联体共生诱导免疫耐受对大鼠肾功能的影响
发表时间：2010-06-04 浏览次数：391次
作者：张春阳，史其新，李晨光，张大田，姜华茂，万双艳 作者单位：(辽宁医学院附属第一医院泌尿外科，辽宁 锦州121001)
【摘要】 目的 建立异基因大鼠联体共生的动物模型，探讨诱导免疫耐受对其肾功能的影响。方法 对DA和LEW大鼠实施联体手术并诱导耐受，然后进行DA→LEW的肾移植。于术后6天后分别检测各组大鼠尿NAG酶活性、尿肌酐和尿白蛋白等指标。结果 联体共生诱导耐受可使DA→LEW的肾移植存活明显延长，耐受组尿NAG酶活性、尿白蛋白均低于排斥组(P<0.01)。结论 诱导免疫耐受可改善移植肾的功能。
【关键词】 移植;肾疾病;免疫耐受;动物;实验
The Effects of Recipient Kidney Function by Inducing Immune
Tolerance in Rats of Renal TransplantationZHANG Chunyang, SHI Qixin, LI Chenguang, ZHANG Datian,
JIANG Huamao, WAN Shuangyan
(Department of Urology, the First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University, Jinzhou121001 China)Abstract: Objective To establish rat models for studying recipient kidney function of renal allograft tolerance induced by parabiosis combined with cyclophosphamide on rats.Methods Renal transplantation tolerance was induced by parabiosis combined with cyclophosphamide, and the renal transplantation was performed on DA→LEW rats. The urinary NAG, ALB and Cr were measured 6 days after transplantation.Results Parabiosis combined with cyclophosphamide prolonged the survival of DA→LEW rat renal allografts obviously.Compared with the rejection group, the level of urinary NAG, ALB in tolerance group declined significantly.Conclusions
Inducing immune tolerance may improve the function of recipient kidney.
Key words: transplantation; kidney diseases; immune tolerance; animals; laboratory
人类在肝、肾移植后获得免疫耐受已经有连续报道，并引起移植界的高度重视[1，2]。我们通过联体前注射环磷酰胺处理联体大鼠，在MHC基因型完全不相容的成年大鼠DA与LEW之间建立了联体共生模型，诱导肾移植耐受，探讨诱导免疫耐受对其肾功能的影响。
1 材料与方法
1.1 实验动物
DA(RT1a)及LEW(RT11)大鼠(北京大学医学部实验动物部提供),8～12周龄,体重200～250 g。
1.2 主要试剂
肌苷试剂盒(上海长征-康仁医学科学有限公司);NAG试剂盒(购自蓝波生物制品公司); ALB试剂盒(购自福建太阳生物技术公司)。
1.3 耐受诱导方案及实验分组
DA及LEW大鼠于联体前6 d，环磷酰胺(Cp)100 mg/kg，单次腹腔注射后进行联体手术。联体10 d后再次腹腔注射Cp 1次，15 d分开，按以下3组进行肾移植手术，耐受组:DA→LEW肾脏移植;排斥组：未经处理的DA→LEW肾脏移植;对照组:LEW→LEW肾脏移植，每组7只。肾移植模型采用原位移植方式。用1%戊巴比妥钠进行麻醉。肾动脉吻合在手术显微镜放大15～20倍下进行，肾静脉吻合时模仿Cuff套管技术，分离切取供体输尿管时带一部分供体膀胱壁，与受体膀胱吻合。
1.4 移植肾脏功能和组织学检查
各组大鼠肾脏移植术前及术后6 d用无菌指套自制尿袋收集尿液，2 000转离心2 min，取上清液;全自动生化分析仪测NAG(速率法)、ALB(免疫浊度法)、及Cr(苦味酸法)值。术后第6 d随机取各组大鼠移植肾作组织学检查。
1.5 统计方法 各组数据以±s表示，组间比较采用F检验，以上统计学分析以SPSS11.5软件完成。
2 结 果
2.1 联体15 d分开后DA→LEW大鼠之间肾脏移植耐受情况
DA与LEW大鼠联体15 d时分开后，再行DA→LEW肾脏移植，可使肾脏移植物存活时间明显延长。在术后80 d内，7只进行肾移植的大鼠中有6只因移植肾功能丧失而死亡;其中1只存活超过80 d而无排斥迹象，平均存活时间为(72.6±7.9) d;而排斥组平均存活(7.5±0.5)d。显示耐受组肾移植物存活时间明显延长(P<0.01)。
2.2 耐受、排斥及对照组肾脏移植术后尿ALB/Cr和NAG/Cr的变化
和耐受组尿ALB/Cr、NAG/Cr测定值明显高于同基因对照组(P<0.05)。耐受组尿ALB/Cr、NAG/Cr测定值低于排斥组 (P<0.01)(见表1)。 表1 术后尿ALB/Cr和NAG/Cr的值与对照组比较，*表示P<0.01;与排斥组比较，△表示P<0.01
2.3 病理检查结果
耐受、排斥组的肾脏在光镜下皆可见肾间质可见炎性细胞浸润、水肿,细胞浸润程度呈加重趋势,细胞浸润以淋巴细胞为主,聚集在肾小管和毛细血管周围。肾小管上皮细胞肿胀。以排斥组明显。对照组偶见炎性细胞,且程度无差异,未见出血或坏死。
3 讨 论
近年来,免疫耐受研究取得了许多重要进展，用于诱导耐受的方法有多种，如照射后输注供体骨髓细胞，可获得移植物的长期存活，但照射预处理方法比较强烈，临床实体器官移植患者难以接受。抗淋巴细胞的单抗或多抗及环磷酰胺等免疫抑制剂，常被用于移植耐受诱导的研究[3-5]。本实验建立了联体共生模型，诱导肾移植耐受，使肾脏移植物存活时间进一步延长，且状态良好，肾功能改善。
LEW和DA大鼠联体15 d后分开，行肾移植，结果显示，LEW大鼠的肾脏移植耐受程度明显加强。ALB在生理条件下仅有少量被肾小球滤过，故尿内含量甚微，在肾小球受损后，尿内ALB含量增加。NAG在肾脏近曲小管中含量较高，在生理条件下尿内这两种酶活性较低，但在肾近曲小管破坏、细胞损伤时，释放入尿中，使尿内酶活性升高。以上二项指标与尿肌苷的比值可消除因尿样浓缩及稀释产生的影响。术后排斥组和耐受组术后6 d尿ALB/Cr、NAG/Cr的值较对照组显著增高，并且耐受组低于排斥组，提示诱导耐受能够改善移植肾的功能，病理改变也说明诱导免疫耐受可更好的保护移植肾。
本研究结果证明大鼠联体共生诱导的肾脏移植耐受的动物模型不但可以作为研究嵌合体与耐受关系的动物模型，而且也为临床多次输注供体特异的骨髓(或血)细胞诱导耐受提供了依据。虽然在哺乳动物及人类诱导移植耐受较大鼠困难，但亦为我们提供了一种有探索价值的移植耐受诱导方法。
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