COX-2在非小细胞肺癌中的表达及意义

作者：佟旭,张一梅作者单位：哈尔滨医科大学

    【摘要】  目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学S-P法检测57例NSCLC癌组织及其淋巴结、15例正常肺组织中COX-2蛋白表达水平。结果 NSCLC组织COX-2蛋白表达高于正常肺组织(P<0.05),腺癌高于鳞癌(P<0.05),随病理分级恶性程度升高呈增加趋势，且与淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与年龄、性别无明显相关性。结论 COX2在非小细胞肺癌组织尤其是肺腺癌中表达上调, COX-2参与NSCLC的发生、发展。

【关键词】  非小细胞肺癌 环氧化酶-2

　　肺癌的发病率和死亡率目前已经排在各种恶性肿瘤的第一位，在过去的10年中，全球肺癌的发病率每年以22％的速度在飞快上升。为了提高肺癌患者的生存率,研究者们致力于找到一种能够早期诊断、治疗和精确评价预后的方法。目前的研究认为,COX-2在多种恶性肿瘤中高表达，参与肿瘤的发生、发展和转移。某些COX-2抑制剂已表现出明确的抗肿瘤作用，并且已经应用于肿瘤的治疗。但COX-2在肿瘤中的致癌机制尚不完全明确。我们用免疫组织化学法检测NSCLC中COX-2蛋白的表达水平,以探讨COX-2在肺癌发生、发展中的作用,为肺癌的发病机制及今后的治疗提供理论依据。

　　1  对象与方法

　　1.1  临床资料  选取2005～2007年齐齐哈尔医学院第三附属医院胸外科非小细胞肺癌手术患者57例,男例41,女16例,年龄3４～79岁,平均年龄60.6岁，鳞癌29例，腺癌28例，病理学分级为G1 19例，G2 17例，G3 21例。其中淋巴结转移25例，无淋巴结转移32例。患者术前均未行放疗、化疗及生物免疫治疗，手术中取肺癌组织及淋巴结、正常肺组织［所切除肺距离病灶最远处(>3cm)的正常组织］,组织离体后去除坏死或出血组织制备石蜡切片，标本均经１０％甲醛溶液固定，石蜡包埋，４μm厚度连续切片。病理组织切片HE染色由两位有经验的临床病理学专家阅片作出病理诊断。

　　1.2  实验方法

　　1.2.1  免疫组织化学法  兔抗人COX-2免疫组化单克隆抗体、链霉卵白素过氧化酶(S-P)免疫组织化学试剂盒均购自于福州迈新生物技术开发有限公司。操作按S-P免疫组织化学试剂盒说明书进行, 操作步骤如下：石蜡切片常规脱蜡至水,内源性过氧化物酶阻断10min,微波抗原修复,一抗孵育过夜(4℃),二抗孵育20min(室温),链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶孵育30min(室温),DAB显色5～10min,苏木精复染后,脱水,透明,封片，光镜下观察。取阳性对照片同步操作作为阳性对照；用PBS代替一抗作为阴性对照。结果判定: 选择5个有代表性高倍视野,计算阳性细胞数，阳性细胞数≥31%为染色阳性,<30%为染色阴性，以已知的阳性组织切片作阳性对照,以PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.3  统计方法  计数资料用阳性率(%)表示,组间差异的显著性用χ2检验。

　　2  结果

　　2.1  COX-2在正常肺组织中及NSCLC中的表达  免疫组织化学结果COX-2主要在肿瘤细胞的胞浆表达,胞浆被染成棕黄色。COX-2在57例NSCLC组织中表达率为59.6%(34/57),在正常组织表达率为0%(0/15),经χ2检验, 肺癌组织COX-2蛋白表达阳性率高于癌旁正常组织(χ2=16.95,P<0.01)。

　　2.2  COX-2与各临床病理特征之间的关系  COX-2在NSCLC中腺癌阳性表达率78.5%(22/28)明显高于鳞癌41.3%(12/29)。二者之间有显著性差异(P<0.05)。COX-2与NSCLC淋巴结转移、病理分级有明显关系(P<0.05)。COX-2在NSCLC中己发生淋巴结转移组阳性率(80.0%)大于未发生淋巴结转移组阳性率(15.3%)，两者之间有显著性差异(P<0.05)。COX-2阳性表达率随着病理分级的提高而增加;研究发现COX-2的阳性表达率与患者的性别、年龄无显著相关性(P>0.05)。详见表１。

　表1  COX-2的表达与临床病理参数的关系（略）

　　注：癌旁组织：距离癌组织３cm处采样。

　　3  讨论    　　环氧化酶COX是催化花生四烯酸合成前列腺素过程的限速酶。目前发现其有两种同工酶:结构型COX-1和诱生型COX-2。正常情况下,COX-1恒定表达,维持机体生理功能;而COX-2不同,大多数正常组织在正常生理情况下不表达,而在一些因素如炎症因子及促癌剂等刺激下则表达增加。己有证据表明，COX-2参与多种恶性肿瘤的发生、侵袭及转移，并与肿瘤新生血管形成有关［1-2］。研究证明COX-2能增强烟草中NNK的致癌生物活性［3］;而COX抑制剂阿司匹林和选择性COX-2抑制剂NS-398，可降低烟草中NNK介导的A/J鼠肺肿瘤的发生。在NSCLC中COX-2呈过度表达［4-5］，COX-2不仅在肺癌组织有很强的表达，而且在肺原位癌和癌前病变中也有很强的表达。例如COX-2频繁地在肺和增生的支气管上皮细胞如支气管腺瘤样增生中高表达，还可在小鼠肿瘤易感性增加的肿瘤前期细胞中有高水平的表达。我们用免疫组化法检测了53例NSCLC,发现COX-2在非小细胞肺癌组织尤其是腺癌中表达增高,该结果与国外报道一致。肺癌组织COX-2表达高于正常组织,提示COX-2表达上调可能对肺癌的发生发展起作用。发现COX-2的表达水平与NSCLC的侵袭性、淋巴结转移密切相关,表明COX-2高表达可提高肿瘤发生及转移的潜能,增加肿瘤细胞的侵袭力，提示用COX-2蛋白检测进行肿瘤恶性程度、病情轻重的预测有明显价值。    　　总之,COX-2在肿瘤发生、转移中发挥着重要的作用,其表达水平增加有可能是肿瘤发生的早期事件。在此基础上开展临床水平COX-2抑制剂治疗多种恶性肿瘤的探讨是当今研究的热点，最近美国临床肿瘤协会(A SCO)报道了赛来可希可与化疗药物多烯紫杉醇联合应用以治疗复发性非小细胞肺癌［6］。在肺癌组织中，如何抑制COX-2通路中各个成员的活性，研究与开发基于分子靶点的药物将为肿瘤治疗开辟一条新途径。

【参考文献】  　　［1］ Yang C, Stephen M.Manv actions of cyclooxygenase-2 in cellular dvnamics and in cancer［J］.J Cellular Physiology,2002,190(3):279-286

　　［2］ Dohadwala M,Luo J, Zhu L, et al.Non-small cell lung cancer cvclooxygenase-2-dependent invasion is mediated by CD44［J］.J Biol Chem，2001,276(24):20809- 20812

　　［3］ Rioax N,Castonguay A, Prevention of NNK-induced lung tu morigenesis in A/J mice by acetvlsalicvlic acid and NS-398［J］.Cancer Res,1998,58:5354-5360

　　［4］ Wolff H, Saukkonen K, Anttila S, et al. Expression of cvclooxygenase- 2 in human lung carcinoma［J］. Cancer Res, 1998,58(22):4997-5001

　　［5］ Ochiai M, Oguri T, Isobe T, et al. Cycaooxygenase-2 (COX-2)，mRNA expression levels in normal lung tissues and non-small cell lung cancers［J］. Jpn,J Cancer Res,1999,90(12):1338-1343

　　［6］ Csiki I, Dang T, Gonzalez A,et al. Cyclooxygenase-2(COX-2) inhibition+ decetaxel(TXT) in recurrent non-small cell lung cancer(NSCLC):preliminary result of a phase II trial(THD-0054)［J］. Preceedings of ASCO,2003,21:297