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《胸外科学》

非小细胞肺癌中Elf1的表达及意义

发表时间:2009-06-29  浏览次数:652次

作者:孔丽君,项锋钢,杨东霞

作者单位:滨州医学院生物化学教研室,山东 烟台 264003

  【摘要】  目的 探讨转录因子Elf1在非小细胞肺癌中表达的意义。方法 收集72例非小细胞肺癌组织,应用组织芯片仪制备组织芯片,采用免疫组化PowerVisionTM9000(PV9000)法对其进行Elf1标记,并分析Elf1的表达与临床病理因素之间的关系。结果 Elf1阳性染色定位于肺癌细胞胞核及胞质。在72例非小细胞肺癌组织中,Elf1阳性表达53例(73.61%),其表达强度与非小细胞肺癌的分化程度有关(χ2 =8.274,P<0.05);不同临床分期的非小细胞肺癌组织中Elf1表达强度差异有显著性(χ2=-4.556~-2.501,P<0.01);Elf1表达强度在淋巴结有转移组显著高于淋巴结无转移组(Z=-3.316,P<0.01);Elf1的表达强度与病人的年龄、性别、原发瘤大小及组织病理学类型均无关(P>0.05)。结论 Elf1在非小细胞肺癌的发生过程中有一定的作用,可能成为判定非小细胞肺癌恶性程度、评估其侵袭性及转移性的重要指标。

【关键词】  癌,非小细胞肺;膜附着型配体A2;蛋白质阵列分析;免疫组织化学

  THE EXPRESSION OF Elf1 AND ITS SIGNIFICANCE IN NONSMALLCELL LUNG CANCERKONG   LIJUN, XIANG FENGGANG, YANG DONGXIA

  (Department of Biochemistry, Binzhou Medical College, Yantai 264003, China );

  [ABSTRACT]ObjectiveTo study the expression of Elf1 in nonsmall cell lung cancer (NSCLC) and its clinical significance.MethodsTissue microarray from 72 cases of NSCLC was constructed. The expression of Elf1 was detected by immunohistochemistry staining with PV9000 method.ResultsElf1 was mostly expressed in nucleus and in cytoplasm. Positive Elf1 was observed in 53 cases (73.61%), its intensity of expression was related to the differentiation of the cancer (χ2=8.274,P<0.05), and significant differences were noted between different clinical stages (χ2=-4.556--2.501,P<0.01). The intensity of Elf1 expression was significantly higher in the group with lymph node metastasis than that without (Z=-3.316,P<0.01), but it was not related to age, gender, tumor size and histological type (P>0.05).ConclusionElf1 may play a role in NSCLC, and may serve as an important parameter for evaluating its malignancy, invasion and metastasis.

    [KEY WORDS]Carcinoma, nonsmall cell lung; EphrinA2; Protein array analysis; Immunohistochemistry

    Elf1是原癌基因Ets转录家族的成员之一,其最早是从人类T细胞文库中通过用编码人类Ets1cDNA的DNA结合域探针杂交获得的[1]。 Ets转录因子家族包括30多个成员,具有复杂的结构和功能,其主要通过调节细胞的增殖、分化、凋亡及细胞与细胞间的相互作用,在许多生理和病理过程中发挥重要的调控作用。本研究建立了含有72例人非小细胞肺癌(NSCLC)标本的组织芯片,采用免疫组化PowerVisionTM9000(PV9000)法检测Elf1的表达,探讨其与NSCLC的组织学分级、淋巴结转移、临床分期等的关系。

  1  材料与方法

  1.1  标本及其来源

    收集青岛大学医学院附属医院2003~2005年间手术切除并经病理证实的NSCLC标本72例(术前均未行放、化疗)。均经40 g/L中性甲醛固定,常规石蜡包埋,4 μm厚连续切片,苏木精伊红染色后复核病理诊断并按WHO标准分型、分级。72例病人中男59例,女13例;年龄39~76岁,≤55岁者27例,>55岁者45例,平均57.5岁。鳞癌30例(Ⅰ级5例,Ⅱ级13例,Ⅲ级12例),腺癌42例(Ⅰ级11例,Ⅱ级13例,Ⅲ级18例)。肿瘤直径≤5 cm者50例, > 5 cm者22例。所有病例均有淋巴结情况记录,其中有转移者39例,无转移者33例。按1997年肺癌国际分期修正系统进行临床分期:Ⅰ期29例,Ⅱ期19例,Ⅲ期24例。

  1.2  主要试剂

    兔抗人Elf1试剂购自美国Santa Cruz 公司;PowerVisionTM9000试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。

  1.3  检测方法

  1.3.1  组织芯片的设计及制备

  将组织芯片(癌典型区域)的直径定为2 mm,同时根据收集的标本例数(72例)将其设计为两个组织阵列(N1和N2),并且为了便于确定芯片的阵列顺序在每一个蜡块的起始位置各放置1例人肾组织作为标记(Marker)。两个蜡块阵列设计均为6行×8列,分别包含48和26个组织芯,组织芯之间的间距为1 mm。N1包含1例Marker 和47例NSCLC组织,N2包含1例Marker和25例NSCLC组织。应用组织芯片制作仪制备48(6×8)点阵列的NSCLC组织芯片蜡块2个,即由72例NSCLC标本组成的组织芯片一套。

  1.3.2  PV9000免疫组化检测方法

  石蜡切片脱蜡,系列乙醇水化至蒸馏水;体积分数0.03过氧化氢灭活内源性过氧化物酶,微波修复,1∶100兔抗人Elf1抗体依次滴加试剂Ⅱ、Ⅲ孵育, DAB显色,镜下观察,自来水终止显色。Mayer苏木精复染,中性树胶封片。阴性对照省略Ⅰ抗,以PBS代替;阳性对照用已知阳性片按上述步骤操作。

  1.4  结果判定

    以肺癌细胞核及胞质内呈棕黄色颗粒状着色为Elf1表达阳性;每张切片随机选取10个高倍(400倍)视野,每个高倍视野计数100个癌细胞,观察阳性细胞染色强度,并计数阳性细胞。首先按染色强度计分:无染色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,深棕黄或棕褐色为3分。再按阳性细胞百分率计分:≤5%为0分;6%~30%为1分;31%~70%为2分;≥71%为3分。以阳性细胞百分率计分和强度计分相加所得总分进行结果判断, 0分为阴性(-),1~2分为弱阳性(+),3~4分为中阳性(),5~6分为强阳性()。

  2  结 果

  2.1  组织芯片质量

    组织芯片排列整齐,无缺损现象,苏木精伊红染色的组织点阵排列整齐。

  2.2  Elf1在NSCLC中的表达

    Elf1在细胞阳性染色为棕黄色,颗粒状,定位于NSCLC细胞核及胞质。Elf1在72例NSCLC中,19例表达为(-),25例为(+),19例为(),9例为()。Elf1阳性表达率为73.61%。

  2.3  Elf1表达与NSCLC病人临床病理特征间的关系

    不同组织学分级的NSCLC组织中Elf1的表达强度差异有显著性(χ2=8.274,P<0.05)。其中Ⅰ、Ⅱ级,Ⅰ、Ⅲ级间比较差异有显著性(P=0.046、0.013),而Ⅱ、Ⅲ级间差异无显著性(P=0.299)。Elf1的表达增强与NSCLC易发生淋巴结转移有关,淋巴结有转移组Elf1的表达强度显著高于淋巴结无转移组(Z=-3.316,P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期NSCLC组织中Elf1的表达强度差异有显著性(χ2=-4.556~-2.501,P<0.01)。 Elf1的表达与病人的年龄、性别、原发瘤大小及组织病理学类型均无关。见表1。表1  Elf1在NSCLC中的表达与病人临床病理特征间的关系(略)

  3  讨论

    组织芯片技术又称组织微阵列(TMA),是近年来发展起来的以形态学为基础的分子生物学新技术,是在一张切片上高通量获取组织学、基因和蛋白表达信息的新方法。SCHRAML等曾在一张切片上完成了来自人体的17类397例不同组织学类型肿瘤3个基因扩增的FISH检测。目前国内已有应用TMA对前列腺癌、乳癌、食管癌、结直肠癌等不同肿瘤进行研究的报道,也无不体现出它平行、高效、节约病理资源的特点[2]。TMA与传统的病理学技术、组织化学及免疫组织化学技术相结合,具有广阔的应用前景。本实验应用组织芯片技术检测72例NSCLC组织中Elf1的表达水平,以阐明其可能的病理作用。

    Elf1具有复杂的结构和功能,其活性是通过与Rb蛋白结合的相互作用来调控,并且这种相互作用反过来能调控细胞周期依赖方式,Elf1可能是一个在特定细胞周期基因表达中的重要调控因子[3],通过调节尿苷酰基磷酸腺苷uPA和Tie2启动子基因在肿瘤浸润和血管生成发育过程中起重要作用。研究表明,Elf1在子宫内膜癌组织中、前列腺癌组织中均有表达,而在正常组织和成人分化组织中并不表达或低表达[3,4]。目前,对Elf1在恶性肿瘤中的表达情况研究较少,但对Elf1所在的Ets家族及其中的其他成员研究较多[5~7]。本研究结果显示,在NSCLC组织中Elf1主要表达于细胞核,较少见于细胞质。Elf1的阳性表达率为73.61%,其异常表达与NSCLC的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。因此推测,Elf1的表达可能与肿瘤的生物学行为有关,Elf1在NSCLC细胞的增殖、演进过程中具有一定的作用,它的存在可能成为侵袭性肿瘤的一种新的标记物。

但是实验没有与别的肿瘤标记物相比,不能得出Elf1染色是最好的检测方法。还因为短期的随访和病人数量有限,本实验也未能揭示Elf1表达的高低与病人预后、生存率的关系,实验将继续进行相关的研究,希望进一步在长时间的随访和大量病人身上得出结果,证明对Elf1表达的分析能成为一个有用的诊断标记物和一个重要的预后指标。

【参考文献】    [1]THOMPSON C C, BROWN T A, M C KNIGHT S L. Convergence of Ets and notchrelated structural motifs in a heteromeric DNA binding complex[J]. Science, 1991,253:762768.

  [2]江晨,崔琳,纪萍,等. 胃癌组织中HGF/cMet的组织芯片检测及其与肿瘤血管生成关系[J]. 齐鲁医学杂志, 2005,20(3):211213.

  [3]TAKAI N.Clinical relevance of Elf1 overexpression in endometrial carcinoma[J]. Gynecologic Oncology, 2003,89:408413.

  [4]CROWE D L, SHULER G F. Regulation of tumor cell invasion by extracellular matrix[J]. Histopathol, 1999,14(2):665671.

  [5]SMENTCHENKO V I, WATSON D K. Ets target genes: past, present and future[J]. Oncogene, 2000,19:65336548.

  [6]MAROULAKOIL I G, BOWE D B. Expression and function of Ets transcriptiion factors in mammalian development:a regulatory network[J]. Oncogene, 2000,19:64326442.

  [7]张健,高福禄,刘芝华. Ets转录因子家族在发育和肿瘤中作用的研究[J]. 世界华人消化杂志, 2003,11(10):16241627.

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