RECK和VEGF-C在胃癌组织中的表达和临床意义

　　作者：郭琳　宋国庆　王强　 作者单位：中国医科大学附属盛京医院　胃肠外科　(辽宁　沈阳　110004)

　　【摘要】 目的：研究RECK(reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazal motifs)和血管内皮生长因子-C(vascular endotnelial growth factor C,VEGF-C)在胃癌及正常胃组织中的表达，探讨二者在胃癌的发生、发展、浸润和转移中的作用。方法：选择临床病理资料齐全的胃癌蜡块标本158例为实验组，另取正常胃黏膜标本15例为对照组。采用SP免疫组织化学方法检测RECK、VEGF-C在其中的表达并进行χ2检验和相关分析。结果：胃癌组织中RECK呈低表达，且肿瘤浸润深、有淋巴转移、临床分期高、病理分化低时降低;VEGF-C呈高表达，且肿瘤直径大、肿瘤浸润深、有淋巴转移、临床分期高、病理分化低时增高。胃癌中RECK与VEGF-C的表达呈负相关。结论：胃癌组织中RECK呈低表达，VEGF-C呈高表达，检测二者的表达对胃癌的诊断、防治和预后的判断有指导意义。

　　【关键词】 胃肿瘤·RECK·血管内皮生长因子·免疫组织化学

　　【ABSTRACT】 Objective: To study the expression of reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazal motifs (RECK) and VEGF-C in gastric cancer and normal gastric tissues and to discuss the role of them in the happening, development, invasion and metastasis of gastric cancer. Methods: 158 cases of gastric carcinoma specimens were selected from paraffin wax embodied specimens with full clinicopathological data, and another 15 cases of normal gastric mucosa specimens 　　胃癌是严重威胁人类健康的主要疾病之一，其治疗失败的原因是肿瘤细胞从原发部位通过血管、淋巴管等向其他器官扩散和转移。RECK(reversion-inducing cysteine-rich protein with Kazal motifs)基因是近年来发现的新型基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase， MMP)抑制剂，可在转录后水平抑制多种MMP的表达，从而抑制肿瘤的侵袭及转移。血管内皮生长因子-C(vascular endotnelial growth factor C，VEGF-C)可介导淋巴管内皮细胞增殖，促进肿瘤淋巴转移。在多种恶性肿瘤中均可以检测到RECK表达缺失及VEGF-C过度表达。本研究通过检测胃癌组织中RECK和VEGF-C的表达，探讨二者在胃癌的发生、发展、浸润和转移的作用及二者间的关系。

　　1　资料与方法

　　1.1　一般资料

　　选择2001年9月—2003年6月158例经手术切除、病理组织学检查确诊为胃腺癌的蜡块标本为实验组，术前均未行化疗或放疗。其中男108例，女50例;年龄38～78岁，中位年龄60.4岁。肿瘤直径<5 cm者108例，≥5 cm者50例;浸润深度在浆膜下者44例，浸透浆膜者114例;组织学分型：高分化62例，中分化43例，低分化53例;局部淋巴结无转移者85例，有转移者73例。根椐1997年国际抗癌联盟(IUCC)制定的TNM分期标准进行临床分期：Ⅰ期35例，Ⅱ期41例，Ⅲ期47例，Ⅳ35例。另取胃溃疡或十二指肠溃疡手术切除的组织块15例为对照组，经病理观察证实为正常胃黏膜组织且排除重度不典型增生，其中男10例，女5例;年龄44～77岁，中位年龄58.2岁。

　　1.2 主要试剂

　　浓缩型RECK兔抗人mAb购自北京中山生物制品有限公司;兔抗人VEGF-C抗体购自美国SantaCRUZ公司;S-P试剂盒及DAB显色试剂盒购自福州市迈新生物技术开发公司(AR1022)。

　　1.3　方法

　　常规苏木紫-伊红(HE)染色，确定标本的组织分化程度。采用免疫组织化学方法检测RECK、VEGF-C在胃癌及正常胃组织中的表达。以细胞质内出现明显棕黄色颗粒的阳性细胞占同类细胞的百分比为阳性细胞率。根据阳性细胞率，将染色结果进行半定量测定：阴性(-)，阳性细胞率<5%;弱阳性(+)，阳性细胞率为5%～25%;阳性(++)，阳性细胞率为26%～50%;强阳性(+++)，阳性细胞率>50%[1];规定(+～+++)为阳性，(-)为阴性。

　　1.4　统计学处理

　　采用SPSS13.0统计软件包进行分析。各相关因素的差异性比较采用χ2检验，各指标间的相关性研究采用相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　RECK在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达

　　RECK在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为100%;在胃癌组织中的阳性表达率为51.9%，明显低于在正常胃黏膜组织中的表达(P<0.01)。RECK的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴转移、临床分期呈负相关(P<0.05)，随肿瘤浸润深度的加深、淋巴转移的产生、临床分期的提高而降低;与肿瘤的病理分化程度呈正相关(P<0.05)，随肿瘤病理分化程度的降低而降低;与肿瘤大小无相关性(P>0.05，表1)。

　　2.2　VEGF-C在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达

　　VEGF-C在正常胃黏膜组织中的阳性表达率为13.3%;在胃癌组织中的阳性表达率为64.6%，显著高于在正常胃组织中的表达(P<0.01)。VEGF-C的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、临床分期呈正相关(P<0.05)，随肿瘤直径的增大、浸润深度的加深、淋巴转移的产生、临床分期的提高而增加;与肿瘤的病理分化程度呈负相关(P<0.05，见表1)，随肿瘤病理分化程度的升高而降低。

　　2.3　胃癌组织中RECK和VEGF-C表达的相关性

　　胃癌组织中RECK与VEGF-C的表达呈负相关(P<0.01，r=-0.632，表2)。

　　3　讨论

　　RECK是1998年日本学者Takahashi等[2]将v-Ki-ras基因转染至小鼠纤维原细胞(NIH3T3)而克隆到的cDNA中分离出的新基因。RECK基因定位于人染色体9p12-13，整个基因的长度约87 kb，其中包含21个外显子，20个内含子，共有13个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)，其中4个位于基因编码区域(外显子1，9，13，15)，而另外9个位于内含子区域(内含子5，8，10，12，15，17)，其转录子大小为4.6 kb。研究表明，在无RECK基因表达的情况下，MMP的过表达可导致细胞外基质(extracellular Matrix，ECM)过度降解，血管及周围组织完整性降低，促进新生血管形成;相反，RECK基因的高表达可抑制新生血管的形成[3]。因此，RECK基因及MMP的相互调节对于肿瘤新生血管形成起着重要作用。韩国学者Song等[4]对胃癌进行研究，发现102例胃癌组织和11种胃癌细胞系中分别有52%、81.8%的RECK表达缺失，并发现RECK的表达同肿瘤的大小、分期和淋巴管淋巴结的转移呈负相关。张勇等[5]采用RT-PCR检测47例胃癌患者的肿瘤组织和正常胃组织中RECK基因及MMP-9 mRNA的表达，发现47例胃癌患者正常组织中RECK mRNA的表达量为0.793±0.012，肿瘤组织中的表达量为0.312±0.076，两者差异有统计学意义;RECK的表达与肿瘤浸润深度和周围脏器侵犯密切相关;RECK表达水平高的患者的2年生存率显著高于RECK表达水平低者。本研究结果显示RECK在胃癌组织中的阳性表达率为51.9%，明显低于正常胃黏膜组织中的表达;RECK的表达与胃癌的肿瘤浸润深度、淋巴转移、临床分期呈负相关，随肿瘤浸润深度的加深、淋巴转移的产生、临床分期的提高而降低;与肿瘤的病理分化程度呈正相关，随肿瘤病理分化程度的降低而降低。另有文献报道RECK在直肠癌、肝癌、胰腺癌等消化道肿瘤中表达下降[6-8]，由此可推测RECK基因低表达的肿瘤具有更强的侵袭能力，其表达与肿瘤患者的预后密切相关。

　　VEGF-C基因定位于4q34，属于血管内皮生长因子家族，作为配体可与VEGFR-2(KDR)及VEGFR-3(flt-4)结合[9]。VEGF-C是肿瘤淋巴管生成的主要调节因子，肿瘤细胞分泌的VEGF-C与表达于淋巴管内皮细胞的VEGFR-3特异性结合后，可以诱导淋巴内皮细胞增殖、迁徙，调控淋巴管内皮细胞新生、肿瘤间质淋巴管生成以及原发灶肿瘤细胞和周围淋巴管内皮细胞之间相互旁分泌的关系，在淋巴转移的发生中起着重要作用[10-11]。研究显示，胃癌组织中VEGF-C表达程度与胃癌浸润深度、淋巴管侵袭及淋巴结转移显著相关，高表达VEGF-C的胃癌组织中淋巴管计数明显增加，更易发生淋巴结转移[12-13]。Yonemura等[14]证实VEGF-C主要由癌细胞产生，在VEGF-C阳性的肿瘤中VEGFR-3的阳性表达率明显高于VEGF-C阴性的肿瘤。明学志等[15]发现胃癌组织中VEGF-C的表达与肿瘤病灶大小、浸润深度、淋巴结转移和临床TNM分期密切相关，表明胃癌组织可通过产生VEGF-C和VEGFR-3的自分泌作用促进病变的进展和淋巴转移。本研究发现VEGF-C在胃癌组织中的阳性表达率为64.6%，显著高于在正常胃黏膜组织中的表达;VEGF-C的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关，随肿瘤直径的增大、浸润深度的加深、淋巴转移的产生、临床分期的提高而增加;与肿瘤的病理分化程度呈负相关，随肿瘤病理分化程度的升高而降低。

　　有研究证实肿瘤组织中微血管密度与RECK基因的表达呈明显的负相关[16-17]，而这种负相关性只发生在VEGF明显高表达的病例中，也就是说VEGF的表达越高，RECK基因对肿瘤的影响越大，因此RECK能够抑制VEGF诱导的血管生成作用。Li等[18]通过对食道鳞状细胞癌的研究发现RECK基因在肿瘤血管生成方面的抑制作用直接关系到患者的预后，RECK与VEGF呈明显的负相关，在RECK基因表达降低的病例中VEGF呈现出显著的升高，而VEGF具有明显的促进肿瘤血管生成的作用，从而为肿瘤的发展和转移提供了依据，同时也证实了RECK基因和VEGF具有相关性，RECK基因能够通过影响VEGF信号传导通路而达到抑制食道鳞状细胞癌血管生成的作用。本研究发现，胃癌组织中RECK与VEGF-C的表达呈负相关，RECK的表达随VEGF-C表达的升高而降低，提示在胃癌组织中RECK对VEGF-C表达有抑制作用，从而抑制VEGF-C/VEGFR-3通路促进淋巴管生成及淋巴结转移的作用。

　　总之，RECK、VEGF-C的表达在胃癌的发生、发展、浸润和转移过程中起重要作用，检测RECK、VEGF-C在胃癌中的表达对胃癌的诊断、防治和预后的判断有指导意义，也为研究新的抗肿瘤药物提供了思路。

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