脑胶质瘤经颈内动脉灌注ACNU的疗效观察

　　作者：刘沣 刘健 杨华 李玉明 作者单位：贵阳医学院附属医院神经外科， 贵州 贵阳 550004

　　【关键词】 尼莫司汀 神经胶质瘤 颈内动脉 投药途径

　　Evaluation of internal carotid artery perfusion by ACNU for glioma

　　LIU Feng, LIU Jian, YANG Hua, et al

　　Department of Neurosurgery, Affiliated Hospital of Guiyang Medical College, Guiyang 550004, China

　　Abstract: Objective To evaluate the therapeutic efficacy of internal carotid artery perfusion by ACNU in rats with glioma. Methods ACNU was infused into C6 glioma rat through internal carotid artery or femoral vein at a dose of 15, 30, 45 mg/kg respectively. At day 10 after the infusion, the rats were killed, the brain specimens observed by HE staining, the volumes of tumors calculated, and the influences of different drug dosages and medications on tumor growth compared. Results All the ACNU-infused rats had smaller tumor volume than the rats in the control group (P<0.01). Volumes of the tumors receiving ACNU infusion via internal carotid artery were smaller than those via femoral vein (P<0.05). Conclusion A single ACNU infusion via internal carotid artery can more effectively suppress the growth of glioma than a single infusion via vein.

　　Key words: nimustine; glioma; carotid arterial, internal; drug administration rutes

　　本实验经颈内动脉和股静脉两种给药途径，对比分析盐酸尼莫司汀 (ACNU) 化疗对大鼠脑胶质瘤的疗效，现将结果报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 大鼠C6胶质瘤细胞株 (中科院细胞库)。Wistar大鼠51只 (贵阳医学院实验动物中心)，体质量150～200 g，雌雄不拘。细胞悬浮介质采用含1%低熔点琼脂糖的无血清双倍1640。

　　1.2 细胞培养 采用含10%小牛血清的1640培养液 (Gibco公司) 行常规培养，每2～3 d传代一次。收获指数期生长的细胞，加入细胞悬浮介质，轻轻吹打，使细胞浓度为1 × 106个/10 μl，置于37 ℃水浴中保存。

　　1.3 动物模型制作 腹腔内注射1%戊巴比妥钠 (40 mg/kg体质量)，固定于江湾Ⅱ型立体定向仪上，于中线上眼裂后作一直切口，长约1.5 cm， 暴露前囟。于右侧冠状缝上距中线4 mm处以骨锥钻孔，用小直血管钳咬成约2 mm × 2 mm的小骨窗。微量注射器吸取10 μl细胞悬液，固定于电极移动架，调整移动架位置，于右侧冠状缝上距中线4 mm处缓慢垂直进针4 mm (距硬脑膜)，10 min内注完细胞悬液，缓慢拔针，关颅。

　　1.4 动物分组 接种肿瘤细胞10 d后，将实验动物分成7组。第1组为对照组 (n = 7)，不给药;第2组为经颈内动脉灌注低剂量组 (n = 8，剂量15 mg/kg);第3组为经颈内动脉灌注中剂量组 (n = 8，剂量30 mg/kg);第4组为经颈内动脉灌注ACNU高剂量组 (n = 6，剂量45 mg/kg);第5组为经股静脉灌注低剂量组 (n = 8，剂量15 mg/kg);第6组经为股静脉灌注中剂量组 (n = 8，剂量30 mg/kg);第7组为经股静脉灌注高剂量组 (n = 6，剂量45 mg/kg)。

　　1.5 ACNU给药方式[1] 将ACNU以生理盐水配成浓度为10 mg/ml的溶液，避光保存。经颈内动脉灌注法：腹腔注射1%戊巴比妥钠 (40 mg/kg体质量) 麻醉，在气管偏右1 cm舌骨至胸骨分叉处作一纵行切口，钝性分离皮下组织，暴露胸锁乳突肌，沿外侧沿向后分离，暴露颈动脉分叉，分离颈外动脉，继续向上分离甲状腺上动脉、面动脉及枕动脉，分别予以电凝。将1个动脉瘤夹置于颈外动脉靠近颈总动脉分叉处，另1个动脉瘤夹置于颈外动脉远心端以阻断颈外动脉。用静脉输液针从颈外动脉远端刺入，松开第1个动脉瘤夹，将针头送至颈动脉分叉处，缓慢注药。拔针后电凝阻断颈外动脉，逐层缝合。

　　经股静脉灌注法：在腹股沟区作一2 cm的切口，钝性分离，暴露股静脉，以注射器穿刺，缓慢注药后，压迫止血，逐层缝合。

　　1.6 病理切片 ACNU灌注10 d后处死大鼠，取鼠脑标本行4%中性甲醛溶液固定，作连续冠状位切片，层厚4 μm，行苏木精-伊红染色。选取肿瘤面积最大的切片，测量肿瘤横向及纵向最大径线。计数肿瘤切片数及肿瘤的前后径长度。

　　1.7 统计分析 根据公式V = A × B × C/2计算肿瘤体积，A 为切片水平面上肿瘤最大径，B 为切片上肿瘤最大垂直径，C 为切片上肿瘤最大前后径。采用SPSS 10.0 统计软件，对均数行方差分析。

　　2 结 果

　　2.1 病理检测 C6胶质瘤细胞在镜下呈蓝染，核染色较深，肿瘤与正常组织边界清晰，肿瘤灶内可见坏死、出血。肿瘤挤压脑室，中线移位。部分标本可见肿瘤细胞沿蛛网膜下腔浸润或侵入侧脑室。

　　2.2 疗效对比 (表1，图1) 对照组胶质瘤体积为 (57.99 ± 20.43) mm3。与对照组比较，各治疗组肿瘤体积均减小 (P < 0.01)。同剂量情况下，ACNU经动脉灌注组肿瘤体积小于经静脉灌注组 (P < 0.01)。同一给药途径的中、高剂量组肿瘤体积明显小于低剂量组 (P < 0.05)。颈动脉灌注中、高剂量组之间无显著性差异 (P = 0.12)。

　　3 讨 论

　　ACNU是亚硝脲类抗肿瘤药物，可溶于水及脂肪，可进入血-脑屏障，已用于静脉注射治疗脑肿瘤。Fujiwara等[2]发现：高浓度的ACNU (20 μg/ml) 可使离体培养的细胞停留在S期及G2+M期，从而使肿瘤细胞生长停滞。

　　本研究将药量分为高、中、低三个剂量组 (15、30 和45 mg/kg)，分别是临床用量的5、10和15倍，采用经颈内动脉和股静脉灌注。结果表明：中、高剂量ACNU灌注对肿瘤抑制尤为明显，其中经动脉灌注者疗效更显著。动脉灌注能提高ACNU局部有效浓度，有效杀灭肿瘤细胞。Levin等[3]用14C标记灌注剂，发现动脉灌注侧药物浓度比同剂量静脉用药高4倍。

　　两种给药方式中，中、高剂量组肿瘤体积均小于小剂量组 (P≤0.05)，说明加大药物剂量可使肿瘤内药物浓度提高，增强疗效。然而提高药物用量会带来更大的副作用。采用经动脉插管化疗，可在一定程度上解决这一矛盾，达到使用较少的药物而获得瘤内较高药物浓度的目的，从而减轻全身副作用[4]。本实验采用 ACNU经颈内动脉灌注，将药物直接送达肿瘤的供血动脉，从而能在同样剂量下更为有效地抑制肿瘤生长。

　　在经动脉灌注高、中剂量组之间，肿瘤体积无显著性差异，提示ACNU通过血脑屏障有最大速率的限制，血液中药物超过某一浓度后即使再增加药量，也不能再提高瘤内药物浓度。

　　本次研究仅涉及单次化疗的结果，关于肿瘤复发后再次或多次化疗的疗效及耐药性问题，仍有待进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1] Schem BC, Krossnes BK. Enhancement of ACNU treatment of the BT4An rat glioma by local brain hyperthermia and intra-arterial drug administration [J]. Eur J Cancer, 1995; 31A(11): 1869-1874.

　　[2] Fujiwara T, Nakasone S, Matsumoto K, et al. Effect of ACNU, a water-soluble nitrosourea, on cell cycle of cultured glioma cells—flow cytometric analysis [J]. Gan To Kagaku Ryoho, 1983; 10(9): 2055-2061.

　　[3] Levin VA, Kabra PM, Freeman-Dove MA. Pharmacokinetics of intracarotid artery 14C-BCNU in the squirrel monkey [J]. J Neurosurg, 1978; 48(4): 587-593.

　　[4] Kochii M, Kitamura I, Goto T, et al. Randomized comparison of intra-arterial versus intravenous infusion of ACNU