STAT5在乳腺癌组织中的表达及临床意义

　　作者：张秀忠 ，任泽强 ，张静 作者单位：1.徐州医学院附属医院普外科，江苏徐州221002; 2.徐州市第三人民医院乳腺外科，江苏徐州221005

　　【摘要】 目的 研究STAT5在乳腺癌组织中的表达，探讨其与临床病理因素和预后的关系。方法 运用免疫组化S-P法检测正常乳腺组织及90例乳腺癌组织中STAT5的表达情况，分析STAT5与乳腺癌患者临床病理因素的关系及预后价值。结果 STAT5在10例正常乳腺组织中均为阴性表达。STAT5在乳腺癌组织中的阳性表达率为73.3%(66/90)，其表达水平在不同肿瘤大小、淋巴结转移数、临床分期及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)状态之间有显著性差异(P<0.05)。改良根治术后总体3年、5年生存率分别为88.9%(80/90)、80.0%(72/90)，STAT5表达阳性组和阴性组其生存率的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 STAT5在乳腺癌组织中的阳性表达在乳腺癌的发生和侵袭转移中起重要作用，但其与预后无明显关系。

　　【关键词】 乳腺癌; STAT5; 免疫组化; 预后

　　The expression of STAT5 in the tissue of breast cancer and its clinical significance

　　ZHANG Xiuzhong1*, REN Zeqiang1, ZHANG Jing2

　　(1.Department of General Surgery, The Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College, Xuzhou, Jiangsu 221002, China;

　　2. Department of Breast Surgery, The Third People's Hospital of Xuzhou, Xuzhou, Jiangsu 221005, China)

　　Abstract： Objective To investigate the expression of STAT5 in breast cancer tissues and to explore its relationship with clinicopathological factors and prognosis. Methods The expression of STAT5 in normal breast tissue and breast cancer was determined by immunohistochemical method, and the relationships were analyzed between STAT5 and clinicopathologic factors and prognosis in 90 cases of breast cancer. Results The expression of STAT5 in normal breast tissue was negative, while the positive expression rate of STAT5 in breast carcinoma was 73.3% (66/90). The expression of STAT5 was significantly correlated with tumor size, lymph node metastasis, clinical staging, estrogen receptor (ER) and progesterone receptor (PR) status (P<0.05). The 3-year and 5-year overall survival rates were 88.9% (80/90) and 80.0% (72/90) subsequent to modified radical mastectomy. The survival rates of positive and negative group of STAT5 expression were not correlated (P>0.05). Conclusion The positive expression of STAT5 in breast cancer tissues may play an important role in the occurrence, invasion and metastasis of breast cancer, while it is not significantly correlated with the prognosis.

　　Key words：breast carcinoma; STAT5; immunohistochemistry; prognosis

　　已换 STAT5是信号转导子和转录激活子家族( signal transducers and activators of transcription, STATs)的重要成员，该通路接受生长因子、细胞因子等细胞外信号刺激，作用于细胞核内特异的DNA片段，调控靶基因转录，影响细胞的增殖、分化和凋亡，参与肿瘤的发生和演进[1,2]。STAT5 信号转导通路与肿瘤关系的研究中最常涉及的是血液系统肿瘤，实体瘤中以前列腺癌、头颈癌为多。本研究采用免疫组化S-P法检测STAT5在人乳腺癌中的表达情况，探讨其表达与乳腺癌的发生、恶性程度、侵袭转移及预后的关系。

　　1 对象和方法

　　1.1 研究对象 收集徐州医学院附属医院1999年1月—2001年12月行乳腺癌改良根治术，且有确切随访资料的患者手术切除标本 90例，均经病理检查证实为乳腺癌，术前未经任何化疗和其他抗肿瘤治疗。患者均为女性，年龄29～76岁，中位年龄49岁。按国际抗癌联盟UICC分期：0期3例，Ⅰ期18例，Ⅱ期56例，Ⅲ期12例，Ⅳ期1例。90例乳腺癌中有淋巴结转移41例，无淋巴结转移49例。同时选取10例正常乳腺组织作为对照。

　　1.2 免疫组化试剂及方法 兔抗人STAT5多克隆抗体购自美国ADL，SP试剂盒及DAB 染色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm连续切片，分别行苏木精-伊红染色以及STAT5免疫组织化学染色。一抗为兔抗人 STAT5多克隆抗体，稀释度为1∶200。免疫组化采用S-P法，染色前用微波炉进行抗原修复，DAB显色，苏木素复染，操作严格按照说明书进行。免疫组化对照：已知阳性切片作阳性对照，用PBS替代一抗作为空白对照，替代对照用正常兔血清代替一抗。每个染色流程均设有对照作为染色质量控制标准。

　　1.3 随访及资料分析 随访所有病例，方式为信函、电话、上门随访。随访时间5～7年，中位时间6年。随访自手术日起，以死亡、复发或转移日为观察终点。90例患者中有18例死亡，72例存活，其中包括7例转移，1例复发。回顾性分析90例患者的发病年龄、肿瘤大小、绝经状态、淋巴结转移情况、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)情况、病理分期等。

　　1.4 结果判定 与1位病理医师一起独立观察每张切片10个具有代表性的高倍视野，STAT5 蛋白阳性反应为黄到棕黄色细小颗粒，定位于细胞核和细胞质。按照阳性细胞的数量分级：STAT5 阳性细胞数少于观察细胞数的5%者为阴性; 阳性细胞数≥5%者为阳性，其中阳性细胞数占5%～24%者为+，阳性细胞数占25%～50%者为++，阳性细胞数大于50%者为+++。

　　1.5 统计学处理 实验数据以SPSS 12.0软件进行统计学分析，样本率的比较采用χ2检验，等级资料的比较采用秩和检验，P<0.05为有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 STAT5在乳腺癌组织中的表达及与临床病理因素的关系 本组STAT5在10例正常乳腺组织中均为阴性表达，90例乳腺癌标本中66例呈STAT5 阳性表达，表达率为73.3%(66/90)，其与临床病理因素的关系见表1。 由表1可知，STAT5的阳性表达率在不同肿瘤大小、淋巴结转移数、肿瘤的TNM分期及ER和PR表达情况之间的差异有显著性(P<0.05)。表1 STAT5表达与乳腺癌病理学特征的关系

　　2.2 STAT5表达及各临床因素与生存率的关系 见表2。本组90例均有完整的随访资料，改良根治术后总体3年、5年生存率分别为88.9%(80/90)、 80.0%(72/90)。STAT5四组不同表达水平的生存率无统计学差异(P>0.05)，而不同年龄、绝经状态、肿瘤大小、淋巴结转移数及肿瘤的TNM分期之间生存率的差异有统计学意义(P<0.05)。表2 STAT5表达及各临床因素与生存率的关系

　　3 讨 论

　　STAT5是一类能与磷酸化的酪氨酸Src同源区2(SH2)结合的蛋白质分子，相对分子质量约为94000，其编码基因位于人类染色体17q11.2，是STAT 家族中的重要成员，广泛表达于不同类型的细胞和组织中，参与细胞的生长、恶性转化及凋亡等功能的调控。STAT5包括由不同基因编码的 5A和5B两个亚型，分别含有794和786个氨基酸[3]。在正常组织中由于某些细胞外信号的刺激，STAT5的酪氨酸基团被磷酸化而激活，从胞质易位入胞核后识别特异的DNA片段并与之结合，发挥基因转录调控作用，但随着酪氨酸的去磷酸化而很快失活返回胞质[4]。在正常乳腺组织中，STAT5 蛋白多以无活性的状态存在于静止期细胞的胞质中，而在乳腺癌细胞中STAT5则被持续活化并易位入核内[5]。Yamashita等[6]报道STAT5蛋白在4种乳腺癌细胞系中均有不同程度的组成性活化，并由于 STAT5的活化而诱导乳腺癌细胞增殖加快。当STAT5不适当活化时，通过引起下游靶基因如cyclin D1、c-myc等过表达而改变了细胞周期进程，促进细胞间的转化并阻断细胞凋亡，以渐进方式诱变细胞癌性转化[3]。陈晶等[7,8]研究发现低分化乳腺癌组织中STAT5蛋白表达水平高于高分化乳腺癌，提示STAT5可能与乳腺癌的分化有关;同时研究还发现Ⅱ期、Ⅲ期乳腺癌中STAT5蛋白表达水平高于Ⅰ期乳腺癌，提示STAT5过度活化可能在乳腺癌的发生、发展中起重要作用，并且与乳腺癌的恶性潜能密切相关。本组研究STAT5在10例正常乳腺组织中均为阴性表达，在乳腺癌标本中STAT5阳性表达率为73.3%(66/90)，其表达水平在不同肿瘤大小、淋巴结转移数、临床分期和ER及PR状态之间的差异有显著性 (P<0.05)，说明STAT5参与乳腺癌的发生、发展，并在乳腺癌的转移中起着重要的作用。

　　目前，有关STAT5表达与乳腺癌患者生存率的关系无明确结论。本组中改良根治术后总体3年、5年生存率分别为88.9%(80/90)、80.0%(72/90);其中STAT5阴性患者3年、5年生存率分别为95.8%(23/24)、95.8%(23/24)，STAT5阳性患者3年、5年生存率分别为86.4%(57/66)、74.2%(49/66)。本组中STAT5阴性患者共24例，死亡1例。但是STAT5阴性组中TNM分期在0、Ⅰ、Ⅱ期的患者有24例，淋巴结未转移者有24例，因此本组生存率高。STAT5阳性组和阴性组生存率无统计学差异，可能是因为STAT5阴性组的死亡数过少，无法准确评估STAT5阴性组的生存率，这需要以后更大样本的实验来得到更准确的实验数据。

　　本组研究了90例乳腺癌患者的各临床指标与预后的关系，结果显示影响乳腺癌预后的主要因素有年龄、绝经状态、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结状态。这将有助于准确地判定乳腺癌患者的预后，为进一步个体化综合治疗乳腺癌奠定理论基础。笔者还认为[9]联合检测乳腺癌PCNA、c-erbB-2、CD44V6的表达，有助于预测肿瘤的恶性程度、雌孕激素受体的状况、腋窝淋巴结的状态等，从而对判断肿瘤对激素治疗和化疗的敏感性、选择合适的辅助治疗及判断其预后有一定帮助。

　　虽然乳腺癌的发生、发展是由多基因参与并经多步骤形成的复杂生理过程，但STAT5在乳腺癌的发生中发挥着重要作用。已证实STAT5在乳腺上皮细胞中不适当活化可诱发乳腺癌。在此基础上，通过对STAT5酪氨酸磷酸化的分析，可为临床提供方便的诊断方法。同时，利用干扰STAT5信号转导途径中任一靶点或直接阻断STAT5上游途径的方法来抑制肿瘤细胞生长和诱导细胞凋亡，将为今后乳腺癌的治疗及药物分析筛选提供新的途径[10]。

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　　[10] Bowman T, Garcia R, Turkson J, et al. STATs in oncogenesis [J]. Oncogene， 2000，19(21):2474-2488.