MMP9和CD15s与胃癌血管生成的相关性研究及其临床意义

　　作者：尚培中,朱习琴,苗建军,贾国洪,李晓武　　作者单位：中国人民解放军第251医院普通外科，河北 张家口 075000

　　【摘要】 目的：探讨基质金属蛋白酶9(MMP9)和唾液酸化Lewis X(CD15s)抗原与胃癌侵袭转移的相关性。方法：采用CD105，MMP9，CD15s进行免疫组化SP法染色，对47例胃癌根治性切除手术标本病理组织切片进行标记，检测CD105的微血管密度(MVD)，并对MVD与MMP9、CD15s的关系进行统计分析。结果：MMP9、CD15s表达都呈阳性的胃癌组织微血管密度高于MMP9和CD15s单阳性及二者均阴性的胃癌组织。结论：MMP9高表达有利于癌组织局部浸润，CD15s高表达有利于癌细胞血行转移，MMP9及CD15s检测对临床诊治胃癌及判断预后具有一定意义。

　　【关键词】 胃肿瘤,基质金属蛋白酶9,唾液酸,Lewis X抗原

　　【ABSTRACT】 Objective：To investigate the relationship between matrix metalloproteinases9(MMP9)and sialyl Lewis X(CD15s)antigen in invasion and metastasis with gastric carcinoma.Methods：Expressions of CD105,MMP9 and CD15s monoclonal antibody in 47 cases with gastric carcinoma having radical surgery were evaluated by SP immunohistochemical staining.The expression of microvessel density(MVD)marked with CD105 was detected.Correlation between MVD and MMP9,CD15s was also statistically analyzed.Results：The MVD in both MMP9 and CD15s positive expression was higher significantly than that of MMP9 or CD15s positive expression along,and it was also significantly higher than negative expression of MMP9 and CD15s.Conclusion：MMP9 is a marker for invasion and CD15s is a marker for metastasis in gastric carcinoma.

　　【KEY WORDS】 Stomach neoplasms;Matrix metalloproteinases9;Sialic Acids; Lewis X Antigen

　　胃癌的局部浸润和远处转移是影响患者生存的重要因素。近年研究发现，基质金属蛋白酶9(MMP9)和唾液酸化Lewis X(CD15s)在肿瘤侵袭和转移过程中发挥了重要作用。作者采用免疫组织化学方法,用血管内皮细胞特异标志物CD105(Endoglin)测定胃癌组织的微血管密度(MVD)，分析MMP9与CD15s表达在胃癌微血管生成中的作用及关系，并结合临床随访资料,探讨其表达与胃癌侵袭转移及患者预后的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 随机收集解放军第251医院2004～2006年行胃癌根治性切除术患者的临床资料和手术切除标本47例，均经病理证实。术前均未行化疗及其他抗肿瘤治疗。

　　1.2 免疫组化染色 每个病理标本作5μm连续切片2张，分别进行苏木精—伊红染色及CD105、MMP9、CD15s免疫组织化学染色。采用SP法，操作及结果判定参照试剂盒说明书。一抗采用鼠抗人CD105，MMP9、CD15s单克隆抗体，二抗生物素化兔抗鼠IgG及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

　　1.3 染色结果判定 先在低倍镜(40×，100×)下全面观察切片以确定肿瘤内血管密度区，再在高倍镜(400×)下计数上述4个不同区域的血管数，取其平均值作为MVD。计数时凡看到单个孤立的或多个紧密排列的内皮细胞，不论有无血管腔,只要和邻近的微血管、肿瘤细胞或其他结缔组织分开，就记为1个微血管数。是否形成明显管腔，或腔内有无红细胞的存在不作为判断标准。但肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞直径和血管不计数。癌细胞胞浆内呈棕黄色颗粒者为MMP9、CD15s阳性细胞，切片中癌细胞阳性率≥10%为阳性病例，≤10%者为阴性病例。

　　1.4 统计学处理 MVD值以x±s表示。不同组间MVD比较采用方差分析。

　　2 结果

　　将MMP9、CD15s均阳性者记入双阳性组，把只有两者之一阳性者记入单阳性组，将两者均阴性者记入双阴性组。三组MVD均值见表1。三组间差异有统计学意义(F=26.5,P<0.05)。

　　2008年2月尚培中等：MMP9和CD15s与胃癌血管生成的相关性研究及其临床意义第1期2008年2月河北北方学院学报(医学版)第1期表1 胃癌组织CD105标记的MVD与MMP9、CD15s表达的关系注：与双阳性组相比*P<0.05

　　3 讨论

　　实体肿瘤的生长依赖于血管的形成，其过程有两个明显不同的阶段：即从无血管的缓慢生长阶段转变为有血管的快速增殖阶段，血管的生成使肿瘤能够获得足够的营养物质。当肿瘤的直径小于2mm时，它主要依靠扩散在细胞周围的营养物质和氧气生存;随着瘤体的增大肿瘤本身或宿主组织将建立起新生血管网以供给瘤体营养，这些新形成的肿瘤内血管网同时又成为恶性实体肿瘤浸润性生长和远处转移的通道。原发瘤首先自身增殖，然后侵入薄壁的肿瘤血管腔内形成癌栓，滞留于靶器官的微小血管中，瘤细胞进一步穿出血管，在新的部位增殖形成转移灶。可见在肿瘤侵袭与转移过程中，无论是起始还是终末阶段，血管的生成均发挥着重要作用。近几年来，关于肿瘤的基础及临床研究取得了很大进展，MVD是反映恶性肿瘤生物学行为的重要参数，文献报道它与乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌等多种肿瘤的转移、复发和预后关系密切[1]。MMP9和CD15s在肿瘤组织中高表达与肿瘤的生长、侵袭及转移关系密切[2，3]，但它们在肿瘤血管生成中的相互关系报道较少。

　　CD105为一种同型二聚体细胞膜糖蛋白，是调节转化生长因子β受体复合物的成分之一，在正常人体组织中的基质细胞、造血细胞及活跃的单核细胞中有微弱表达，而在胎盘的合体滋养层及新生血管内皮细胞中有很强的表达，是一种特异性较强的活性血管内皮细胞标记物，对调节血管的发生、发展有重要意义，通过用其标记的微血管密度更能准确反应肿瘤新生血管。基质的酶类中基质金属蛋白酶类是主要的直接作用者，MMP9不但可以酶解基底膜主要成分Ⅳ型胶原，还能通过酶解细胞间基质成分和降解细胞外基质促进肿瘤侵袭与转移。CD15s抗原是表达在胚胎组织及肿瘤细胞表面上的含有寡聚糖的一组碳水化合物抗原,为细胞粘附分子选择素(CD62)所识别的比较确定的一个配基，也是单唾液酸神经节糖苷脂CA199的同分异构体，已研究证实，在大肠癌、乳腺癌等细胞表面CD15s高强表达与肿瘤的发生发展、侵袭转移和预后密切相关[3，4]。本实验通过对CD105所标染的胃癌微血管记数及与MMP9、CD15s之间关系分析，发现MMP9与CD15s双阳性胃癌MVD高于单阳性胃癌的MVD，可能与MMP9降解细胞外基质消除了基质中抑制内皮细胞增殖的物质，CD15s促进内皮细胞增殖表达CD62，使二者协同促进了肿瘤细胞的血行转移。因此认为MMP9阳性表达，能酶解细胞间基质成分和降解细胞外基质，引起更强的肿瘤血管增殖及肿瘤细胞局部浸润;CD15s阳性表达，通过与CD62结合促进肿瘤细胞血行转移，其阳性表达越强烈，胃癌转移率越高，患者5年生存率越低。MMP9、CD15s同时阳性表达，是胃癌预后不良的重要标志，联合检测对胃癌的诊断治疗及预后评估具有重要临床意义。

　　【参考文献】

　　1 Weidner N.Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer[J].Am J Pathol,1995,147(1):919

　　2 朱宝和,詹文华,刘弋,等.PTEN与基质金属蛋白酶在胃癌组织中的表达及意义[J].中国普通外科进展，2006,9(1):3336

　　3 尚培中,谷化平.CA199及其同分异构体CD15s在大肠癌表达的对比研究[J].中国现代普通外科进展,2004,7(5):289291

　　4 谷化平,尚培中,倪灿荣.CD15s抗原在乳腺癌中的表达及意义[J].中国普外基础与临床杂志，2002，9(5):313315