垂体瘤海绵窦侵袭性与CD34和PTTG表达的关系

作者：胡佳

作者单位：山东大学山东省立医院神经外科， 山东 济南 250021

    【摘要】  探讨海绵窦侵袭性垂体腺瘤的CD34和垂体瘤转化基因（pituitary tumor transforming gene，PTTG）表达特点。方法：收集62例手术治疗的垂体大腺瘤患者资料，按照Knosp标准对肿瘤进行分组，对标本行CD34和PTTG免疫组化染色检查，对染色结果进行统计学比较。结果：62例患者中海绵窦侵袭二级以上者共23例，微血管密度(MVD)平均值为44.04，PTTG超过（+结论：海绵窦侵袭超过Ⅱ级的垂体腺瘤其微血管密度大，PTTG表达强度高，肿瘤具有较强的侵袭性，手术全切困难，术后易复发，术后应给予放射治疗或是药物辅助治疗。

【关键词】  垂体肿瘤 海绵窦 侵袭性 免疫组织化学

      AExpression of CD34 and PTTG relates to pituitary

    adenomas with invasion of the cavernous sinus space

    HU Jia, QU Yuanming, HAN Tao, MU Chengzhi

    (Department of Neurosurgery, Shandong Pronvincial Hospital, Shandong University,

    Jinan 250021, Shandong, China)

    ［ABSTRACT］  Objective: To investigate the characteristics of CD34 and PTTG expression in pituitary adenomas with invasion of the cavernous sinus space. Methods：Sixtytwo patients with large pituitary adenomas were divided into groups based on the Knosp criteria. Expression of CD34 and PTTG was determined by immunohistochemical method. Results： The mean microvascular density (MVD) of tumors which surpassed the laternal marginal level of ICA was 44.04，and their PTTG exceeding (+Conclusion: Pituitary adenomas surpassing the laternal marginal level of ICA have strong expression of MVD and PTTG and strong invasiveness, so  they are  difficult to   remove completely and should be treated with radiotherapy or drugs after surgery.

    ［KEY WORDS］  Pituitary neoplasms; Cavernous sinus; Invasiveness; Immunohistochemistry    垂体瘤是颅内常见肿瘤之一，发病率仅次于脑膜瘤和脑胶质瘤。垂体瘤本身为良性肿瘤，但临床统计却发现垂体瘤术后有较高的复发率。Jefferson于1940年提出了侵袭性垂体瘤的概念，认为侵袭性是肿瘤复发的主要原因，而海绵窦侵袭是最为常见的侵袭方式之一。随后人们对垂体瘤海绵窦侵袭与肿瘤侵袭性的关系进行了大量的研究，Knosp等［1］通过对比研究MRI和手术所见，强调海绵窦侵袭II级以上对侵袭性诊断的意义较大，但病理学方面的研究报道较少。微血管密度（microvascular density, MVD） 和垂体瘤转化基因（pituitary tumor transforming gene,PTTG）是近几年发现的与肿瘤的侵袭性密切相关的指标，本研究对海绵窦侵袭性垂体瘤进行上述两个指标研究，旨在探讨垂体瘤海绵窦侵袭发生的分子机制。

    1  资料与方法

    1.1  临床资料  选取山东省立医院神经外科2004 2006年接受手术治疗的62例垂体大腺瘤患者资料，搜集完整的MRI资料和病历资料。其中，男26例，女36例，年龄15 55岁，平均年龄39岁。按照垂体瘤knospSteiner［1］标准分组，Ⅱ级以上23例，Ⅱ级以下39例。从病理科抽调此组患者石蜡包埋标本。

    1.2  试剂和方法  鼠抗人CD34单克隆抗体及SP试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。羊抗人PTTG多克隆抗体(1∶100)购自北京中山金桥生物技术有限公司。组织标本均以10%甲醛固定, 石蜡包埋,连续切片, 并以苏木素复染。免疫组化采用SP二步法对标本行PTTG与CD34染色。PTTG以已知结肠癌切片作为阳性对照, PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。DAB显色剂显色。CD34用已知的阳性标本切片作为对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。DAB 显色剂显色。

1.3  结果判定  CD34染色标准：分布在血管内皮细胞的棕黄色至棕褐色颗粒。阳性标准按Weidner等方法检测,在高倍镜下任意选取5个视野,计数取平均数作为MVD值。任何呈棕黄色的阳性内皮细胞或内皮细胞簇且与邻近血管、肿瘤细胞和其它结缔组织成份清楚分开即为一个能够计数的微血管。PTTG染色标准:瘤细胞质内出现棕黄色颗粒,背景清晰者为阳性细胞，PTTG以细胞质内出现棕黄色染色颗粒为阳性细胞。光镜下取5个高倍视野(×400) 计数100个肿瘤细胞中的阳性细胞的百分率(PTTG LI) , 0 25%为(+),26% 50%为(+数据处理采用SPSS11.0软件包进行统计分析,对MVD计数和PTTG阳性率各组之间差异采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

    2  结  果

    2.1  PTTG染色结果  阳性颗粒位于细胞质内，为棕黄色（图1C, 图2C）。对62例标本进行染色，有效染色57例，5例标本因为染色失败而去除。海绵窦侵袭Ⅱ级以上21例，Ⅱ级以下36例。海绵窦侵袭Ⅱ级以上组PTTG染色强度达到和超过（+A: MRI显示为KnospⅣ级; B: CD34染色，结果为72; C:PTTG染色，结果为

    2.2  MVD计数  CD34阳性染色位于血管内皮细胞，为棕黄色或棕褐色（图1B，图2B）。海绵窦侵袭Ⅱ级以上组共23例，MVD计数平均为44.04，Ⅱ级以下组共39例，MVD计数平均为33.12，两组比较差异有统计学意义（P=0.039），见表1。3  讨  论

    CD34抗原为一种跨膜细胞表面糖蛋白，可选择性地在造血干/祖细胞中表达，而且也在血管内皮细胞以及其它组织中表达。它具有粘附、加速血管前内皮细胞聚集形成新生血管的功能，可用来检测肿瘤新生血管形成的活跃程度，反映肿瘤的生物学行为特征并有助于判断复发的风险及预后［2］。本研究对不同程度海绵窦侵袭的垂体腺瘤进行研究，发现海绵窦侵袭性垂体腺瘤随着肿瘤侵袭级别的增加，MVD计数逐渐增加，但海绵窦侵袭Ⅱ级以下各组之间计数差异无统计学意义，而海绵窦侵袭Ⅱ级以上和Ⅱ级以下肿瘤其MVD计数存在明显差异。说明海绵窦侵袭达到或是超过Ⅱ级的垂体腺瘤其新生血管数量多，肿瘤侵袭性明显。与Knosp等［1］认为海绵窦侵袭达II级以上对侵袭性诊断的价值较大结果相符。

    PTTG是由Pei等［4］通过PCR方法从大鼠GH4垂体瘤中克隆出来的一个癌基因。它在体内外均有很强的促使细胞向恶性转化的能力。PTTG具有单独作用使细胞转化成瘤的能力,不需要其他癌基因的同时存在和作用［3］。PTTG 在多数人体恶性肿瘤,特别是侵袭力强的恶性肿瘤及侵袭性垂体腺瘤中高表达，是肿瘤侵袭性行为的重要分子标志。本研究结果显示， PTTG表达超过（+〖KG-*3]+）在海绵窦侵袭Ⅱ级以上和Ⅱ级以下组间存在明显差异，表明PTTG的高表达对于肿瘤侵袭性的形成至关重要。实验同时发现PTTG的表达强度与MVD的计数增多有较好的相关性，说明PTTG可能通过促进肿瘤组织新生血管形成致肿瘤呈现侵袭性生物学行为，与以往文献的报道较为相符［3，4］。

    海绵窦侵袭未超过颈内动脉外侧缘的垂体瘤其MVD计数少，PTTG的表达强度低，说明这部分垂体腺瘤虽然向海绵窦内生长，但并不具备侵袭性的生物学行为，临床资料的积累研究也证实了本研究结果，究其原因与局部的解剖特点有关。Joaquim等［5］报道垂体腺瘤海绵窦内颈内动脉包绕超过45％具有确诊意义。顿志平等［6］则认为肿瘤包绕颈内动脉超过70 %确诊侵袭的意义最大，肿瘤超过颈内动脉外侧连线的诊断意义也较高。解剖研究发现海绵窦内侧壁是海绵窦周壁最薄弱的部位，其厚度只有（156.9±32.7）μm，仅有其他部位的1/5 1/9厚，且HE染色也发现内侧壁的胶原纤维明显较海绵窦上壁和外侧壁薄［7］，另有部分患者存在先天性的缺口，正常垂体组织或是肿瘤组织均可以经过缺口突入海绵窦腔内。因此垂体腺瘤向海绵窦内生长并非是侵袭性所致［8］。

   总之，本次研究结果证实CD34和PTTG的高表达对肿瘤侵袭性的诊断具有重要的参考价值，尤其是对于局限于鞍内的垂体腺瘤影像学尚未有侵袭性表现时，如果以上两个指标高表达，可怀疑肿瘤具有侵袭性，术后要密切随访，一旦发现复发的征象，立刻给予治疗，为临床早期诊断肿瘤的侵袭性提供有价值的指标。而对于虽然有海绵窦侵袭但上述两个指标低表达的垂体腺瘤，则要考虑局部解剖薄弱导致的假性侵袭，手术时要尽量地全切肿瘤，避免患者接受放射治疗的风险。

【参考文献】  ［1］ Knosp E, Steiner E, Kitz K, et al. Pituitary adenomas with invasion of the cavernous sinus space: A magnetic resonance imaging classification compared with surgical findings［J］. Neurosurgery, 1993, 33(4):610.

［2］ 李 宁,王旭洲,许复郁,等.nm23基因、CD44v6的表达及微血管密度与直肠癌预后的关系［J］.山东大学学报（医学版）,2006,44(11):1?1801?184.

［3］ 从 佳,汪洪义.垂体瘤转化基因（PTTG）研究进展［J］.肿瘤防治研究,2005,32(8):522524.

［4］ Pei L, Melmed S. Isolation and characterization of a pituitary tumor transformation gene (PTTG)［J］. Mole Endocrinol, 1997, 11(4):433441.

［5］ Joaquim O Vieira Jr, Arthur Cukiert, et al.Evaluation of magnetic resonance imaging criteria for cavernous sinus invasion in patients with pituitary adenomas: logistic regression analysis and correlation with surgical findings［J］. Surgical Neurology, 2006, 65（1）:130135.

［6］ 顿志平, 曲元明, 韩 韬，等. 海绵窦侵袭型垂体瘤磁共振诊断系统及其相关因素分析［J］. 医学影像学杂志, 2004, 14(11):882885.

［7］ 王海军,王涤宇,徐 杰.海绵窦内侧壁的应用解剖［J］.解剖学杂志2004,27(3):304306.

［8］ Dolenc VV. The medial wall of the cavernous sinus: Microsurgical anatomy ［J］. Neurosurgery, 2004, 55(2):190.