肺癌中血管内皮生长因子的表达及其与血管密度的关系

作者：盛辉 苑春莉 王医术 张丽红 王心蕊    作者单位：吉林大学第一医院，吉林 长春 130021 　　【摘要】 目的 研究各种类型肺癌中血管内皮生长因子（VEGF）的表达和病灶局部微血管密度(MVD)。 方法 应用免疫组化法对非小细胞肺癌、小细胞肺癌及其癌旁组织和正常肺组织进行VEGF和MVD(Ⅷ因子)的检测。结果 VEGF在鳞癌、腺癌、小细胞癌和癌旁肺组织中均有不同程度的表达，VEGF在中、低分化程度肺癌中的表达程度高于高分化肺癌，在伴有淋巴结转移的肺癌组织中的表达较强。不同分化程度的肺癌组织中MVD呈上升趋势，分化程度低，血管密度高；伴有淋巴结转移，血管密度高。VEGF表达强度与肺癌的MVD值密切相关，随VEGF表达强度增高，MVD值亦显著增高。结论 VEGF在不同类型肺癌中有表达，与MVD和肺癌的发生、发展、转移关系密切，可作为肺癌的预后指标。

　　【关键词】  肺癌　血管内皮生长因子　微血管密度　免疫组化

　　血管内皮生长因子(VEGF)是一种对血管生长有强力诱导作用，特异性作用于血管内皮的生长因子，在肿瘤血管生成中有重要作用。本研究的目的是揭示VEGF在肺癌中的分布及其与微血管密度（MVD）的关系，为针对肺癌血管新生的治疗奠定基础〔1〕。

　　1  资料与方法

　　1.1  对象

　　选择2001年9月～2003年12月在吉林大学第一医院和吉林省肿瘤医院因（原发性）肺癌住院行手术切除病人共90例，患者年龄41～78岁，平均年龄（61.5±12.3）岁，术后病理证实其中非小细胞肺癌（NSCLC）82例，包括鳞状上皮细胞癌48例，腺癌34例；小细胞肺癌（SCLC）8例。同时取其中40例的癌旁组织标本和10例正常肺组织标本作为对照。所有标本经福尔马林固定，常规石蜡包埋制成蜡块保存备用。

　　1.2  免疫组化方法

　　抗VEGF抗体，抗Ⅷ因子抗体，SP超敏法试剂盒，DAB显色试剂盒，购自福建迈新试剂公司。采用免疫组化常规方法进行染色。

　　1.3  结果判定  　　VEGF和Ⅷ因子染色的判定是以细胞膜和细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性。VEGF染色先在低倍视野内(100×)找到观察部位，然后在高倍视野内(400×)每张玻片选取5个视野，每个视野观察1 000个细胞，染色阳性细胞数＜20%为，20%～50%为+，50%～70%为，＞70%为。MVD系由Ⅷ因子染色计数每高倍视野下血管环的条数，所有的单个细胞或细胞团，只要与周围组织分离清楚，不管有没有管腔形成，都认为是1个可计数的微血管。所有计量数据均由2名病理医生采用双盲法(独立检测)进行检测。

　　1.4  统计学方法

　　应用χ2检验和t检验。

　　2  结  果

　　2.1  肺癌中VEGF和Ⅷ因子的免疫组化染色结果

　　组织中VEGF表达阳性为棕黄色颗粒，分布于细胞浆，呈弥漫性分布，偶见周围结缔组织及血管内皮细胞呈阳性染色。VEGF在鳞癌、腺癌、小细胞癌、癌旁肺组织和正常肺组织中均有不同程度的表达。VEGF在腺癌中的表达最强，在鳞癌、小细胞癌和癌周肺组织中的表达较弱，在正常肺组织中的表达最弱。Ⅷ因子染色局限于血管内皮细胞细胞膜，形成血管纵切面条形、横切面环形的棕色染色带。结果90例患者中平均MVD为24.48±9.49个/高倍视野，最高达54个/高倍视野。见表1。表1  VEGF在肺癌和癌旁组织中的表达（略）

　　2.2  VEGF和Ⅷ因子在不同分化程度、有无淋巴结转移肺癌组织中的表达

　　见表2。VEGF在中、低分化程度肺癌中的表达程度高于高分化肺癌。VEGF的表达程度在伴有淋巴结转移的肺癌组织中的表达较强。不同分化程度的肺癌组织中MVD呈上升趋势，分化程度低，血管密度高。伴有淋巴结转移，血管密度高。表2  VEGF在不同临床特征肺癌组织中的表达（略）

　　2.3  VEGF表达与MVD的相关性

　　肺癌患者组织标本MVD的均值为24.48个/高倍视野，以此均值为划分界限，以MVD＜24.48个/高倍视野为低MVD组，以MVD≥24.48个/高倍视野为高MVD组。VEGF的表达程度以-～+为低表达，以～为高表达，进行χ2检验，发现VEGF表达程度与MVD正相关（见表3）。表3  VEGF表达与MVD的相关性（略）

　　3  讨  论

　　肿瘤的生长和转移依赖于血管新生，血管新生是一个复杂的过程，涉及内皮细胞分裂，血管基底膜及血管周围基质选择性降解和内皮细胞趋化移动等步骤。在众多的血管生成因子中，VEGF是最强的血管生成因子〔2〕。VEGF是一种高度特异的血管内皮细胞（EC）有丝分裂原，通过与血管EC上的受体结合，促进EC分裂、趋化，从而刺激血管生成，但对血管EC以外的其他细胞无促分裂作用；VEGF通过增加EC内的囊泡小体（vascularvacuolar organelle， VVO）的功能使血管通透性增加〔3〕，血管通透性的增加，一方面导致癌性腹水和间质水肿，另一方面使管内纤维蛋白原等血浆蛋白外渗，纤维蛋白原与管外的纤维连接素等多种成分凝结形成交错的纤维蛋白胶滞体，不仅为内皮细胞、成纤维细胞迁移、新生毛细血管网的建立提供必要的基质，也是肿瘤细胞生长的良好基质。由于肿瘤细胞自身不能产生纤维蛋白原，VEGF引起的血管通透性的提高，对肿瘤的血管新生就显得尤为重要 ；VEGF诱导血管内皮细胞产生的间质胶原酶、纤溶酶原激活物，不仅满足血管新生对基质降解的要求，而且也有助于瘤细胞从肿瘤组织的脱落；VEGF还改变内皮细胞基因的活化形式；VEGF抑制内皮细胞调亡。VEGF及其家族成员在许多生理和病理的血管生成中都是必不可少的诱导因子，尤其在肿瘤血管生成的过程中〔4〕。

　　VEGF可在很多正常人和动物组织中表达，但一般水平较低。一些代谢旺盛、血供丰富的组织VEGF的表达常高于其他组织。在病理条件下，特别是在多数实体瘤细胞中，VEGF无论是在mRNA水平还是在蛋白质水平均有过量表达。如脑肿瘤、乳腺癌、肺癌、肾癌、胃癌组织中均有VEGF高度表达〔4，5〕。我们研究了VEGF在肺癌组织中的表达，发现VEGF在鳞癌、腺癌、小细胞癌、癌旁肺组织和正常肺组织中均有不同程度的表达。VEGF在腺癌中的表达最强，在鳞癌、小细胞癌和癌周肺组织中的表达较弱，在正常肺组织中的表达最弱。说明肺癌的生长也是一种依赖于血管新生的过程，局部的VEGF表达水平高，血管生长快，组织生长旺盛是肺癌生长的特性。

　　MVD是指某一特定区域可以观察到的微小血管的数目。MVD不仅反映肿瘤细胞的营养和供氧状况，而且与肿瘤的浸润和转移能力有关〔6〕。MVD是一个独立的、相关性好的指标，它不受临床分期、病理类型和肿瘤细胞分化程度等因素的干扰，可以用于评估癌症患者的疗效，推测预后。我们的研究发现，不同分化程度的肺癌组织中MVD呈上升趋势，分化程度低，血管密度高。伴有淋巴结转移，血管密度高。比较不同血管密度的病灶中的VEGF水平，发现VEGF表达程度与MVD正相关，验证了VEGF促进血管新生的作用，而且在恶性程度越高的病灶中VEGF越高，VEGF和MVD可以用来估计肺癌的预后。

　　近年研究发现，培哚普利、善得定、紫杉醇等药物均通过干预VEGF mRNA和蛋白产生抑制肿瘤血管形成。与传统的抗癌治疗不同，现代血管抑制策略有很多优点。内皮细胞与肿瘤细胞不同，更容易受到血液中药物的影响，作为一种相对稳定的细胞，不易对血管抑制药物产生耐药性；而且，肿瘤血管内皮细胞比正常血管内皮细胞分化差，增殖活跃，使得血管抑制药物更具有特异性。进一步研究VEGF在肿瘤生长中的作用，寻求新的抗肿瘤治疗策略，具有重要的临床意义〔6〕。

【参考文献】　　1 赵 维，张录民，刘国津.p16和VEGF在老年肺癌组织中的表达及临床意义〔J〕.中国老年学杂志，2006；26（1）：413.

　　2 温剑虎，朱 冰.VEGF在非小细胞肺癌中表达与血管生成关系及临床意义〔J〕.免疫学杂志，2002；18（4）：2968.

　　3 Herbst RS，Onn A，Sandler A.Angiogenesis and lung cancer：prognostic and therapeutic implications〔J〕.J Clin Oncol.2005；23(14)：324356.

　　4 Tateishi U.Vascular endothelial growth factorrelated angiogenesis〔J〕.Radiology，2005；235(3)：10845.

　　5 李 煊，胡树成.血管内皮生长因子在肺癌研究中的进展〔J〕.国外医学·内科学分册，2002；29（4）：143147.

　　6 张广宇，赵 敏，徐明堂.血管内皮生长因子及其受体与肺癌血管新生的研究〔J〕.中华结核和呼吸杂志，2002；25（2）：8993.