非小细胞肺癌中Elf1的表达及意义
发表时间:2009-06-29 浏览次数:652次
作者:孔丽君,项锋钢,杨东霞
作者单位:滨州医学院生物化学教研室,山东 烟台 264003
【摘要】 目的 探讨转录因子Elf1在非小细胞肺癌中表达的意义。方法 收集72例非小细胞肺癌组织,应用组织芯片仪制备组织芯片,采用免疫组化PowerVisionTM9000(PV9000)法对其进行Elf1标记,并分析Elf1的表达与临床病理因素之间的关系。结果 Elf1阳性染色定位于肺癌细胞胞核及胞质。在72例非小细胞肺癌组织中,Elf1阳性表达53例(73.61%),其表达强度与非小细胞肺癌的分化程度有关(χ2 =8.274,P<0.05);不同临床分期的非小细胞肺癌组织中Elf1表达强度差异有显著性(χ2=-4.556~-2.501,P<0.01);Elf1表达强度在淋巴结有转移组显著高于淋巴结无转移组(Z=-3.316,P<0.01);Elf1的表达强度与病人的年龄、性别、原发瘤大小及组织病理学类型均无关(P>0.05)。结论 Elf1在非小细胞肺癌的发生过程中有一定的作用,可能成为判定非小细胞肺癌恶性程度、评估其侵袭性及转移性的重要指标。
【关键词】 癌,非小细胞肺;膜附着型配体A2;蛋白质阵列分析;免疫组织化学
THE EXPRESSION OF Elf1 AND ITS SIGNIFICANCE IN NONSMALLCELL LUNG CANCERKONG LIJUN, XIANG FENGGANG, YANG DONGXIA
(Department of Biochemistry, Binzhou Medical College, Yantai 264003, China );
[ABSTRACT]ObjectiveTo study the expression of Elf1 in nonsmall cell lung cancer (NSCLC) and its clinical significance.MethodsTissue microarray from 72 cases of NSCLC was constructed. The expression of Elf1 was detected by immunohistochemistry staining with PV9000 method.ResultsElf1 was mostly expressed in nucleus and in cytoplasm. Positive Elf1 was observed in 53 cases (73.61%), its intensity of expression was related to the differentiation of the cancer (χ2=8.274,P<0.05), and significant differences were noted between different clinical stages (χ2=-4.556--2.501,P<0.01). The intensity of Elf1 expression was significantly higher in the group with lymph node metastasis than that without (Z=-3.316,P<0.01), but it was not related to age, gender, tumor size and histological type (P>0.05).ConclusionElf1 may play a role in NSCLC, and may serve as an important parameter for evaluating its malignancy, invasion and metastasis.
[KEY WORDS]Carcinoma, nonsmall cell lung; EphrinA2; Protein array analysis; Immunohistochemistry
Elf1是原癌基因Ets转录家族的成员之一,其最早是从人类T细胞文库中通过用编码人类Ets1cDNA的DNA结合域探针杂交获得的[1]。 Ets转录因子家族包括30多个成员,具有复杂的结构和功能,其主要通过调节细胞的增殖、分化、凋亡及细胞与细胞间的相互作用,在许多生理和病理过程中发挥重要的调控作用。本研究建立了含有72例人非小细胞肺癌(NSCLC)标本的组织芯片,采用免疫组化PowerVisionTM9000(PV9000)法检测Elf1的表达,探讨其与NSCLC的组织学分级、淋巴结转移、临床分期等的关系。
1 材料与方法
1.1 标本及其来源
收集青岛大学医学院附属医院2003~2005年间手术切除并经病理证实的NSCLC标本72例(术前均未行放、化疗)。均经40 g/L中性甲醛固定,常规石蜡包埋,4 μm厚连续切片,苏木精伊红染色后复核病理诊断并按WHO标准分型、分级。72例病人中男59例,女13例;年龄39~76岁,≤55岁者27例,>55岁者45例,平均57.5岁。鳞癌30例(Ⅰ级5例,Ⅱ级13例,Ⅲ级12例),腺癌42例(Ⅰ级11例,Ⅱ级13例,Ⅲ级18例)。肿瘤直径≤5 cm者50例, > 5 cm者22例。所有病例均有淋巴结情况记录,其中有转移者39例,无转移者33例。按1997年肺癌国际分期修正系统进行临床分期:Ⅰ期29例,Ⅱ期19例,Ⅲ期24例。
1.2 主要试剂
兔抗人Elf1试剂购自美国Santa Cruz 公司;PowerVisionTM9000试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。
1.3 检测方法
1.3.1 组织芯片的设计及制备
将组织芯片(癌典型区域)的直径定为2 mm,同时根据收集的标本例数(72例)将其设计为两个组织阵列(N1和N2),并且为了便于确定芯片的阵列顺序在每一个蜡块的起始位置各放置1例人肾组织作为标记(Marker)。两个蜡块阵列设计均为6行×8列,分别包含48和26个组织芯,组织芯之间的间距为1 mm。N1包含1例Marker 和47例NSCLC组织,N2包含1例Marker和25例NSCLC组织。应用组织芯片制作仪制备48(6×8)点阵列的NSCLC组织芯片蜡块2个,即由72例NSCLC标本组成的组织芯片一套。
1.3.2 PV9000免疫组化检测方法
石蜡切片脱蜡,系列乙醇水化至蒸馏水;体积分数0.03过氧化氢灭活内源性过氧化物酶,微波修复,1∶100兔抗人Elf1抗体依次滴加试剂Ⅱ、Ⅲ孵育, DAB显色,镜下观察,自来水终止显色。Mayer苏木精复染,中性树胶封片。阴性对照省略Ⅰ抗,以PBS代替;阳性对照用已知阳性片按上述步骤操作。
1.4 结果判定
以肺癌细胞核及胞质内呈棕黄色颗粒状着色为Elf1表达阳性;每张切片随机选取10个高倍(400倍)视野,每个高倍视野计数100个癌细胞,观察阳性细胞染色强度,并计数阳性细胞。首先按染色强度计分:无染色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,深棕黄或棕褐色为3分。再按阳性细胞百分率计分:≤5%为0分;6%~30%为1分;31%~70%为2分;≥71%为3分。以阳性细胞百分率计分和强度计分相加所得总分进行结果判断, 0分为阴性(-),1~2分为弱阳性(+),3~4分为中阳性(),5~6分为强阳性()。
2 结 果
2.1 组织芯片质量
组织芯片排列整齐,无缺损现象,苏木精伊红染色的组织点阵排列整齐。
2.2 Elf1在NSCLC中的表达
Elf1在细胞阳性染色为棕黄色,颗粒状,定位于NSCLC细胞核及胞质。Elf1在72例NSCLC中,19例表达为(-),25例为(+),19例为(),9例为()。Elf1阳性表达率为73.61%。
2.3 Elf1表达与NSCLC病人临床病理特征间的关系
不同组织学分级的NSCLC组织中Elf1的表达强度差异有显著性(χ2=8.274,P<0.05)。其中Ⅰ、Ⅱ级,Ⅰ、Ⅲ级间比较差异有显著性(P=0.046、0.013),而Ⅱ、Ⅲ级间差异无显著性(P=0.299)。Elf1的表达增强与NSCLC易发生淋巴结转移有关,淋巴结有转移组Elf1的表达强度显著高于淋巴结无转移组(Z=-3.316,P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期NSCLC组织中Elf1的表达强度差异有显著性(χ2=-4.556~-2.501,P<0.01)。 Elf1的表达与病人的年龄、性别、原发瘤大小及组织病理学类型均无关。见表1。表1 Elf1在NSCLC中的表达与病人临床病理特征间的关系(略)
3 讨论
组织芯片技术又称组织微阵列(TMA),是近年来发展起来的以形态学为基础的分子生物学新技术,是在一张切片上高通量获取组织学、基因和蛋白表达信息的新方法。SCHRAML等曾在一张切片上完成了来自人体的17类397例不同组织学类型肿瘤3个基因扩增的FISH检测。目前国内已有应用TMA对前列腺癌、乳癌、食管癌、结直肠癌等不同肿瘤进行研究的报道,也无不体现出它平行、高效、节约病理资源的特点[2]。TMA与传统的病理学技术、组织化学及免疫组织化学技术相结合,具有广阔的应用前景。本实验应用组织芯片技术检测72例NSCLC组织中Elf1的表达水平,以阐明其可能的病理作用。
Elf1具有复杂的结构和功能,其活性是通过与Rb蛋白结合的相互作用来调控,并且这种相互作用反过来能调控细胞周期依赖方式,Elf1可能是一个在特定细胞周期基因表达中的重要调控因子[3],通过调节尿苷酰基磷酸腺苷uPA和Tie2启动子基因在肿瘤浸润和血管生成发育过程中起重要作用。研究表明,Elf1在子宫内膜癌组织中、前列腺癌组织中均有表达,而在正常组织和成人分化组织中并不表达或低表达[3,4]。目前,对Elf1在恶性肿瘤中的表达情况研究较少,但对Elf1所在的Ets家族及其中的其他成员研究较多[5~7]。本研究结果显示,在NSCLC组织中Elf1主要表达于细胞核,较少见于细胞质。Elf1的阳性表达率为73.61%,其异常表达与NSCLC的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。因此推测,Elf1的表达可能与肿瘤的生物学行为有关,Elf1在NSCLC细胞的增殖、演进过程中具有一定的作用,它的存在可能成为侵袭性肿瘤的一种新的标记物。
但是实验没有与别的肿瘤标记物相比,不能得出Elf1染色是最好的检测方法。还因为短期的随访和病人数量有限,本实验也未能揭示Elf1表达的高低与病人预后、生存率的关系,实验将继续进行相关的研究,希望进一步在长时间的随访和大量病人身上得出结果,证明对Elf1表达的分析能成为一个有用的诊断标记物和一个重要的预后指标。
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