c-Met与胆石相关性肝内胆管癌的相关性研究

肝内胆管癌是仅次于肝细胞肝癌的第二大肝脏常见恶性肿瘤，恶性程度高，早期临床症状不典型，预后很差。肝内胆管结石是肝内胆管癌重要的致病因素，深人研究肝内胆管结石和肝内胆管癌的关系，对提高胆石相关性肝内胆管癌的预防、早期诊断和治疗水平、改善预后有重要意义。本研究采用免疫组织化学法检测c-Met在肝内胆管癌组织、癌旁胆管组织以及正常肝脏胆管组织中的表达，阐明其与肝内胆管癌临床病理特点的相关性，探讨c-Met作为肝内胆管癌治疗靶点的可能性。

1资料与方法

1.1一般资料收集山东省莱芜市人民医院普通外科2007年6月一2012年6月住院并手术的胆石症合并肝内胆管癌患者、肝血管瘤行肝部分切除手术患者的临床资料。胆石症合并肝内胆管癌患者肿瘤组织及配对癌旁胆管组织蜡块各35例，其中男19例，女16例;年龄(57.9士8.25)岁。对照组20例取自肝血管瘤切除标本正常肝内胆管组织，其中男7例，女13例;年龄3358岁，平均年龄(42.5士7.8岁

1.2检测方法c-Met蛋白免疫组织化学检测试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，5}.,m石蜡切片常规脱蜡，水化，3%过氧化氢浸泡10 min，微波修复抗原，0.02 moL柠檬酸缓冲液(pH=6.0高火煮沸，中火加热15 min，室温自然冷却，滴加一抗，4 0C过夜。次日PBS清洗3遍，每次3 min，滴加二抗，置于室温下1 h,DAB显色，苏木精复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

1.3结果判定每张切片均由2位有经验的病理科医师双盲法阅片，计数差10%以上重新计数。每张切片选取5个有代表性的区域，400倍视野下计数阳性细胞数，计算阳性细胞百分率并判断显色强度阳性细胞百分率:}5%为0分，6%}25%为1分，26%}50%为2分，51%}75%为3分，>75%为4分;显色强度:未着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。2项得分相乘，计算5个高倍视野得分的平均值，按照分数分为4个等级:0}1分阴性卜),2}4分弱阳性(+),5}8分中阳性(++),,9分强阳性(+++)。其中,1分为阴性，>1分为阳性.

1.4统计学处理采用SPSS 11.5统计软件进行分析，行才检验和两样本均数比较t检验。以P,0.05为差异有统计一学意义二

2结果

2.1 c-Met在肝内胆管癌组织、癌旁胆管组织和正常肝内胆管组织中的表达c-Met在肝内胆管癌组织、癌旁胆管组织和正常肝内胆管组织中的表达阳性率分别为68.57%(24/35),77.14%(27/35),10.00%(2/20，表1)肝内胆管癌组织中〔-Met表达与正常肝内胆管组织的表达差异有统计学意义(才=17.51,P=0.00)癌旁胆管组织中c-Met表达与正常肝内胆管组织的表达差异有统计学意义(X'-=23.01,P=0.00)。月干内胆管癌组织中〔Met表达和癌旁胆管组织的表达差异无统计学意义(XZ=0.650,P=0.42)

2.2 c-Met的表达与胆石症合并肝内胆管癌患者临床病理因素的关系c-Met在肝内胆管癌组织中的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05);而与患者是否存在淋巴结转移和肿瘤分化程度有明显相关性(P<0.05，表2);

3讨论

肝内胆管癌发生率占原发性肝癌的5.5%}1}，其恶性程度高，预后差，早期诊断对患者的预后有重要意义。c-Met蛋白是一种由位于染色体7q31区的c-Met原癌基因编码的蛋白产物，为肝细胞生长因子(hepatic growth factor,HGF)受体，具有酪氨酸激酶活性，与多种癌基因产物和调节蛋白相关，参与细胞信息传导、细胞骨架重排的调控，对肿瘤细胞的增殖、分化、运动和转移起关键作用`Z-o HGF是一种由成纤维细胞等间质细胞分泌的具有多种生物学功能的细胞因子，它能够刺激多种上皮、内皮和间质细胞的增殖，刺激血管生成，调节免疫活性，促进细胞移动和侵袭。c-Met所调节的侵犯性生长在生理条件下的组织发生和组织再生以及调控癌组织的侵犯和转移上起着重要作用，HGF/e-Met信号通路在促进胚胎发育，组织器官的修复再生等过程中起重要作用c-Met在正常组织中表达很低，在肿瘤组织中高水平表达，与其配体HGF通过旁分泌或自分泌方式相互作用，或c-Met酪氨酸激酶磷酸化位点发生突变，异常激活下游多种信号转导通路，包括Ras,Alit,STAT,MAP激酶等，直接促进肿瘤细胞增殖、分化、血管生成、抗细胞凋亡，特别对肿瘤浸润、转移起重要作用a。体外实验、动物模型及临床研究已证实，在发病率较高的肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等组织中均有c-Met高表达或突变，并与不良预后高度正相关改。c-Met已被认为是促进肿瘤发生、发展的关键分子，在多种肿瘤组织中过表达，并与肿瘤的侵袭、转移及预后相关[6]本研究发现胆石症合并肝内胆管癌患者组织中C-Met表达与正常肝内胆管组织的表达差异有统计学意义(P<0.05，表明C-Met作为肝内胆管癌的标志有一定意义。癌旁胆管组织中。

c-Met表达与正常肝内胆管组织差异有统计学意义(P<0.05，肝内胆管癌组织和癌旁胆管组织e-Met阳性表达差异无统计学意义(1'>0.05，提示肝内胆管结石与肝内胆管上皮癌变存在相关性。本研究还发现，c-Met在肝内胆管癌组织中的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05，而与患者是否存在淋巴结转移和肿瘤分化程度有明显相关性(P<0.05，提示c-NIet的高表达可以作为高侵袭性肝内胆管癌的分子标志物，c-Met的表达与肝内胆管癌的不良临床病理因素有重要关联，可以用来早期诊断，评估预后，并作为判断其恶性程度的参考。HGF/c-Met信号通路在多种肿瘤的发生和侵袭中均发挥关键作用，而阻断HGF/c-Met可以抑制肿瘤细胞的增生和转移，因此，以c-Met为治疗靶点己成为目前肿瘤治疗研究中的热点，展示了良好的应用前景[7一8。针对c-Met靶向治疗以干预胆石症导致的肝内胆管癌的发生和发展，这可能为未来胆石相关性肝内胆管癌的防治提供一条新的有效途径

参考文献

[1]Nakanuma Y,Harada K,Ishikawa A.Anatomic and molecularpathology of intrahepatic cholangiocarcinoma[J].Journal of Hepato-Biliary-Pancreatic Surgery,2003,(04):265-281.

[2]Trusolino L,Bertotti A,Comoglio PM.MET signaling:principles and functions in development,organ regeneration and cancer[J].Nature Reviews Molecular Cell Biology,2010,(12):834-848.

[3]Garcia S,Dales JP,Charafe-Jauffret E.Overexpression of cMet and of the transducers PI3K,FAK and JAK in breast carcinomas correlates with shorter survival and neoangiogenesis[J].International Journal of Oncology,2009,(01):49-58.

[4]Sawada K,Radjabi AR,Shinomiya N.c-Met overexpression is a prognostic factor in ovarian cancerand an effective target for inhibition of peritoneal dissemination and invasion[J].Cancer Research,2007,(04):1670-1679.

[5]Cecchi F,Rabe DC,Bottaro DP.Targeting the HGF/Met signalling pathway in cancer[J].European Journal of Cancer,2010,(07):1260-1270.

[6]Gaudette F,Raeppel S,Nguyen H.Identification of potent and selective VEGFR receptor tyrosine kinase inhibitors having new amide isostere headgroups[J].Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,2010,(03):848-852.doi:10.1016/j.bmcl.2009.12.099.

[7]Liu XD,Newton RC,Scherle PA.Developing c-MET pathway inhibitors for cancer therapy:progress and challenges[J].Trends in Molecular Medicine,2010,(01):37-45.

[8]Mahtouk K,Tjin EPM,Spaargaren M.The HGF/MET pathway as target for the treatment of multiple myeloma and B-cell lymphomas[J].Biochimica Et Biophysica Acta,2010,(02):208-219.