血小板反应素1在前列腺癌中的表达及与血管生成的关系

　　作者：牛文斌 王春玲 秦文波 罗振国 作者单位：佳木斯大学附属第一医院泌尿外科，黑龙江 佳木斯 154003

　　【摘要】 目的 探讨各级前列腺癌组织中血小板反应素1(TSP1)的表达及与微血管密度(MVD)的关系。方法 采用免疫组织化学(SP)法检测30例前列腺增生组织及26例前列腺癌癌组织中TSP1的表达情况及MVD。结果 前列腺增生组织及低分化前列腺癌癌组织中TSP1表达强度及MVD计数分别为(3.7±1.5)、(1.7±1.0)及(6.8±1.9)、(31.0±5.3)。TSP1主要在前列腺增生组织基底细胞层高表达，在前列腺癌组织中低表达并且明显低于前列腺增生组织(P<0.01)。MVD随着前列腺癌病变级别升高而增加，TSP1的表达与MVD 呈显著负相关(rs=-0.603,P<0.01)。结论 TSP1 低表达可能参与了前列腺癌血管生成过程,联合检测TSP1和MVD 可能在前列腺癌的早期筛查、诊断、治疗中具有一定意义。

　　【关键词】 血小板反应素1;微血管密度;前列腺癌

　　肿瘤血管生成受促血管生成因子和抑制因子的双重调节。血小板反应素1(thrombospondin1,TSP1)是一种细胞外基质糖蛋白,是血管生成抑制因子之一，与多种肿瘤血管生成关系密切。TSP1在前列腺癌(PCa)中的表达及其与PCa血管生成的相关性研究国内外未见报道。本研究采用免疫组化方法检测TSP1在前列腺增生、PCa中的表达及与微血管密度(MVD)的关系,探讨TSP1与PCa血管生成的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 组织标本

　　26例PCa手术切除标本和前列腺穿刺活检标本作为研究对象,年龄59～90岁,平均(69.2±6.6)岁。病理类型全部为腺癌。分化程度：高分化6例，中分化12例，低分化8例。临床分期：A期4例,B期6例，C期9例,D期7例。同时选取30例经病理切片证实的良性前列腺增生手术切除标本作为对照,年龄60～86岁,平均(62.7±8.9)岁。

　　1.2 主要试剂

　　鼠抗人TSP1单克隆抗体购于美国Neomarker公司;鼠抗人CD34单克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠免疫球蛋白IgG及SP试剂盒均购自北京中山生物技术公司。

　　1.3 实验方法

　　TSP1及CD34采用SP法染色,严格按产品说明书进行操作。主要试剂:浓缩型鼠抗人TSP1 Ab4单克隆抗体购于美国Neomarker公司,工作浓度为1∶100;即用型鼠抗人CD34单克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠免疫球蛋白IgG及SP试剂盒、DAB显色试剂盒均购自北京中山生物技术公司。

　　1.4 结果判定

　　(1)TSP1表达:细胞质呈现棕黄色染色,明显高于背景(或背景不着色而细胞着色)为阳性细胞。TSP1表达的判定以染色强度和阳性细胞百分率的得分之和进行评估,测定采用双盲法,2人阅片。每张切片高倍镜下随机观察4个高倍视野,阳性细胞百分数(0、～25%、～50%、>50%)及显色强度(未着色、弱、中、强)分别计为0、1、2、3分,取4次的平均值为最终判断结果。两项得分相加:0～2分定为阴性“-”,3～6 分定为阳性“ + ”。(2)MVD的测定:在低倍视野(100倍)下选取肿瘤微血管数量(CD34阳性)最丰富区域,然后在200倍视野范围下计数微血管数，取3个不同视野的均值。

　　1.5 统计学分析

　　采用SPSS12.0统计软件,组间差异采用单向方差分析检验,相关性分析采用Spearman检验。

　　2 结 果

　　2.1 PCa癌组织的MVD测定

　　以CD34 单抗作为特异性血管内皮细胞抗体检测MVD。CD34 染色阳性的微血管主要分布于上皮基底层下缘,靠近肿瘤边缘,并向肿瘤内生长。随PCa病变级别升高，MVD 逐渐增加,在低分化PCa升高明显。MVD值在前列腺增生组织、高分化、中分化及低分化癌组织中分别为(6.8±1.9)、(13.0±3.6)、(22.7±4.4)、(31.0±5.3),各组之间比较差异有统计学意义(P<0.05)。

　　2.2 TSP1在PCa中的表达

　　TSP1 主要表达于前列腺增生组织基底细胞层细胞质,呈强或中等程度棕黄色着色,围绕腺泡形成一个棕色条带。在PCa组织中，随着病变级别升高TSP1阳性表达逐渐减少,尤其是高分化PCa细胞的胞质着色明显减弱或无着色，TSP1低表达或不表达，TSP1阳性细胞条带缺失(见图1)。TSP1在前列腺增生组织、高分化、中分化和低分化PCa中表达强度分别为(3.7±1.5)、(3.0±1.4)、(1.9±1.2)、(1.7±1.0)，各组之间差异均有统计学意义(均P<0.01)。

　　2.3 TSP1与MVD的关系

　　Spearman 等级相关分析显示,PCa病变中TSP1的表达与MVD呈显著负相关(rs=-0.603,P<0.01)。

　　3 讨 论

　　若肿瘤早期血管不能形成，肿瘤则只能停留在几毫米直径的萌芽状态〔1〕。本研究结果表明,与前列腺增生组织相比,PCa中的确存在活跃的血管生成,且随着病理分期的增高,血管增生活跃,MVD值逐渐增高,说明MVD可以较好地反映PCa患者的病期进展。此结论与国内外文献报道一致〔2〕。提示MVD与PCa的临床分期和侵袭转移密切相关。

　　TSP1是一种细胞外基质糖蛋白〔3〕,是一种内源性的血管生成抑制因子，具有调节血小板聚集、细胞黏附、运动、生长的功能,能抑制血管内皮生长和运动,减少内皮细胞黏附和形成管状结构的能力,从而抑制血管生成及抑制肿瘤发生发展。TSP1 的抗血管生成活性已被许多体内外实验所证实〔4〕。目前认为TSP1可能通过以下途径抑制血管形成：①抑制内皮细胞增殖、迁移及管状结构形成;②诱导内皮细胞凋亡;③干扰血管生长因子bFGF和VEGF释放及与内皮细胞结合等。在生理条件下,TSP1对维持血管生成处于稳定状态至关重要。在肿瘤组织中,TSP1的表达分泌下降,促血管生成因子表达增高,因而肿瘤组织呈现显著的血管生成,使肿瘤的生长、发展加快,也使肿瘤发生血行转移的机会随之增加。研究表明在结肠癌、乳腺癌、肺癌、宫颈癌等多种肿瘤中,TSP1的表达降低或不表达〔5〕。本研究发现TSP1主要表达于前列腺增生组织基底细胞和间质中,而在PCa组织中表达降低或缺失。从前列腺增生→高分化PCa→中分化PCa→低分化PCa的演变过程中，TSP1的表达率逐渐减少。MVD随病变级别升高而增加,在PCa病变各组之间均有显著差异。TSP1的表达与MVD 呈明显负相关。笔者认为TSP1表达减少及新生血管生成在PCa发生早期已出现,已具有诱导新生血管形成的能力，TSP1在新生血管生成调节中起抑制血管生成的作用。因此TSP1的表达及MVD的测定可作为PCa病变发生发展程度的指标,为PCa抗新生血管生成治疗提供重要的理论依据。联合检测TSP1及MVD有利于PCa的早期诊断及早期治疗。

　　【参考文献】

　　1 陈春球.血小板反应素与消化道肿瘤〔J〕.同济大学学报(医学版)，2003;24(4):2924.

　　2 董济民，白加宁，和 平，等.非小细胞肺癌中血小板反应素1的表达和微血管密度的测定〔J〕.中华肿瘤杂志，2003;25(4):3801.

　　3 塔 拉，濮德敏，汪 晖，等.宫颈病变组织中血小板反应素1的表达及其与血管生成的关系〔J〕.华中科技大学学报(医学版)，2007;36(1):1179.

　　4 Cecilia A，Matthew F，Kevin R,et al.A novel approach to using matrix metalloproteinases for bladder cancer〔J〕. J Urol,2009;182(5):218894.

　　5 Dragomir PZ，Leif B，Bjrn K，et al.The expression of thrombospondin1 and p53 in clear cell renal cell carcinoma:its relationship to angiogenesis,cell proliferation and cancer specific survival〔J〕. J Urol，2009;182(5):21449.