毁损海洛因依赖大鼠伏隔核对戒断症状及血浆β-内啡肽的影响

　　作者：张新勇 作者单位：淮安市第二人民医院神经内科，江苏淮安223002

　　【摘要】 目的 观察毁损海洛因依赖大鼠伏隔核(NAc )对戒断症状及血浆β-内啡肽(β-EP)的影响。方法 ①海洛因依赖组(实验组)按逐日递增原则皮下注射海洛因建立海洛因依赖模型，首日每次剂量3 mg/kg，雌雄不拘，每日2次，连续9天皮下注射海洛因;对照组注射等量生理盐水。②毁损NAc：毁损电极插入NAc，通直流电进行毁损。实验组大鼠20只，分为实验Ⅰ组(海洛因依赖组)和实验Ⅱ组(依赖后行NAc毁损)，每组10只;对照组大鼠20只分为对照Ⅰ组(NAc未毁损组)，对照Ⅱ组(NAc毁损组)，每组10只。比较实验Ⅰ组和实验Ⅱ组戒断症状的变化;③β-EP检测：实验Ⅰ组、实验Ⅱ组、对照Ⅰ组、对照Ⅱ组大鼠取躯干血置入抗凝试管中，混匀离心，放射免疫法测定4组大鼠血浆β-EP水平,比较各组大鼠血浆β-EP水平的变化。结果 ①戒断症状：毁损大鼠NAc后，除湿抖症状外，其他戒断症状均较毁损前减轻(P<0.01);②血浆β- EP：与对照Ⅰ组比较，实验Ⅰ组血浆β- EP水平下降，对照Ⅱ组血浆β- EP水平上升(P均<0.05);实验Ⅱ组血浆β- EP水平上升，与实验Ⅰ组比较差异有显著性(P<0.05)。 结论 毁损NAc后，海洛因依赖大鼠的戒断症状减轻;NAc参与β- EP水平的调节。

　　【关键词】 海洛因依赖 伏隔核 β-内啡肽

　　Effects of NAc ablation on the withdraw signs and plasma β-EP

　　in heroin-dependent rats

　　ZHANG Xinyong1, PAN Guishu2, XU Guoqiang3

　　(1. Department of Neurology, the Second People′s Hospital of Huai′an, Huai′an, Jiangsu 223001， China;

　　2. Department of Physiology， Zunyi Medical College, Zunyi, Guizhou 563000;

　　3. Department of Physiology, Guiyang Medical College, Guiyang, Guizhou 550004)

　　Abstract: Objective To observe the changes in withdrawal signs and plasma β-EP after ablating the NAc in heroin-dependent rats. Methods SD rats were divided into four groups of 10. TestⅠ and testⅡ groups were made addicts by starting with heroin 3 mg/kg hypo bid and increasing the dosage every day for a total of 9 days, while the controlⅠ and Ⅱ groups were given equivalent volumes of NS. Electric ablation of the NAc nucleus was performed in testⅡ and controlⅡ groups. The withdrawal signs were compared between the two test groups following the naloxone therapy. Finally， blood samples were taken to determine the level of β-EP for comparison between the four groups. Results The withdrawal signs were less marked in　testⅡ　group　than　in　testⅠ　group(after　NAc　ablation，　P<0.05). The level of β-EP in blood plasma was found lower　in　testⅠ　group　than　in　controlⅠ　group　(after　addiction，　P<0.05),　and　higher　in　controlⅡ　and　testⅡ　grouops　(after　NAc　ablation，P<0.05). Conclusion After the NAc is destroyed, the withdrawal signs are alleviated.　The NAc participates in　the regulation of β-EP.

　　Key　words： heroin dependence; nucleus accumbens; β-EP

　　大量研究资料表明，中脑边缘多巴胺系统是一切药物成瘾的心理依赖基础[1]。中脑边缘多巴胺系统包括多巴胺(dopamine,DA )神经元集中的中脑腹侧背盖区(ventraltegmental area, VTA)及其主要投射区伏隔核(nucleus accumbens,NAc)和额叶皮质(prefrontal contex,PFC)等边缘前脑区域。NAc是产生奖赏效应的关键核团,在阿片类药物依赖形成机制中起着重要作用。然而，有关NAc毁损后戒断症状报道甚少，尤其海洛因依赖后毁损大鼠NAc对戒断症状及血浆β-内啡肽(β-EP)的影响研究尚未见报道。

　　本实验采用毁损电极通直流电毁损海洛因依赖大鼠NAc，观察毁损海洛因依赖大鼠NAc对戒断症状及血浆β-EP的影响，探讨海洛因成瘾机制，为戒毒治疗提供一些参考。

　　1 材料和方法

　　1.1 动物和分组 健康SD大鼠40只，雌雄不拘，体重180～220 g，由贵阳医学院实验动物中心提供〔批号：SCXK(黔)2003-0001〕。取海洛因依赖模型建立成功后的大鼠20只作为实验组，用于戒断实验。其中实验Ⅰ组10只(海洛因依赖未毁损NAc)，实验Ⅱ组10只(海洛因依赖毁损NAc)。正常对照组20只。对照Ⅰ组10只(未毁损NAc);对照Ⅱ组10只(毁损NAc)，与实验组共同用于β-EP的检测。各组大鼠分笼饲养，自由饮水、进食。海洛因由贵州省公安厅提供。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 海洛因依赖大鼠模型的建立 根据文献[2]建立海洛因依赖模型。按逐日递增原则, 首日每次剂量3 mg/kg，2次/d(上午9：00，下午4：00),连续皮下注射9天(第9天每次剂量达27 mg/kg)。对照组按同样方法注射等量生理盐水。第10天用5 mg/kg纳洛酮腹腔注射，诱发戒断症状并与已建立的海洛因依赖大鼠模型戒断标准比较，确定模型是否建立成功，取依赖模型成功后的大鼠进行实验。戒断症状包括湿狗样抖、扭体、伸展、理毛、齿颤、吞咽、直立,记录它们的次数。以上症状观察30 min，并根据文献[2]进行评分，确定海洛因依赖模型的建立。成瘾后大鼠从第10日起，每天注射1次维持剂量的海洛因(27 mg/kg)。对照组按同样方法注射等量生理盐水。

　　1.2.2 毁损NAc 给药后的第12天，将实验Ⅱ组大鼠用25%氨基甲酸乙酯和0.5% α-氯醛糖混合液(25%氨基甲酸乙酯0.2 ml/100 g + 0.5% α-氯醛糖1 ml/100 g)经腹腔注射麻醉后,固定在DGY-79A型脑立体定位仪上。毁损使用自制的毁损电极(直径0.6 mm，尖端裸露0.5 mm，电阻15 kΩ左右), 毁损坐标按文献[3]进行;前囟前(AP)：1.7 mm，旁开(L、R)：1.5 mm，硬膜表面以下(DV)：7.5 mm;毁损电流/时间为1 mA/30 s。术后使用抗生素3天预防感染，海洛因、生理盐水继续按维持量注射。毁损10天后进行戒断实验。

　　1.2.3 戒断实验 在安静、自然光条件下进行。给2组大鼠腹腔注射纳洛酮(5 mg/kg)，观察实验Ⅰ组、实验Ⅱ组大鼠戒断症状：湿狗样抖、伸展、扭体、理毛、齿颤、吞咽、直立。记录每只大鼠30 min内戒断症状发生的次数。

　　1.2.4 β-EP测定 ①标本制备：取躯干血1.5 ml加入装有0.3 mol EDTA-Na2 30 μl和抑肽酶(每ml全血500 KIU)的试管中，混匀离心，3 000 r/min，20 min，取血浆放入-20℃冰箱保存。②放射免疫测定：按试剂盒操作说明书进行，β-EP试剂盒由上海第二军医大学神经生物学教研室提供，放射免疫分析法，顺序饱和加样程序测定血浆β-EP的含量。

　　1.3 组织学定位 全部实验完成后NAc毁损大鼠麻醉后用生理盐水心脏灌流，1%亚铁氰化钾甲醛溶液(每1 g亚铁氰化钾加10%多聚甲醛100 ml配制而成)内固定后取脑，外固定1周，然后做脑组织冠状面切片，苏木精-伊红染色观察毁损部位的毁损情况，NAc毁损正确者进行统计学处理。

　　1.4 统计学处理 所有数据均采用SPSS 11.0统计软件包进行处理，组间比较t检验，P<0.05认为差异有显著性。

　　2 结 果

　　2.1 海洛因依赖大鼠戒断症状的变化 毁损大鼠NAc后，除湿狗样抖症状外，其他戒断症状均较毁损前减轻(P<0.01),见表1。表1 实验Ⅰ组与实验Ⅱ组戒断症状比较与实验Ⅰ组比较：**P<0.01

　　2.2 4 4组大鼠血浆β-EP含量测定结果 与对照Ⅰ组比较，实验Ⅰ组血浆β- EP水平下降，对照Ⅱ组血浆β- EP水平上升(P均<0.05);实验Ⅱ组血浆β- EP水平上升，与实验Ⅰ组比较差异有显著性(P<0.05)，见图1。

　　3 讨 论

　　戒断症状为阿片类药物成瘾生理依赖表现，是由于体内已形成耐受的情况下,突然中断阿片类药物的供给,机体由适应状态突然变为不适应，便产生强烈的戒断反应。

　　NAc是脑内DA细胞群VTA主要投射部位，大量研究资料显示，阿片类药物长期应用可使DA释放增加[4]。有文献表明，海洛因作用于DA 递质系统，最终导致DA 过度释放，而产生奖赏效应[5]。Ikemoto等[6]研究发现, NAc内注射DA和DA受体激动剂表现出大鼠运动增多,动物出现激励、准备反应。相反,如果NAc内注射DA受体拮抗剂则能减少动物的活动[7]。因而有研究者认为，NAc中DA水平的升高是产生奖赏效应所必须的条件[8]。资料表明， DA参与奖赏效应，通过两条路线实现[9]：VTA-NAc 是一条DA能通路，VTA 中有抑制的γ-氨基丁酸(GABA)能神经元，该神经元上存在μ受体。阿片类药物通过与μ受体结合，降低GABA能神经元活性，减少GABA的释放，取消了对DA能神经元的紧张性抑制，进而增强DA能神经元的功能活动，最终导致NAc内DA释放增加，产生奖赏效应。另外，NAc的DA能神经元上有μ受体，阿片类药物还可以直接作用于该受体，使NAc内DA增加，直接产生奖赏效应[10]。可见，DA在产生药物奖赏中起着重要作用。

　　本实验毁损大鼠NAc后,除湿狗样抖症状外，其他戒断症状均较毁损前减轻(P<0.01)。这表明毁损大鼠NAc后，可减轻海洛因依赖大鼠的戒断症状。其机制可能是由于毁损大鼠NAc后，DA的合成、释放、介导均受到了影响以及DA的反馈通路被切断，海洛因给药后,大鼠不再能充分形成对用药的反应。当然，由于药物作用机制复杂，可能还有其他机制参与毁损后的戒断表现，有待于进一步研究。

　　脑内存在内源性阿片样物质，β-EP是三大内源性阿片肽(内啡肽、脑啡肽、强啡肽)的一种, 其前体为阿片黑素皮质素原,由31个氨基酸组成, 主要分布在下丘脑弓状核和垂体，其作用的受体为μ受体。正常情况下, μ受体处在一定基础水平的内源性配体β- EP的作用下通过调节下丘脑、垂体、靶腺组织,维持正常的生理活动。μ受体同时被公认为与成瘾相关的阿片受体。外源性阿片类物质反复进入体内结合μ受体产生奖赏效应，导致欣快感、满足感，从而产生药物依赖。有资料表明：海洛因成瘾者血浆中β-EP含量较正常对照组下降显著[11]。本实验结果与此一致。其机制可能为：海洛因有类似于内源性阿片类物质的功能,可竞争地与β-EP受体结合,大剂量的海洛因进入机体,抑制机体内部的内源性阿片样物质分泌,导致整个机体内源性阿片肽系统水平降低,以适应人为产生的进入体内的大量的外源性阿片样物质。

　　研究表明：海洛因成瘾患者停用海洛因戒毒后随着戒断症状的减轻，血浆β- EP水平逐渐上升[11];这表明海洛因成瘾和戒断症状与β- EP水平改变有密切关系。本实验海洛因成瘾大鼠NAc毁损后，戒断症状减轻的同时，大鼠血浆β- EP水平较海洛因成瘾时明显上升，与上述研究结果相一致。而且，对照组大鼠NAc毁损后较毁损前血浆β- EP水平也明显上升。这提示毁损NAc可引起大鼠血浆β- EP水平上升。表明NAc参与β- EP水平的调节，具体机制有待于进一步研究。

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