胃癌组织β连环蛋白与尾侧型同源转录因子2表达的临床意义

　　作者：黄知果,孙维佳,何剪太,张阳德　　作者单位：中南大学湘雅医院：1急诊科，2普外科，3卫生部肝胆肠外科研究中心，湖南 长沙 410008

　　【摘要】目的：探讨胃癌β连环蛋白(βcatenin)与尾侧型同源转录因子2(CDX2)的表达与浸润、转移及预后的关系. 方法： 胃癌患者80例，以正常胃黏膜12例作为对照，应用SP免疫组化方法检测βcatenin和CDX2的表达. 结果： 正常胃黏膜上皮中βcatenin全部正常表达，而在胃癌组织中表达减弱、缺失或分布异常. CDX2则在正常胃黏膜上皮中不表达. βcatenin和CDX2的表达与胃癌组织的分化程度、肿瘤生长方式、癌细胞浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.01). 当患者βcatenin阳性表达/CDX2阳性表达时，术后5 a生存率最高(P<0.05). 结论： βcatenin, CDX2与胃癌的发生、浸润、转移有关.

　　【关键词】 β连环蛋白,尾侧型同源转录因子2,胃肿瘤;预后

　　【Abstract】 AIM: To analyze the association of the expression of βcatenin and CDX2 with invasion, metastasis, and prognosis of human gastric carcinoma. METHODS: Eighty patients with gastric carcinoma and 12 normals as control were examined for the expression of βcatenin and CDX2 by SP immunohistochemistry. RESULTS: βcatenin was present in all normal gastric mucomembranous epithelium, but CDX2 was not. βcatenin was decreased, deficient, or abnormaliy distributed in gastric carcinoma tissues. These two markers were associated with the differentiation, invasion, metastasis of gastric carcinoma(P<0.01). The 5year survival rate was highest in patients with coexpression of βcatenin and CDX2 (P<0.05). CONCLUSION: The expression of CDX2 or βcatenin may be associated with the genesis, invasion, and metastasis of gastric carcinoma.

　　【Keywords】 βcatenin; CDX2; stomach neoplasms; prognosis

　　0引言

　　胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一. 近年来的诸多研究表明多重遗传变化与胃癌的发生、发展密切相关. β连环蛋白(βcatenin)是上皮型钙黏素/连环蛋白复合物的重要成分之一，是保证上皮型钙黏素行使黏附功能所必需的蛋白质. 该复合物下调将导致的黏附功能丧失，是许多上皮性恶性肿瘤浸润进展的重要步骤. 有研究表明，βcatenin在乳腺癌和结肠癌中表达异常，并与癌组织的浸润和转移有关[1]，但对胃癌组织的影响尚未见详细报道. 尾侧型同源转录因子2 (caudal type homeobox transcription factor2, CDX2) 是人体中肠道特异性表达的核转录因子，在肠黏膜上皮细胞的发育及保持其形态、结构特征中起着重要作用. 大量研究认为CDX2在结直肠肿瘤发生过程中扮演“抑癌基因”的角色，并与肿瘤的生物学特性及患者预后密切相关[2]，而关于CDX2对胃癌发展作用和意义的研究报道不多. 因此，我们采用免疫组织化学方法检测80例胃癌组织中βcatenin和CDX2的表达情况，探讨二者与胃癌发生、浸润、转移及预后的关系.

　　1对象和方法

　　1.1对象

　　200006/200206胃癌手术病理学诊断标本80(男55，女25)例;年龄53.6±10.3 (32～75)岁. 患者术前均未行化放疗. 均被随访，时间5～60 mo. 分别根据国际胃癌新TNM分期标准、Lauren分类法、胃癌组织学分类标准及淋巴转移情况对病例进行分组. 正常对照组标本12 例，为距胃癌边缘10 cm以上的胃黏膜组织，经病理学检查证实无癌肿浸润.

　　1.2方法

　　采用免疫组织化学染色SP法，标本经40 g/L中性多聚甲醛固定, 石蜡包埋，4 μm 连续切片，70℃烤片15 min，梯度乙醇脱水，30 mL/L H2O2灭活内源酶，PBS 漂洗5 min×3次. 正常羊血清室温孵育15 min. 滴加20～30 μL PBS 稀释的一抗(1∶5的HECD1mAb) 4℃过夜. PBS 漂洗5 min ×3 次. 二抗、三抗依次37 ℃孵育45 min，PBS 漂洗5 min×3次. DAB显色5～10 min，自来水充分洗涤，苏木素复染5 min，稀盐酸淡化30 s，冲洗5 min. 脱水、透明、封片，镜检. 设阳性对照, 用PBS替代第一抗体作阴性对照. 鼠抗人βcatenin mAb(工作浓度1∶50，购自美国抗体诊断公司)、鼠抗人CDX2 mAb(工作浓度1∶50，购自美国抗体诊断公司)和免疫组化采用链霉菌抗生素蛋白过氧化物酶法染色(SP法) 试剂盒均为Santa Cruz 公司生产，购自北京中山生物技术有限公司. 取10个高倍视野，以阳性癌细胞占观察癌细胞总数的百分比作为阳性细胞率. 细胞膜呈棕黄色颗粒染色者为βcatenin阳性细胞，阳性率>10%为阳性，否则为阴性;CDX2 蛋白表达阳性为胞核出现棕黄色颗粒，超过40%细胞CDX2 阳性表达记为阳性，否则记为阴性[3].

　　统计学处理: 所有数据用SPSS13.0处理, 列联表资料采用χ2检验与Fishers法分析. P<0.05为差异具有统计学意义.

　　2结果

　　2.1βcatenin和CDX2蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系正常胃黏膜组织上皮细胞全部正常表达βcatenin，表现为细胞膜或胞区近胞膜处呈棕褐色，同质和极性分布，未见异常着色;但CDX2不表达. 在胃癌细胞中，βcatenin出现异常表达，细胞膜着色淡或不着色，且极性分布消失;CDX2则主要表达于细胞核，呈棕黄色. βcatenin和CDX2的表达与胃癌患者年龄、性别、肿瘤大小及有无血管侵害均无关(P>0.05). 而与胃癌组织的Lauren分型、淋巴转移程度、TNM分期、癌组织分化程度及肿瘤浸润深度均有关(P<0.05，表1). 表1βcatenin和CDX2蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系(略)

　　2.2βcatenin和CDX2与胃癌5 a生存率的关系80例胃癌患者5 a总生存率为32.5%，当βcatenin与CDX2联合阳性表达时，患者的生存率最高，达到64.3%;而当二者均为阴性表达时，患者的生存率最差(7.1%). βcatenin(-)/CDX2(+)为23.1%，而βcatenin(+)/Cdx2(-)为48.0%.

　　3讨论

　　βcatenin是连环蛋白家族的重要成员之一[4]. 参与上皮细胞黏附和WNT信号传导. 当βcatenin基因的变异或βcatenin的异位磷酸化致使上皮型钙黏素/连环蛋白复合物和细胞骨架脱离，细胞黏连松散，两种作用共同导致肿瘤细胞的浸润转移[5]. 本研究中，正常胃黏膜100 %表达βcatenin. 在高、中、低分化型癌中，βcatenin阳性表达率呈逐渐减少趋势，说明分化越低的胃癌，βcatenin阳性表达率越低，提示βcatenin的低表达与肿瘤的分化程度密切相关. 更重要的发现是，βcatenin的表达与肿瘤的浸润深度、TNM分期、有无淋巴结转密切相关. 提示βcatenin参与了胃癌细胞的移位、浸润、转移.

　　CDX2为同源异型盒基因(homeobox gene) 家族的成员之一，其产物特异性地表达于小肠和结肠上皮，在正常人体发育过程中对肠上皮细胞的分化和增殖起调节作用. CDX2为抑癌基因，可能与癌基因突变、细胞周期调控有关[6]. 虽然在正常胃黏膜上皮中CDX2呈阴性表达，但在绝大多数胃黏膜肠化生中呈阳性表达，提示CDX2蛋白在胃黏膜细胞中的异位表达是发生胃黏膜肠化生的重要起始事件，而肠化生又是胃癌的癌前病变. 我们发现肠型胃癌中CDX2呈现高表达，且高于混合型胃癌. 此外，CDX2 蛋白表达强度随胃癌组织的分化程度变差而减弱，说明CDX2 异常表达与胃癌密切相关. 影响胃癌患者预后的关键因素就是肿瘤浸润胃壁的深度和淋巴结转移数量. 本研究表明高CDX2 蛋白表达的胃癌较低表达患者的侵袭能力差，且后者常出现淋巴结转移，这一现象可能与CDX2 蛋白表达缺失有利于癌细胞的免疫逃逸有关. CDX2 蛋白表达强度随癌细胞系分化由好到差呈逐渐减少的趋势. 据此可以认为检测胃癌组织中CDX2 蛋白的表达状况可能有助于判断胃癌的恶性程度及患者预后转归.

　　通过综合分析βcatenin和CDX2蛋白的联合表达与胃癌患者5 a生存率的关系，我们发现，两种蛋白在患者胃癌组织中同时表达时，其生存率大大提高，较总体水平高出31.8%，有显著统计学意义. 可见，βcatenin和CDX2蛋白与胃癌的发生、浸润、转移有关，可联合检测，作为新的胃癌标记物，有利于判断病情进展及预后.

　　【参考文献】

　　[1]Lim SC, Lee MS. Significance of Ecadherin/βcatenin complex and cyclin D1 in breast cancer [J]. Oncol Rep, 2002, 9: 915-928.

　　[2]Almeida R, Silva E, SantosSilva F, et al. Expression of intestinespecific t ranscription factors, CDX1 and CDX2, in intestinal metaplasia and gastric carcinomas [J]. J Pathol, 2003, 199(1) : 36.

　　[3]Bankfalvi A, Terpe HJ, Breukelmann D, et al. Immunophenotypic and prognostic analysis of Ecadherin and βcatenin expression during breastcarcinogenesis and tumor progression: Acomparative study with CD44 [J]. Histopathology, 1999, 34 :25-341.

　　[4]李恒平，童仕伦，张倩.β连环蛋白和核转录因子在胃癌中的表达及意义[J]. 武汉大学学报:医学版, 2005, 26(2)：243-246.

　　[5]王莉，张帆，吴平平, 等. 上皮型钙黏素和连环蛋白表达与胃癌的关系[J]. 上海第二医科大学学报, 2005, 25(7)：675-678.

　　[6]Seno H, Oshima M, Taniguchi MA, et al. CDX2 expression in the stomach with intestinal metaplasia and intestinaltype cancer: Prognostic implications. [J] Int J Oncol, 2002, 21:769-774.