非小细胞肺癌VEGFC和VEGFR3表达对淋巴管生成和淋巴转移的意义

作者:董绍安,徐平,赵景岚作者单位：青岛大学医学院第二附属医院胸外科， 山东 青岛 266042

    【摘要】  目的 探讨非小细胞肺癌组织血管内皮生长因子C（VEGFC）及VEGF受体3（VEGFR3）表达对淋巴管生成和淋巴转移意义。方法 用免疫组化方法检测62例非小细胞肺癌组织VEGFC和VEGFR3的表达情况。结果 非小细胞肺癌组织中，VEGFC阳性表达率为77.4%，有淋巴结转移组VEGFC阳性表达率显著高于无淋巴结转移组（χ2=7.33，P<0.05 ）。VEGFR3阳性表达率为74.4%，淋巴结转移组VEGFR3阳性微淋巴管数量明显多于无淋巴结转移组（t=11.18，P<0.05）。VEGFC表达强度越高，VEGFR3阳性微淋巴管数量越多，二者呈正相关（r=0.912，P<0.05）。结论 非小细胞肺癌组织中VEGFC的表达与VEGFR3阳性微淋巴管数量和淋巴结转移有关。

【关键词】  癌,非小细胞肺;血管内皮生长因子C;血管内皮生长因子受体3;淋巴管生成;淋巴转移

　　SIGNIFICANCE OF VEGFC AND VEGFR3 EXPRESSION ON LYMPHANGIOGENESIS AND LYMPHNODE METASTASIS IN NONSMALL CELL LUNG CANCER

　　DONG SHAOAN, XU PING, ZHAO JINGLAN

　　(Department of Thoracic Surgery, The Second Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266042, China);

　　［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the significance of VEGFC and VEGFR3 expression on lymphangiogensis and metastasis in nonsmall cell lung cancer.MethodsThe expression of VEGFC and VEGFR3 were detected by immunohistochemistry in 62 patients with nonsmall cell lung cancer.ResultsOf the 62, the positive rate of VEGFC and VEGFR3 was 77.4% and 74.4%, respectively. The positive VEGFC in the lymphnode metastasis group was significantly higher than that of nonmetastasis (χ2=7.33,P<0.05). The number of VEGFR3 positive lymphatic vessels was higher than that of the nonmetastasis (t=11.18,P<0.05). The more strength the expression of VEGFC was, the more number of VEGFR3 positive lymphatic vessels would be (r=0.912, P<0.05).ConclusionThe expression of VEGFC in NSLC is related with VEGFR3 positive lymphatic vessels and lymph node metastasis.

    ［KEY WORDS］Carcinoma, nonsmall cell lung; Vascular endothelial growth factor C; Vascular endothelial growth factor recptor3; Lymphangiogensis; Lymphatic metastasis

    肺癌的淋巴道转移是其常见的转移途径，伴有淋巴结转移的肺癌5年生存率明显低于无淋巴结转移者。血管内皮生长因子C（VEGFC）是血管内皮生长因子受体3（VEGFR3）的特异性配体，二者被认为是胚胎组织和成熟个体淋巴管生成功能的惟一调节因子，介导肿瘤淋巴管生成，与肿瘤转移有密切的关系。本文应用免疫组化的方法检测了62例非小细胞肺癌组织中VEGFC和VEGFR3的表达，探讨其与淋巴管生成和淋巴转移的关系。

　　1  材料和方法

　　1.1  标本来源

    选取1999～2004年在我院行肺癌切除，经病理证实的62例非小细胞肺癌的存档蜡块标本。病人术前均未经过放疗、化疗等治疗，其中男42例，女20例；年龄33～75岁，平均58.5岁。组织学分类：鳞癌34例，腺癌21例，大细胞癌7例。高分化28例，中分化11例，低分化23例。有淋巴结转移者39例，无淋巴结转移者23例。

　　1.2  免疫组化染色

    将组织蜡块按4 μm厚连续切片，分别作苏木精伊红和抗VEGFC及VEGFR3多克隆兔抗人浓缩抗体（北京中杉公司）免疫组化染色；DAB显色；SP法染色步骤按说明书进行。用已知阳性切片作阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

　　1.3  VEGFC免疫组化结果判断

    细胞质显示棕黄色颗粒为阳性着色。 按癌细胞免疫组化染色着色深浅计分:0分为无色,1分为淡黄色,2分为棕黄色,3分为棕褐色。按阳性细胞数7所占百分比计分:阴性为0分,阳性细胞数<10%为1分,阳性细胞数10%～50%为2分,阳性细胞数>50%为3分。染色强度与阳性细胞百分比的乘积:0～2分为（-）,3～4分为（+）,5～7分为（），8～9分为（）[1]。

　　1.4  VEGFR3阳性微淋巴管计数方法

    在低倍镜下寻找VEGFR3阳性脉管的密集区,即热点区,在热点区中选择10个400倍视野计VEGFR3阳性微淋巴管数,取其平均值，肿瘤区内单个或成丛的内皮细胞,不管成腔与否均视为微淋巴管,凡伴有肌层的脉管均不予计数。两名医师计数差10%以上者重新计数[2]。

　　1.5  统计学分析

    采用t检验、χ2检验、直线相关分析。

　　2  结 果

　　2.1  VEGFC阳性表达结果

    62例非小细胞肺癌组织中，VEGFC阳性表达48例，阳性表达率为77.4%，主要为细胞质着色。有淋巴结转移者VEGFC阳性表达率为89.7%（35/39），而无淋巴结转移病人的阳性表达率则为 43.3%（10/23），差异有显著意义（χ2=7.33，P<0.05）。高、中分化癌、低分化癌中VEGFC阳性表达率分别为74.4%、82.6%，二者之间差异无显著性（P>0.05）。见表1。表1  高中、低分化癌之间VEGFC表达的比较（略）

　　2.2  VEGFR3阳性表达结果

    62例非小细胞肺癌组织中，VEGFR3阳性表达51例，表达率为82.3%。微淋巴管主要分布在间质，癌巢浸润的周围缘最多；大多毛细血管不着色。高、中分化癌微淋巴管数为7.03±3.88，低分化癌微淋巴管数为 6.25±3.36，二者之间差异无显著性（P>0.05）。　 　　2.3  VEGFC及VEGFR3阳性表达与淋巴管生成和淋巴结转移的关系

    癌细胞VEGFC阳性程度存在一定差异,随着VEGFC表达强度增加，VEGFR3阳性微淋巴管数量增多。VEGFC表达呈-、+、及的分别为14、9、17及22例,  其VEGFR3阳性微淋巴管数分别为2.21±1.12、3.28±2.22、6.85±1.62及 10.48±2.91;除“-”和“+”之间差异无显著性外,其他二者之间差异均有统计学意义(F=23.3，q=2.9～3.6，P<0.05)。直线相关分析显示，VEGFC表达强度与VEGFR3阳性表达微淋巴管数之间呈正相关（r=0.912，P<0.01）。VEGFR3阳性微淋巴管数量在有淋巴结转移组病人高于无淋巴结转移组。淋巴结转移阳性者39例，VEGFC表达呈+～者35例，VEGFR3阳性表达微淋巴管数为8.29±3.45；淋巴结转移阴性者23例，VEGFC表达呈+～者13例，VEGFR3阳性表达微淋巴管数为3.87±2.81,二者差异有显著意义（t=11.18，P<0.05）。

　　3  讨论

    血管内皮生长因子家族是特异性地作用于脉管内皮细胞的生长因子,其中VEGFC主要是致淋巴管生成因子，它可以特异性地作用于淋巴管上皮上的VEGFR3,促进淋巴管上皮的增生。许多研究证明VEGFC在多种肿瘤细胞中有表达，其受体VEGFR3在胚胎发生的初始阶段存在于所有的内皮细胞,随后定位于小静脉和淋巴管,是成熟淋巴管内皮细胞的特异性标志物。在肿瘤组织中可见肿瘤周边的新生淋巴管、扩张的淋巴管、有癌栓的淋巴管的内皮细胞VEGFR3呈高表达,提示VEGFC/VEGFR3调控系统可调节肿瘤间质血管网的形成和淋巴管的生成[3,4]。本研究显示，癌组织VEGFC的阳性率为77.4%，癌组织中VEGFR3淋巴管的阳性率为72.6%，随着VEGFC表达强度的增加，VEGFR3阳性微淋巴管数量也增多。这与文献报道的VEGFC可上调VEGFR3的表达并呈正相关相一致[5]。

    肿瘤淋巴道转移是否与肿瘤组织中的新生淋巴管有关并不十分清楚。本研究显示，VEGFR3阳性微淋巴管数量在淋巴结转移组明显高于淋巴结未转移组，二者差异有显著意义。表明癌巢和间质内VEGFR3阳性微淋巴管数与非小细胞肺癌的淋巴结转移密切相关,VEGFR3阳性微淋巴管可能是肿瘤发生侵袭转移的主要通路。这可能是由于过度表达的VEGFC和VEGFR3结合后，导致内皮细胞增殖和新生淋巴管的形成，肿瘤组织中的淋巴管增多使癌细胞有更多的机会与淋巴管直接接触，进而侵袭淋巴管并形成转移。（下转第10页）（上接第7页）此外，由于淋巴管内皮细胞间缺乏紧密连接及其基底膜的不完整性,导致淋巴管通透性增高,癌细胞易通过其间隙进入淋巴管发生转移。

　　SAARISTO等[6]研究显示,VEGFR3阳性的淋巴管,其内皮细胞之间的连接可能因功能的需要而发生从复杂型向简单型的转化，当肿瘤间质液压升高时,促使淋巴管壁与其基质间的锚丝张力增加,从而使毛细淋巴管腔扩大,疏松了的内皮细胞连接被拉开,形成了开放的内皮通道,使肿瘤细胞随组织液一同经开放的内皮通道进入淋巴管,产生癌细胞的淋巴转移。

    VEGFC能促进VEGFR3阳性淋巴管形成及淋巴结转移，但VEGFC促进微淋巴管生成与肿瘤转移之间的分子联系尚未明确，一旦明确这一联系,就可以通过阻断VEGFC及VEGFR3的联系而阻断肿瘤的生长和转移，从而控制肿瘤淋巴结转移，并成为非小细胞肺癌治疗的新靶点。

【参考文献】  　　[1]TANG R F, ITAKURA J, AIKAWA T, et al. Overexpression of lymphangiogenic growth factor VEGFC in human pancreatic cancer[J]. Pancreas, 2001,22(3):285292.

　　[2]WEIDNER N, FOLKMAN J, POZZA F, et al. Tumorangiogenesis:a new significant and independent prognostic indicator in earlystage breast carcinoma[J]. J Natl Cancer Invst, 1992,84(24):18751886.

　　[3]JOUKOV V, SORSA T, KUMAR V, et al. Proteolytic processing regulates receptor specificity and activity of VEGFC[J]. EMBO J, 1997,16(13):38983911.

　　[4]JUSSILA L, ALITALO K. Vascular growth factors and lymphangiogenesis[J]. Physiol Rev, 2002,82(3):673700.

　　[5]王中亮,陈尧,梁传余,等. VEGFC和VFGFR3在喉鳞状细胞癌及转移淋巴结中的表达[J]. 临床耳鼻咽喉科杂志, 2004,18(11)：664666.

　　[6]SAARISTO A, PARTANEN T A, AROLA J, et al.Vascular endothelial growth factorC and its receptor VEGFR3 in the nasal mucosa and in nasopharyngeal tumors[J]. Am J Pathol, 2000,157(1):714.