非小细胞肺癌中基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达与淋巴结转移的关系
发表时间：2009-06-29 浏览次数：658次
作者：刘旭之,刘晓民
作者单位：哈尔滨医科大学
【摘要】 目的 研究MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化方法检测87例非小细胞肺癌中MMP-2的表达。结果 MMP-2的表达在非小细胞肺表达的明显高于癌旁组织（P<0.05）；MMP-2的表达随病理分级恶性程度升高呈增加趋势。淋巴转移组MMP-2的表达高于无淋巴转移组（P<0.05）。结论 MMP-2在非小细胞肺癌中表达与非小细胞肺癌临床病理特征和转移、预后有关。
【关键词】 非小细胞肺癌 基质金属蛋白酶2 免疫组化
Expression of Matrix Metalloproteinase-2 in Lung Carcinoma
LIU Xu-zhi ,et al.
(Harbin Medical University, Harbin, Heilongjiang Province150081 P.R. China) 【Abstract】 Objective To study the relationship of matrix metalloproteinase-2 (mmp-2) to clinicopathological characters and prognosis of non-small cell lung cancer(NSCLC). Methods The expression level of mmp-2 in 87 NSCLC patients was tested with immunohistochemistry. Results The positive rate of mmp-2 expression was higher in NSCLC than in normal tissues(P<0.05).The poorer differentiation of the was associated with the higher expression of mmp-2. The expression of mmp-2 in tumor tissue with positive-node was much higher than that in tumor tissue with negative-node(P<0.05). Conclusions Mmp-2 obviously relates with the clinicopathological characters and prognosis of the NSCLC. 【Key words】 Metalloproteinase-2 Lung neoplasms of non-small cell lung Immunohistochemistry 基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)的表达与肿瘤细胞侵润、转移、复发密切相关。在细胞外基质（ECM) 代谢平衡调解中基质金属蛋白酶属一组金属锌离子依赖性内肽酶， 起着重要作用,参与肿瘤演进等众多生理和病理过程。肿瘤侵润、转移的先决条件是细胞外基质（ECM)降解，使细胞基底膜的完整性受到破坏。在这一过程中MMPs活性明显增加，其中MMP-2可选择性降解基底膜的主要成分IV胶原，在肿瘤细胞突破基底膜屏障而发生浸润和转移的过程中起着重要作用［1］。本文采用免疫组化方法检测87例非小细胞肺癌手术标本中的MMP-2表达情况，探讨临床意义与预后的相关性。
１ 材料与方法
１．１ 标本 取自齐齐哈尔医学院附属第三医院2000年4月～2006年7月87例NSCLC患者手术切除的肺组织，其中男52例，女35例，年龄35～75岁，中位年龄62岁，平均58岁；肺鳞癌58例，肺腺癌29例，病理学分级为G127例，G224例，G336例。随机取其中淋巴结转移16例，无淋巴结转移11例，正常肺组织取自肿瘤远端3cm以外或手术边缘经病理查实未发现癌细胞。标本均经10％甲醛溶液固定，石蜡包埋，4μm厚度连续切片。
１．２ 试剂 兔抗人MMP-2多克隆抗体（ZA-0331）（1∶50稀释）及UltraSensitiveTMS-P试剂盒均购自为北京中杉生物技术公司。
1.3 方法 依常规免疫组化S-P法，按试剂盒说明书操作，步骤如下：石蜡切片常规脱蜡至水,内源性过氧化物酶阻断10min,微波抗原修复,一抗孵育过夜(4℃),二抗孵育20min(室温),链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶孵育30min(室温),DAB显色5～10min,苏木精复染后,脱水,透明,封片，光镜下观察．取阳性对照片同步操作作为阳性对照；用PBS代替一抗作为阴性对照。
１．４ 结果判定 MMP-2主要位于细胞浆中,显示棕黄色颗粒或团块,选择5个有代表性高倍视野,计算阳性细胞数，阳性细胞数≥31%为染色阳性,<30%为染色阴性，以已知的阳性组织切片作阳性对照,以PBS代替一抗作阴性对照,统计学方法各临床病理特征间与MMP-2表达率的差异性用χ2检验。
２ 结果 MMP-2的阳性表达位于细胞浆和细胞膜，呈片状分布，且多位于癌边缘。87例NSCLC组织中，阳性表达41例, 阴性表达46例,平均阳性率为47.1%; MMP-2的表达与性别、年龄、病理分型（鳞癌、腺癌）,两组之间比较,均差异无显著意义(P>0.05)。MMP-2的表达与肺癌组织病理分级（G1G2G3）有显著差异(P<0.05);肺癌组织与相应癌旁正常组织比较差异均有显著意义(P<0.05)；有淋巴结转移与无淋巴结转移两组比较有显著差异性(P<0.05)。详见表１。
表1 MMP-2的表达与临床病理参数的关系（略）
注：癌旁组织：距离癌组织3cm处采样。
３ 讨论 肿瘤的浸润和转移是肿瘤细胞与肿瘤基质成分共同参与的过程。Liotta等［2］提出肿瘤浸润三步学说,即粘附、降解和移动,首次明确提出了肿瘤浸润与肿瘤细胞间质降解之间的关系。转移的过程虽然很复杂,但其中的基本步骤是癌细胞对细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)和血管基底膜的降解和破坏（正常基底膜是由型胶原等成分构成,为一致密的网状结构,固有细胞不能通过,细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)是肿瘤细胞浸润扩散过程中的一道天然屏障）。癌侵袭转移是一个复杂的多步骤的癌细胞与宿主细胞间相互作用的连续过程，其中癌细胞分泌蛋白分解酶、降解基质是完成转移的关键。MMP是较重要的一类蛋白分解酶，它不仅可以降解基底膜和基质、突破基质屏障、促进肿瘤侵袭和转移，而且还可通过毛细血管内生、新生血管生成等促进肿瘤生长和扩散［3］。肿瘤细胞发生浸润和转移时,需要其表面的基质金属蛋白酶(MMPs)对相邻组织细胞外基质的降解作用,才可能穿透组织细胞的基底膜和血管到达较远的组织部位。近年来的研究表明,肿瘤细胞分泌的基质金属蛋白酶中,MMP2(明胶酶A/72kDa型胶原酶)是降解型胶原主要的酶,其在肿瘤的血管化、癌细胞的浸润和转移灶的形成过程中均起重要作用［4-5］,研究资料表明,在结直肠癌［6］和前列腺癌［7］等恶性肿瘤中MMP2的表达率与临床分期、病理分级及淋巴结转移有关。动物实验表明,MMP2与大鼠肺癌晚期发生转移呈正相关［8］。本实验研究结果表明,MMP2阳性表达率明显高于癌旁的正常肺组织(P<0.05),MMP-2表达随着肿瘤病理分级增高而有增高趋势,MMP-2在低分化肿瘤(G3)的阳性表达率显著高于高分化肿瘤(G1),（P<0.05）MMP-2表达与淋巴结转移呈正相关,以上结果提示MMP-2检测对于判断NSCLC的肿瘤的浸润和转移、病理分级及淋巴结转移具有临床实际应用价值。
【参考文献】 ［1］ Parson SL,Waston SA,Brown,et al.Matrix metalloproteinases［J］. Br J.Surg,1997,84:160
［2］ Liotta LA,Stetler Stevenson WG. Tumorinvasion and metastasis: an imbalance of positive and negativere gulation ［J］.Cancer Res,1991,51(Suppl):5054-5059
［3］ Mitaiades N,Poulaki V,Koloula V,et al. Fas ligand is present in tumors of the Ewing'。sarcoma family and iecleaved into a soluble form by a metalloproteinase［J］.Am J Patho1,1998,153(6):1947
［4］ Chamber AF,Matrisian LM.Changingviews of matrix metalloproteinase2 inmetastasis［J］.NatlCancerInst,1997,89(6):1260-1265
［5］ Parsons SL,Watson SA,Collins HM, et al. Gelatinase (MMP22 and MMP29) expressioning astrointe stinal malignancy［J］.Br J Cancer,1998,78(11):1495-1502
［6］ Zeng ZS, Cohen AM, Guillem JG. Loss of base mentmem brane type collage nisassociated with increased expression of metalloprote mases2and9 (MMP22 and MMP29)during human colorectaltu2 morigenesis ［J］. Carcingenesis,1999,20(5):749-745
［7］ Still K, Robson CN, Autzen P,et al. Localization and quantification of mRNA for matrix metalloproteinase22 (MMP22) and tissue in hibitor of matrixmetallo2 proteinases2(TIMP22) in human benign and malignant prostatictissue［J］.Prostate,2000,42(1):18-25
［8］ 陈洪雷,刁路明,陈德基,等.大鼠肺癌侵袭和转移中明胶酶A 及其抑制剂的动态表达［J］.中华肿瘤杂志,2002,24(2):118-122
