放疗对喉癌患者T淋巴细胞亚群、IL2、TNF及Bcl2表达的影响

　　作者：姚俊　陈仁辉　王军　崔德威 作者单位：广东医学院附属医院耳鼻喉头颈外科，广东湛江 524001

　　【摘要】探讨放疗对喉癌患者T淋巴细胞(TLC)亚群、白细胞介素2(IL2)、肿瘤坏死因子(TNF)及Bcl2表达量的影响。方法：对40例喉癌患者血CD4、CD8、IL2、TNF 及肿瘤组织中Bcl2采用单克隆抗体碱性磷酸酶法、ELISA放免法和免疫组化法进行检测，并与30例正常人作对照。结果：喉癌患者血CD4、IL2及TNF含量均明显低于正常者(P<0.01)，放疗后CD4、IL2及TNF含量低于放疗前;喉癌患者放疗前血CD8含量与正常人比较差异无显著性 (P>0.05)，放疗后则明显升高(P<0.05);放疗后喉癌组织中Bcl2表达水平低于放疗前(P<0.05)。结论：检测喉癌患者TLC亚群、IL2及TNF，对评价患者免疫状况及活体病变程度、判断疗效有指导意义;Bcl2则对判断肿瘤细胞存活状况有指导意义。

　　【关键词】 喉癌;放射治疗;T淋巴细胞;IL2;TNF;Bcl2

　　Effect of radiotherapy on expression of Tlymphocyte subpopulations, interleukin2, tumor necrosis factor and bcl2 in laryngeal cancer patients

　　YAO Jun，CHEN Renhui， WANG Jun， CUN DeWei

　　(The Affiliated Hospital, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023, China)

　　【Abstract】 Objective: To investigate the effect of radiotherapy on the expression of Tlymphocyte subpopulations, interleukin2 (IL2), tumor necrosis factor (TNF) and Bcl2 in laryngeal cancer patients. Methods: The content of Tlymphocyte subpopulations, IL2, CD4，CD8，TNF in blood and Bcl2 in cancer tissue of 40 laryngeal cancer patients were detected by clone antibodies, alkialine phospalase method, ELISA, radia immunity and immunohistochemial technigue,respectively, with 30 cases of normal people as the control. Results: The blood content of CD4, IL2 and TNF in laryngeal cancer patients were lower than in healthy people (P<0.01),and in preradiotherapy patients were higher than in postradiotherapy patients. Although there was no difference of CD8 content between in preradiotherapy patients and in healthy people (P>0.05), CD8 content increased after postradiotherapy (P<0.05); the Bcl2 expression in postradiotherapy patient was lower than in preradiotherapy patients (P<0.05). Conclusion: Laryngeal cancer may erode the patient's immunoreactivity and the radiotherapy can exacerbate this process.

　　【Key words 】 laryngeal cancer;radiotherapy;t lymphocyte subpopulations; interleukin2;tumor necrosis factor;Bcl2

　　放疗是治疗喉癌的主要方法之一，尤其对早期喉癌疗效较好，但不同个体的放疗效果差异甚大，其原因尚不清楚。有关喉癌与免疫有关的血T淋巴细胞(TLC)亚群、白细胞介素2(IL2)、Bcl2及肿瘤坏死因子(TNF)变化与喉癌分化程度关系的研究报道较少，自2003年1月～2004年6月我们对40例喉癌患者血TLC亚群、IL2、Bcl2及TNF水平含量进行了检测，结果报道如下。

　　1 材料和方法

　　1.1 临床资料

　　选择2003年1月～2004年6月在我院住院治疗的40例喉鳞癌患者，年龄32～78岁，其中男25例，女15例，所有病例均经病理证实。喉癌分期按1997年UICC喉癌分期标准，其中T1期16例，T2期20例，T3期4例。40例患者均采用单纯60Coγ射线照射原发灶，总吸收剂量为60～70Gy，每周9～10Gy，连续6～7周。40例患者放疗后均取病检(放疗后组)组织，其中28例于放疗后3～4周、11例于放疗后8～15周取材。复发情况：3a内复发9例，3～5a复发17例，5a以上复发14例。

　　1.2 方法

　　于早晨8点空腹采肘静脉血5mL备用。TLC亚群CD4、CD8分析：采用单克隆抗体碱性磷酸酶法，测其所占细胞总数的百分比，选用美国贝克曼公司流式细胞仪及该公司提供的试剂盒;IL2检测：采用多抗体夹心ELISA法测血清IL2含量;TNF检测：采用放射免疫分析法，测血清TNF含量，所有步骤均按试剂盒要求操作。采用免疫组化方法对喉癌组织Bcl2的表达水平进行检测，实验步骤按照试剂盒说明书进行。所有检测指标的试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司生产。

　　1.3 统计学处理

　　采用SAS统计学软件处理数据，计量资料采用方差分析及q检验，计数资料采用χ2检验。

　　2 结果

　　2.1 喉癌患者放疗前后TLC亚群、IL2及TNF含量测定结果

　　喉癌患者血CD4、IL2及TNF含量均明显低于正常者(P<0.01)，放疗后CD4、IL2及TNF含量低于放疗前;喉癌患者放疗前血CD8含量与正常人比较差异无显著性 (P>0.05)，放疗后则明显升高(P<0.05)。见表1。

　　表1 喉癌患者放疗前后TLC亚群、IL2及TNF含量比较表(略)

　　注：除*vs**、#vs## 、##vs### P>0.05外，各组组间两两比较均P<0.01。

　　2.2 喉癌患者放疗前后Bcl2含量测定

　　本组喉癌患者放疗后Bcl2的阳性率为27.5%(11/40), 明显低于放疗前的77.5%(31/40)，差异有显著性意义(P<0.01)。

　　3 讨论

　　由于不破坏喉的正常解剖结构，保留患者语言功能，保证患者生存质量，因而放疗仍是喉癌治疗的主要手段之一。喉癌发生、发展与遗传及免疫有关，有关TLC亚群、IL2及TNF与喉癌关系的研究不多。CD4分子一般表达在T辅助细胞上，CD4细胞具有辅助B细胞及激活T细胞和NK细胞功能活性作用[1]。IL2则是重要的免疫增强细胞因子，它能与具有IL2受体活化的CD4细胞结合，加速CD4的增殖分化，促进抗体的产生，增强NK细胞与巨噬细胞的杀伤肿瘤作用及激活LAK细胞，产生对多种肿瘤细胞的杀伤力[1]。CD8分子多表达在T抑制细胞上，它是通过抑制CD4细胞的活性，导致对抗体的产生与细胞介导免疫应答的抑制作用。CD4细胞下降，而CD8细胞增强时，比单纯CD4细胞下降对机体免疫功能的抑制更严重。TNF是一种由巨噬细胞分泌的多肽类细胞活性物质，参与介导炎症反应和免疫调节过程，有较强抗肿瘤作用，可影响肿瘤的发生、发展[2]。近年研究发现，多数恶性肿瘤外周血TLC亚群、IL2及TNF水平含量随着肿瘤的恶化而降低。肿瘤细胞分泌多种免疫抑制因子，诱导和激活CD8细胞，使CD4/CD8比值下降[3]。本文检测显示，喉癌患者CD4及CD4/CD8呈不同程度下降，而CD8则升高，同时IL2及TNF下降与CD4降低呈一致性，提示喉癌患者存在免疫抑制现象，并且由于其放射损伤，这种免疫抑制状况在放疗后更加明显。同时，IL2及TNF水平含量的降低，可能与喉癌自身免疫过程中对IL2及TNF的消耗有关[45]。因此，我们认为检测喉癌患者TLC亚群、IL2及TNF，对评价患者免疫状况及活体病变程度、判断预后有指导意义，并为探讨喉癌发病、发展及临床应用免疫调节药提供参考。

　　研究证实放射线可诱导细胞凋亡，Bcl2和Bax是目前研究最多的一对正负调节细胞凋亡的基因，Bax/Bcl2的比值对决定细胞接受刺激信号后存活与否有关，Bcl2过量表达则细胞存活，Bax过量表达则细胞死亡[6]。本研究结果显示，放疗后喉癌患者Bcl2的表达水平明显减低，表明放疗导致局部喉癌细胞的凋亡。因而从另一角度阐述，Bcl2在喉癌组织的局部表达水平是判断肿瘤细胞存活状况及放疗效果的有效指标。

　　【参考文献】

　　[1]OGAWA T, SHIGA K,TATEDA M, et al. Protein expression of p53 and Bcl2 has a strong correlation with radiation resistance of laryngeal squamusmous cell carcinoma but does not predict the radiation failure before treatment[J]. Oncol Rep, 2003,10(5):14611466.

　　[2]SCHERR D S, VAUGHANED J R, WEI J, et al. Bcl2 and p53 expression in clinically localized prostate cancer predicts response to external beam radiotherapy[J].J Urol, 1999,162(1):1216.

　　[3]毛明华,黄世超,余慧珠. 肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤和免疫功能改变的研究[J]. 肿瘤,2003,24(6):589591.

　　[4]KOKAWA K, SHIKONE T, OTANI T, et al. Transient increases of apoptosis and Bax expression occurring during radiotherapy in patients with invasive cervical carcinoma[J]. Cancer, 1999, 86(1):7987.

　　[5]PILLAI M R，JAYAPRAKASH P G，NAIR M K.Bcl2 inmumoreactivity but not p53 cumulation associated with tumor respongse to radiotherapy in cervical carcinoma[J]. J Cancer Res Clin Oncol, 1999,125(1):5560.

　　[6]ROSSE T, OLIVIER R, MONNEY L, et al. Bcl2 prolongs cell survival after Baxinduced release of cytochrome c[J].Nature,1998,391(6666):496499.