催乳素释放肽受体在不同类型垂体瘤的表达及其与血泌乳素水平的相关性
发表时间：2011-02-22 浏览次数：440次
作者：侯典琦1， 卞留贯1， 孙青芳1， 陶帮宝1， 沈健康1， 赵卫国1， 宁 光2 作者单位：(上海交通大学医学院附属瑞金医院 1. 神经外科; 2. 内分泌科， 上海 200025)
【摘要】 目的 探讨催乳素释放肽受体 (PrRP-R) 在不同类型的垂体瘤中的表达及其与术前泌乳素 (PRL) 水平、垂体瘤侵袭性之间的关系。 方法 收集19例垂体瘤标本，其中泌乳素 (PRL) 腺瘤5例、生长激素 (GH) 腺瘤6例、促肾上腺皮质激素 (ACTH) 腺瘤4例、其他4例。根据Hardy-Knosp分级标准，侵袭性腺瘤13例，非侵袭性腺瘤6例。采用半定量RT-PCR方法检测垂体瘤中PrRP-R mRNA的表达，RIA法检测术前血PRL水平。 结果 19例腺瘤中均有PrRP-R mRNA的表达，在PRL、GH、ACTH腺瘤中的表达量之间无统计学差别 (P > 0.05)。在侵袭性腺瘤和非侵袭性腺瘤中的表达量分别为 (0.69 ± 0.31)、(1.02 ± 0.74)，两者之间无统计学差异 (P > 0.05)。PrRP-R表达量与病人术前PRL水平不具相关性 (r = 0.189，P > 0.05)。 结论 PrRP-R表达与病人术前PRL水平不相关且与肿瘤的侵袭无关，需进一步研究PrRP-R在PRL分泌中的作用。
【关键词】 垂体肿瘤; 受体，神经肽; 催乳素; 侵袭
Express of prolactin releasing peptide receptor in different kinds of pituitary adenomas
and its relationship with plasma prolactin level
HOU Dianqi, BIAN Liuguan, SUN Qingfang, et al
Department of Neurosurgery, Ruijin Hospital, Medical College of Shanghai Jiaotong University, Shanghai 20025, China
Abstract: Objective To study the expression of prolactin-releasing peptide (PrRP) receptor in pituitary adenomas and its relationship with preoperative plasma prolactin levels and the invasiveness of pituitary adenomas. Methods Nineteen specimens of pituitary adenomas were collected immediately after transsphenoidal surgery, including 5 prolactinomas, 6 GH-secreting adenomas, 4 adrenocorticotropic hormone adenomas and 4 other types of adenoma. These adenomas were classified into 13 invasive adenomas and 6 non-invasive adenomas according to Hardy-Knosp's criteria. Semiquantitative RT-PCR was used to detect the expression of PrRP receptor mRNA and radioimmunoassay to detect the pre-operative plasma prolactin levels. Results All the 19 pituitary adenomas examined showed the expression of PrRP receptor mRNA. No significant difference in the expression level between prolactinoma, GH adenoma and ACTH adenoma was found (P>0.05). The expression levels of PrRP mRNA in invasive adenoma group and non-invasive adenoma group were 0.69±0.31, 1.02±0.74, respectively, without significant difference (P>0.05). There was no correlation between the expression level of PrRP receptor mRNA and the pre-operative plasma prolactin level (r=-0.189, P>0.05). Conclusions There was no correlation between the expression levels of PrRP receptor and both the pre-operative plasma prolactin levels and invasion of pituitary adenomas. Further study is needed to interpret the role of PrRP receptor in the secretion of prolactin.
Key words: pituitary neoplasms; receptors, neuropeptide; prolactin; invasiveness 催乳素释放肽 (prolactin releasing peptide，PrRP) 是一种神经肽，分布于延髓、下丘脑等多种组织中，通过与其受体 (PrRP-R)的相互作用发挥生理功能。本研究自2004年6月~2005年9月对瑞金医院神经外科手术切除的部分垂体腺瘤组织，应用RT-PCR技术分析了PrRP-R在不同类型垂体瘤中的表达及其与血泌乳素浓度的相关性。
1 材料与方法
1.1 临床资料 (表1) 垂体瘤标本均经临床、内分泌检查、手术病理检查证实。男9例，女10例;年龄28~70 岁，平均 (47 ± 12) 岁。微腺瘤 (<1 cm) 3例，大腺瘤 (>1 cm) 14例，巨腺瘤 (>3 cm) 2例。泌乳素 (PRL) 瘤5例，生长激素 (GH) 瘤6例，促肾上腺皮质激素 (ACTH) 瘤4例，其他4例。非侵袭性组6例，侵袭性组13例。其中侵袭性的判断标准：①Hardy-Knosp分级、分期标准[1]，Ⅲ级或以上及C~E期认为是侵袭性垂体腺瘤;②鞍底硬膜和邻近骨质经病理证实有肿瘤细胞浸润;③影像学检查见肿瘤包绕双侧颈内动脉。凡符合上述三项中的任何一项者均归属为侵袭性组。
1.2 实验方法
1.2.1 标本处理和引物设计： 新鲜手术标本立即置入液氮中或立即加入Trizol试剂 (Invitrogen公司) 并置入-80 ℃冰箱中保存以留备RNA抽提。实验引物由Primer3软件设计 (上海生工公司合成)。PrRP-R引物序列：sense-TGCTGGTCATCCTCCTGTCT;antisense- ACCACGCTGACGGTCATATT。内参GAPDH引物序列：sense-CCATGGAGAAGGCTGGGG;antisense-CAAAGTTGTCATGGATGACC。PrRP受体引物和内参引物扩增长度分别为394个、200个bp。
1.2.2 逆转录反应： 逆转录试剂盒购自Promega公司。Trizol一步法成功抽提组织RNA，取5 μg总RNA加入0.5 μl RNase抑制剂，再用DEPC水补足至10 μL，先后置于70 ℃ 5 min，冰上5 min。再加入25 mmol/L MgCl2 4 μL，10 × buffer 2 μL，10 mmol/L dNTP 2 μL，RNasin 0.5 μL，AMV逆转录酶0.5 μL，Oligo (dT) 1 μL，使总逆转录体系为20 μL，40 ℃ 60 min、70 ℃ 15 min后终止反应。
1.2.3 聚合酶链式反应： 取cDNA 1 μL，dNTP 0.5 μL，Buffer (内含MgCl2) 2 μL，正反义引物各0.5 μL，Taq酶0.2 μL，双蒸水15.3 μL，总反应体系为20 μL。PrRP-R引物和内参引物分别置于两管中进行体外扩增。反应条件是94 ℃预变性5 min，94 ℃ 40 s，60 ℃ 40 s，72 ℃ 1 min，35个循环后于72 ℃延伸10 min。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳，后行光密度扫描，以PrRP-R和内参的光密度比值之比作为相互间的比较参数。以不含逆转录酶的RT-PCR反应作为阴性对照。
1.2.4 激素测量： 采用RIA法，严格按照试剂盒说明书进行。
1.2.5 统计分析： 本组数据均以均数 ± 标准差表示。应用统计分析软件SPSS11.0进行分析，统计方法有独立样本t检验，One-Way ANOVA和Pearson 相关分析。
2 结 果
19例垂体腺瘤中均有PrRP-R表达 (图1，表2)。垂体腺瘤中PrRP-R表达与病人术前PRL水平无相关性 (r = -0.189，P>0.05)。泌乳素腺瘤中1例病人的术前PRL为21.3 ng/ml，PrRP-R的相对表达量最多，达1.04099。而另1例术前PRL为200 ng/ml，PrRP-R的相对表达量却为0.466722。在其他类型的腺瘤中亦有类似发现。
3 讨 论
关于PrRP的生理作用，存在诸多争议，目前倾向于认为PrRP不促进泌乳素的分泌，然而最新的体外实验结果证实PrRP能剂量依赖性的增加泌乳素的释放，而且还能拮抗多巴胺对泌乳素释放的抑制作用[2]。Zhang等[3]应用RT-PCR技术发现PrRP-R mRNA在39例标本均表达，其中5例正常人垂体组织、5例催乳素瘤、6例生长激素腺瘤、5例无功能腺瘤中亦表达PrRP mRNA。在垂体与垂体瘤中PrRP及其受体同时表达提示PrRP还可能通过旁分泌或自分泌的方式发挥作用。本组19例垂体腺瘤均表达PrRP-R。在此基础上，我们进一步比较了不同类型垂体腺瘤间PrRP-R的表达，结果发现各型腺瘤间并无差异，在泌乳素腺瘤中并无明显增高。
临床上侵袭性垂体腺瘤并不少见，其生物学特性介于良性和恶性之间，常向周围组织浸润生长，造成术中全切困难，术后复发率高。侵袭性垂体腺瘤的发生与多种因素有关，Zhang等[4]发现垂体瘤转换基因 (PTTG) 在侵袭性腺瘤中表达明显高于非侵袭性腺瘤，说明PTTG的高表达可能与垂体腺瘤的侵袭性有关。与细胞增殖有关的Ki-67标记指数在侵袭性垂体腺瘤中表达亦明显增高[5]。近年来的研究着重于基质金属蛋白酶 (MMP) 和一些生长因子的作用。本组侵袭性垂体腺瘤占68.5%，两组间PrRP-R的表达量并无差异，说明尽管该受体广泛表达，但与肿瘤的侵袭无关。
从本研究中可发现，PrRP-R的表达与PRL水平升高并不相关且在垂体PRL腺瘤中亦不相关，说明PrRP-R信号途径不能解释病理性PRL升高或高PRL血症，但这也不能完全否定PrRP的作用，因为PrRP除了能够作用于自身受体外，还能结合同一RFamide家族中另一成员神经肽FF (NPFF) 的2型受体[6]，已经证明正常垂体中能够表达NPFF 2型受体[7]，但在垂体瘤中NPFF 2型受体的表达需进一步研究。
总之，PrRP是目前富有争议的神经肽，其生理作用还存在着诸多争议。多种垂体瘤中PrRP-R表达的意义尚不清楚，尚需扩大样本进一步研究。
【参考文献】
[1] Wilson CB. A decade of pituitary microsurgery. The Herbert Olivecrona lecture [J]. J Neurosurg, 1984; 61(5): 814-833.
[2] Swinnen E, Boussemaere M, Denef C. Stimulation and inhibition of prolactin release by prolactin-releasing Peptide in rat anterior pituitary cell aggregates [J]. J Neuroendocrinol, 2005; 17(6): 379-386.
[3] Zhang X, Danila DC, Katai M, et al. Expression of prolactin-releasing peptide and its receptor messenger ribonucleic acid in normal human pituitary and pituitary adenomas [J]. J Clin Endocrinol Metab, 1999; 84(12): 4652-4655.
[4] Zhang X, Horwitz GA, Heaney AP, et al. Pituitary tumor transforming gene (PTTG) expression in pituitary adenomas [J]. J Clin Endocrinol Metab, 1999; 84(2): 761-767.
[5] Thapar K, Kovacs K, Scheithauer BW, et al. Proliferative activity and invasiveness among pituitary adenomas and carcinomas: an analysis using the MIB-1 antibody [J]. Neurosurgery, 1996; 38(1): 99-107.
[6] Engstrom M, Brandt A, Wurster S, et al. Prolactin releasing peptide has high affinity and efficacy at neuropeptide FF2 receptors [J]. J Pharmacol Exp Ther, 2003; 305(3): 825-832.
[7] Kotani M, Mollereau C, Detheux M, et al. Functional characterization of a human receptor for neuropeptide FF and related peptides [J]. Br J Pharmacol, 2001; 133(1): 138-144.
