子B7-H1在肾透明细胞癌中的表达及意义
发表时间：2010-10-14 浏览次数：373次
作者：薛松，李望，温儒民，刘俊杰，李海龙 作者单位：徐州医学院附属医院泌尿外科，江苏徐州221002 江苏省自然科学基金(BK2009084)
【摘要】 目的 探讨共刺激分子B7-H1 在人透明细胞癌组织中的表达及其意义。方法 运用免疫组织化学ABC 法检测B7-H1在45例肾透明细胞癌组织中的表达， 并对其表达水平与临床病理参数之间的关系进行相关性分析。结果 B7-H1分子在肾透明细胞癌组织中的阳性表达显著高于癌旁正常肾组织(P<0. 05);B7-H1 在肾透明细胞癌组织中阳性表达率为68.9%，与患者性别、年龄无关(P>0. 05)，而与病理分级、临床分期及是否转移显著相关(P<0. 05)。 结论 B7-H1 在肾透明癌组织中高表达，可能在肿瘤的发生、发展中起到一定作用，有望成为肾透明细胞癌免疫治疗的一个新靶点。
【关键词】 B7-H1;肾透明细胞;免疫组织化学
Expression of co-stimulatory molecule B7-H1 in tissues of
patients with renal clear cell carcinoma
XUE Song, LI Wang, WEN Rumin, LIU Junjie, LI Hailong
(Department of Urology, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College, Xuzhou, Jiangsu 221002, China)
Abstract: Objective To investigate the expression of co-stimulatory molecule B7-H1 in human renal clear cell carcinoma (RCCC) and the relationship between its expression and the clinicopathological features. Methods Immunohistochemical staining was used to detect the expression of B7-H1 in 45 cases of RCCC tissues and 20 cases of normal renal tissues, and the correlation analysis was conducted on the relationship between its expression and the clinicopathological parameters. Results The results showed that the expression of B7-H1 in the RCCC tissues was significantly higher than that of normal renal tissues (P<0.05), and the expression proportion of B7-H1 was 68.9 % in RCCC, which was not correlated with the expression level of B7-H1 and the sex or age (P>0. 05), but significantly correlated with the clinical staging, pathological grade and metastases (P<0.05). Conclusion The overexpression of B7-H1 in RCCC might play a certain role in the pathogenesis of tumors, which might enable it to be a new target of immunotherapy of renal clear cell carcinoma.
Key words: B7-H1; renal clear cell carcinoma; immunohistochemistry已换
机体抗肿瘤免疫主要是细胞毒性T细胞(CTL)介导的细胞免疫发挥作用。T 细胞的活化依赖双信号的刺激：第一信号来自T 细胞受体( TCR) 与抗原提呈细胞(APC)上的抗原肽-主要组织相容性复合体(MHC) 分子复合物的相互作用;第二信号来自APC上的共刺激分子，T细胞上受体的相互作用。目前已知的共刺激分子根据其结构可分为2类：免疫球蛋白超家族(immuno-globulin superfamily， IgSF) 和肿瘤坏死因子受体(TNF-TNFR) 超家族。其中B7家族在IgSF 中占有十分重要的地位，是惟一能从APC单向传递信号至T细胞的共刺激分子。B7-H1 是新发现的B7家族成员之一。研究发现，B7-H1分子可在人类多种肿瘤组织中表达，促进效应性CTL的凋亡，参与肿瘤的免疫逃逸过程[1]。本研究应用新鲜冰冻切片免疫组织化学法检测B7-H1 在肾透明细胞癌(RCCC)组织和癌旁正常组织中的表达，并探讨该分子与肿瘤发生、发展及预后等方面的关系。
1 材料和方法
1.1 材料来源
冰冻切片来源于徐州医学院附属医院2007年4月至2008年12月根治性肾切除的肾癌标本45例。正常肾组织来源于肿瘤组织的癌旁部分。标本以赭曲霉毒素(OCT)化合物包埋固定，低温切片，进行细胞免疫化学染色(ABC法)染色。
1.2 主要试剂
鼠抗人B7-H1 单克隆抗体购自武汉博士徳生物技术公司。ABC即用型试剂盒、PBS缓冲液、柠檬酸盐缓冲液及DAB 显色剂，购自北京中杉金桥生物技术公司。
1.3 免疫组织化学法
按照北京中杉金桥生物技术有限公司ABC即用型试剂盒说明书进行。
1.4 阳性结果
细胞质或细胞膜出现黄至棕褐色颗粒为阳性显色，结合染色强度和阳性细胞百分比来评定阳性表达病例。光镜下每张切片中选取癌细胞较多的5 个高倍视野，每个视野计数100 个细胞。染色强度分级如下：着色(0分)，淡黄色(1 分)，棕黄色(2分)，棕褐色(3分);阳性细胞百分比分级为：无阳性细胞(0分)，阳性细胞数≤10%(1分)，11%～50%(2分)，51%～75%(3分)，>75%(4分)。2项得分相乘0～2为(-)，3～4为(+)，6～8为(++)，9～12为(+++)。
1.5 统计学处理
采用SPSS 13. 0 统计软件进行数据分析，χ2检验分析B7-H1 在不同癌旁肾组织中的表达以及在肾透明细胞癌组织中的表达与各临床病理参数之间的关系。不同病理和TNM分期之间B7-H1的表达采用列联表卡方检验分析和关联度测量(Chi-square and Ordinal′s Gamma)检验分析。以P<0.05为差异具有显著性。
2 结 果
2.1 B7-H1在肾透明细胞癌组织中的表达
B7-H1分子在肾透明细胞癌组织中呈阳性表达，其阳性表达率为68.9%(31/ 45)，主要位于细胞质内，少量在细胞膜上;而癌旁正常肾组织为阴性 (图1)。在20例癌旁正常肾组织肾透明细胞中，B7-H1呈阴性表达。图1 肾透明细胞组织免疫组织化学染色示B7-H1 的表达(ABC法，×400)
A,B.肾透明细胞癌组织B7-H1 阳性表达; C.肾透明细胞癌组织B7-H1阴性表达; D.正常肾组织B7-H1 阴性表达
2.2 B7-H1 的表达与临床病理的关系
见表1。表1 B7-H1的表达与RCCC临床病理特征的关系(略)
从表1可见，B7-H1 的阳性表达与肾透明细胞癌患者的性别和年龄均无关(P>0. 05);与病理分级、临床分期及有否转移密切相关，且随着病理分级、临床分期的增加，B7-H1的表达逐步上调。
3 讨 论
B7-H1是通过人类基因库进行B7-1 、B7-2 同源性分析时发现的。虽然B7-H1 mRNA 在许多组织中可以检测到,但B7-H1 蛋白的表达在正常组织中局限于巨噬系统来源的细胞[2]。许多肿瘤组织中都可检测到B7-H1 的表达[2-4]。
肾透明细胞癌(RCCC)是一类具有免疫原性的肿瘤。其含有大量浸润T细胞，却与癌症患者低生存率相矛盾[5]，与之并存的是，RCCC内TILs受损丧失了介导肿瘤消亡的能力[5-7]。这些现象强烈提示RCCC内含有一种自发的或者受免疫诱导的削弱抗癌免疫力的机制[7]。研究结果证明，至少在某种程度上，肿瘤B7-H1协助抑制了RCCC患者免疫反应。因此，对B7-H1 信号进行干预有望成为肿瘤免疫治疗的新途径。Brown 等[8]研究发现，在乳腺癌组织中正常细胞和恶变细胞都表达B7-H1分子，但肿瘤细胞的表达强度明显高于正常细胞。有研究[9]发现，抗B7-H1单抗能明显抑制B7-H1-P815荷瘤小鼠局部肿瘤的生长，并出现良好的缓解率。Thompson等[10]研究发现B7-H1不仅在RCCC中高表达而且与临床病理特征密切相关，在随访研究中发现肿瘤B7-H1高表达的RCCC患者死亡风险显著增加，这独立于目前的临床预测指标。再者，此风险与RCCC局部或远处转移相关，说明与手术预后有密切关联。
国外有研究证明RCCC石蜡切片标本B7-H1阳性表达率低于新鲜冰冻组织[11]，可能是因为新鲜组织较好地保持了抗原活性，抗原丢失少，尤其是表面抗原，而B7-H1是细胞表面糖蛋白;另外，新鲜组织细胞形态更接近真实情况，定位更准确。本研究中，我们应用新鲜冰冻切片免疫组化的方法检测了癌旁正常肾组织及RCCC组织中共刺激分子B7-H1蛋白的表达及分布，研究我国RCCC患者B7-H1的表达与国外是否存在差异。结果显示，在RCCC组织中确实存在B7-H1的高表达(阳性率68.9%)，癌旁正常肾组织中未见B7-H1表达，与癌旁正常肾组织比较有统计学意义(P<0.05)。在RCCC组织中B7-H1的表达与患者的性别、年龄无明显相关(P>0.05)，与病理分级、临床分期和有无转移显著相关(P<0.05)，且随着病理分级与临床分期的增高，B7-H1表达呈递增趋势。由于免疫组化用的是冰冻切片，标本无法长时间保存，无法进行长期随访，下一步我们打算寻找合适的方法对RCCC石蜡切片行抗原修复，对RCCC患者进行随访及回顾性研究，以了解B7-H1在我国RCCC患者中的预后价值。
以上实验结果表明，RCCC组织表达B7-H1 对机体的抗肿瘤免疫发挥抑制作用，参与免疫逃逸。由于肿瘤微环境等诸多因素共同影响着肿瘤细胞逃避机体免疫系统的攻击，因而深入研究B7-H1 参与肿瘤免疫逃逸的机制对肿瘤免疫治疗具有十分重要的指导意义，干预肿瘤细胞上B7-H1 的表达可能将成为肿瘤免疫治疗的新靶点。
【参考文献】
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