胃癌组织中核因子κB的表达及临床意义

　　作者：王旭青,张建新　　作者单位：江苏大学附属医院普通外科，江苏 镇江 212001

 　　【摘要】目的研究核因子κB(NFκB)在胃癌组织中的表达及其与肿瘤细胞分化、浸润、淋巴结转移及远处转移等生物学行为的关系。方法： 应用Envision二步法检测78例胃癌及40例癌旁组织石蜡标本中NFκBp65蛋白的表达水平。结果： NFκB在癌组织的表达明显高于癌旁组织，低分化癌组织较高分化、中分化组织中NFκB的表达高;有淋巴结转移的组织较无转移的表达高;浸润程度越深，表达越高;有远处转移的组织较无转移的表达高。结论： NFκBp65蛋白在胃癌中有高表达，并且其在胃癌的发生、转移过程中发挥重要作用，可能成为胃癌治疗的一个新靶点。

　　【关键词】 胃癌; 核因子κB; 免疫组织化学

　　Expression of nuclear factorκB(NFκB) in gastric carcinomas and its clinical significance WANG Xuqing， ZHANG Jianxin (Department of General Surgery， the Affiliated Hospital of Jiangsu University， Zhenjiang Jiangsu 212001， China)

　　[Abstract] Objective: To study the correlation between NFκB expression in gastric carcinoma and noncancerous tissue and clinicalpathological data including tumor differentiation,infiltrating,lymph node metastasis and distant metastasis.Methods： Expression of NFκB was examined in 78 gastric carcinomas by Envision twostep immunohistochemical methods. Results： The staining of NFκB was stronger in gastric carcinomas than in the epithelia cell of noncancerous tissues and was higher in low differentiation cancer cells than well differentiated ones.The cancers with lymph node metastasis or distant metastasis had more enhanced NFκB expression than the cancers without lymph node metastasis or distant metastasis，and the deeper extent of infiltrating,the higher NFκB expression. Conclusion： It was strongly expressed the expression of NFκBp65 in gastric carcinoma. NFκBp65 played an important action in the occurrence and metastasis of gastric carcinoma.It could become a new target of treatment of gastric carcinoma. [Key words] gastric carcinomas; nuclear factorkappa B; immunohistochemistry

　　胃癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，其发生、发展机理尚不明确。近年来研究发现，其与癌基因的激活，细胞过度增殖、凋亡等相关。核因子κB(nuclear factorκB, NFκB)是调节细胞基因转录的关键因子，参与多种相关基因转录调控，在肿瘤发展过程中发挥重要作用[1]，因而日益受到关注。本研究采用Envision二步法检测78例胃癌及40例癌旁组织中NFκBp65蛋白表达水平，以探讨NFκB与胃癌的发生及生物学行为的关系。

　　1 资料和方法

　　1.1 标本及一般资料

　　78例胃癌标本取自2005年1月至2006年12月本院普外科手术切除标本,术前均未接受非甾体类消炎药的治疗及放疗化疗，其中男26例，女52例;年龄31～83岁，中位年龄50.9岁。高中分化腺癌41例，低分化腺癌37例。取距癌组织边缘5 cm外正常组织40例为对照，两组标本均经病理证实。

　　1.2 方 法

　　1.2.1 Envision二步法 NFκBp65多克隆抗体(兔抗人)购自美国CST公司(细胞信号转导公司), Envision检测系统购自DAKO公司。全部标本用中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，分别进行HE染色和免疫组化染色。Envision二步法按说明书操作，PBS代替一抗为阴性对照，已知阳性片为阳性对照。

　　1.2.2 结果判定标准 NFκBp65蛋白染色阳性信号颗粒呈棕黄色，位于胞核和胞质中。高倍镜下(10×40)每张片随机选20个视野，计数阳性细胞数。染色强度与背景无明显差别为(-)，阳性细胞数<25%为(+)，25%～50%为(++)，>50%为(+++)。

　　1.2.3 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件包进行处理。定性资料用χ2检验。

　　2 结 果

　　2.1 NFκB在胃癌及癌旁组织中的表达

　　NFκBp65的表达主要位于胞核和胞质。其在胃癌中的阳性表达率74.36%(58/78)。对照组40例正常组织中有1例阳性。胃癌组织中的NFκBp65蛋白的阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.01)。

　　2.2 NFκB的表达与临床病理特征的关系

　　在37例低分化胃癌组织中，NFκB表达为阳性的有34例(91.8%),在41例中高分化组织中NFκB表达为阳性的共24例(58.5%)，两者有显著性差异(χ2=11.349,P<0.01)。

　　在17例黏膜浸润至浅肌层的癌组织中，NFκB表达阳性7例，在61例有深肌层或全层浸润的癌组织中，表达为阳性的共51例，可见NFκB在深肌层或全层浸润的癌组织中的表达明显高于浸润较浅的组织，有非常显著性差异(χ2=10.282，P<0.01)。

　　在41例有远处转移的癌组织中，NFκB表达为阳性的共35例，37例无远处转移的癌组织中，NFκB表达为阳性的共23例，两组之间NFκB表达的阳性率也有显著性差异(χ2=5.492,P<0.05)。见表1。表1 胃癌组织NFκB的表达与临床病理指标的关系

　　3 讨 论

　　NFκB是1986年Sen等[2]首先从成熟B淋巴细胞核抽取物中检出来的，可与免疫球蛋白的轻链基因增强子κB序列(GGGACTTTCC)特异结合并促使κ链基因转录的核蛋白因子，最常见的二聚体是p50/ReLA(p65)异源二聚体，p65是NFκB活性形式中具有转录激活作用的主要成分，NFκB是一种多向调节功能的转录因子，广泛参与许多基因的转录调控。正常情况下，NFκB与IκB相结合而处于无活性状态。但在许多因素(IL-1，TNFα及LPS等)诱导下，NFκB可被激活并与IκB分离，定位于胞核而不能返回胞质，其功能可异常增高，进而改变细胞正常的信号转导，促进细胞癌变。

　　本研究结果表明，NFκB在胃癌中表达阳性率较高(74.36%)，且多数阳性信号同时出现于胞质和胞核中，表明NFκB活化与胃癌的形成密切相关。推测其原因可能有：①癌基因通过NFκB介导的途径而致癌;②NFκB涉及多种生长因子的转录调节，如造血细胞生长因子和非造血细胞生长因子，这些细胞因子与肿瘤细胞的生长密切相关;③NFκB通过抑制凋亡途径而致癌。本组实验同时表明，非恶性病变胃组织中可出现NFκBp65的微弱表达，反映NFκB处于不断的激活和失活的有序调控中。本组78例胃癌组织中NFκBp65的表达与正常胃组织相比，差异有显著性，说明NFκB在胃癌中过度活化，与Dejardin等[3]研究结果相一致。低分化组、有淋巴结转移及远处转移组的NFκBp65的表达分别高于中高分化组、无淋巴结转移组及无远处转移组，提示NFκBp65表达的高低与胃癌的侵袭和转移有关。

　　本实验表明，在胃癌组织中，NFκBp65蛋白的表达显著高于正常组织;同时其表达强度与癌细胞的侵袭及转移相关。Uetsuka 等[4]证明用NFκB 抑制剂抑制肿瘤细胞后，NUGC3/ 5 Fu/ L 细胞(可耐受5 Fu的一种胃癌细胞)出现明显的凋亡，因此NFκB可能成为治疗胃癌的一个新靶点。

　　【参考文献】

　　[1] Loercher A,Lee TL,Ricker JL, et al.Nuclear factorkappa B is an important modulator of the altered gene expression profile and malignant phenotype in squamous cell carcinoma [J].Cancer Res,2004,64(18):6511-6523.

　　[2] Sen R,Baltimore D.Multiple nuclear factors interact with the immunoglobulin enhancer sequences [J].Cell,1986,46(5):705-716.

　　[3] Dejardin E,Deregowski V,Chapelier M, et al.Regulation of NFkappa B activity by I kappaBrelated proteins in adenocarcinoma cells [J].Oncogene,1999,18(16):2567-2577.

　　[4] Uetsuka H， Haisa M， Kimura M， et al.Inhibition of inducible NFkappa B activity reduces chemoresistance to 5fluorouracil in human stomach cancer cell line[J].Exp Cell Res， 2003，289(1)： 27-35.